噻托溴铵文献报告课件

噻托溴铵对哮喘模型小鼠气道炎症与气道重塑的治疗作用Effectoftiotropiumbromideonairwayinflammationandremodelinginamousemodelofasthma

From：ClinicalandExperimentalAllergy前言

支气管哮喘是一种有嗜酸性粒细胞，肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的以气道慢性炎症为特征的疾病。这种气道炎症是易感者对各种激发因子具有气道反应性，并可引起气道狭窄，表现为反复发作性的喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等症状。其存在的病因杂而多，包括遗传的、环境的、药物的、精神的等等。前言哮喘的发病机制归结为四种：①变态反应②气道炎症③气道高反应性④神经机制研究背景一、哮喘特征：①气流阻塞②气道炎症性③气道高反应性

二、炎症细胞：①肥大细胞②淋巴细胞③嗜酸性粒细胞研究背景一、哮喘的典型活性介质：①IL—4②IL—5③IL—13

④IFN—γ⑤TGF—β二、活性介质与哮喘的关系：①与Th1细胞的关系②与Th2细胞的关系③与嗜酸性粒细胞（EOS）的关系研究背景

噻托溴铵(商品名思立华)是目前世界上推崇的新型抗胆碱能药物，它是一种季铵类抗胆碱能类支气管扩张剂，对支气管扩张作用可持续24小时，明显改善喘鸣及气促的症状，显著提高肺功能。因而，本实验的目的是评估噻托溴铵是否可以抑制哮喘模型小鼠变态反应导致的急性与慢性气道炎症、Th2类型细胞因子产生以及气道重塑。实验流程图检测指标动物造模记录并分析结果

给药↘↓↓↓↓BALF肺病理气道反应离体细胞PBMCs急性和慢性气道炎症小鼠模型的建立↑Day0↑Day12↑Day0↑Day12↑↑↑Day21-23Day23-26↓↓↓↓↑↑↑↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↑↑↑Day21-63↑↑↑↑<SensitizationwithOVA>50μg/mouseOVAi.p.↓<TreatmentwithTiotropium>0.1mM(50μg/mL)Inhalationfor3min/mouse

↑<ChallengewithOVA>2.5%OVAinhalationfor20min/mouse气道反应的测量操作流程：麻醉小鼠→插管→装箱→测量→记录结果计算公式：(吸入5-羟色胺后的气道阻力/

吸入前的气道阻力)×100%肺组织病理分析

操作流程：提取BALF后→打开胸腔→剪取肺组织→

PBS浸泡过夜→乙醇脱水→包蜡→染色显微镜观察→分析指标—上皮细胞增生、气道平滑肌增生、胶原纤维沉积、M3受体脾细胞因子的测量操作流程：分离脾细胞→悬浮培养→添加噻托溴铵→

OVA（100μg/mL)刺激→获取培养上清液→测量细胞因子培养液成分：RPMI1640、胎儿牛血清和抗生素细胞悬浮浓度：4.0×106个/mL.人类外周血单核细胞因子的测量操作流程：获取患者全血→分离PBMC

→细胞培养→植物血凝素（PHA）激发→噻托溴铵治疗→获取细胞培养液上清→

ELISA测量IL—5与IL—13分离方法：运用淋巴细胞分离器采取密度梯度离心法实验结果一、对气道炎症反应的影响①噻托溴铵能有效地防止变态反应导致的急性炎症反应②噻托溴铵能同样有效地抑制慢性哮喘模型小鼠的炎症反应实验结果三、对气道重塑的作用气道重塑涉及到上皮细胞增生、嗜酸性粒细胞募集、

α-肌动蛋白增多、气道纤维化等病理改变，因而，可以从这几项指标检测噻托溴铵对气道重塑的改善作用。同时由于M3受体的发现，为阐明其作用机制提供可能的依据。实验结果四、慢性哮喘模型小鼠气道高反应性气道高反应性是哮喘的典型特征，尤其在慢性哮喘中表现明显，这可通过测量气道阻力来反映是否具有气道高反应性。实验结果六、对患者外周血单核细胞因子的含量的影响

选取哮喘典型的细胞因子IL—5与IL—13，从临床患者的角度直接考察噻托溴铵的治疗作用。讨论一、改善气道重塑的可能作用机制

实验结果已证实噻托溴铵能抑制急性与慢性气道炎症、降低Th2类型细胞因子水平，而Th2类型细胞因子能直接诱导上皮细胞增生，同时，上皮细胞增生是气道重塑的重要因素，因而其改善气道重塑可能与其抑制T细胞分泌Th2类型细胞因子有一定的关联。另外，TGF-β能诱导成纤维细胞增殖、分化以及肌纤维母细胞外基质蛋白的合成、粘蛋白的形成。因此,降低TGF-β1的生成，也可能与噻托溴铵改善气道重塑有直接或间接的关系。

讨论二、对Th2类型细胞因子可能作用机制体内与体外实验已证实噻托溴铵对IL—5、IL—13与IFN—γ具有直接抑制作用，但IL—4的体内体外实验却有明显的区别，这表明其并非直接作用于IL—4，而IL—4在哮喘发生发展中具有重要的调控作用，因而需要进一步研究其对IL—4的作用机制。另外，血浆中IgE浓度变化实验已证实噻托溴铵的抗炎作用只局限于气道，并非全身。还有乙酰胆碱能促进细胞因子的产生，但体外实验是在缺乏乙酰胆碱下进行的，这表明抑制T细胞信号传导并不只局限于拮抗受体作用。讨论三、与M3受体的作用实验已证实模型小鼠的M3受体出现在气道平滑肌细胞、炎症细胞、上皮细胞以及嗜酸性粒细胞上，由于M3受体的辅助，噻托溴铵对气道炎症具有广谱作用，因此，这促使我们去研究噻托溴铵