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文档简介
基因的功能验证陈璟第1页/共23页基因组学包括3个不同的亚领域结构基因组学(structuralgenomics)功能基因组学(functionalgenomics)比较基因组学(comparativegenomics)基因组学概念第2页/共23页
一是通过增强其表达,取得表达产物进行研究,增强其表达因为不能反映基因产物的真实表达情况,而逐渐被抛弃
基因的异源表达,在近缘物种类表达目的基因。
二是减弱或者终止其表达,观察整体功能的变化,进而推测相应的基因功能第3页/共23页DNA-BindingDomainBaitProteinPreyProteinTranscriptionActivatingRegionReporterGeneDNA-BindingSite酵母双杂交技术反式作用因子中的两个功能结构域
DNA结合域转录激活结构域第4页/共23页鉴定新的蛋白与蛋白相互作用鉴定蛋白级联底物
鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响在已知的相互作用中鉴定干扰蛋白质(反向双杂交系统)酵母双杂交系统应用第5页/共23页利用酵母作为真核蛋白相互作用的模型第6页/共23页第一相电泳根据蛋白质的不同等电点分离各种蛋白质,即等电聚焦法(isoelectriefocusingIEF)第二向电泳根据蛋白质的不同分子量进一步分离等电点相同的蛋白质,即SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)第7页/共23页双向凝胶电泳技术是目前蛋白质组研究的主要技术之一,双向电泳根据等电点和分子量可一次性分离数千种蛋白质,经染色后蛋白质再PAGE上可形成密度不同、分布不均的复杂点图谱。如何有效的对双向凝胶电泳图像分析,如何对图谱上的蛋白质点进行检测、定量、比较、分析和归类,挖掘有价值的蛋白质点的信息是双向电泳分析软件所要解决的问题。第8页/共23页第9页/共23页第10页/共23页第11页/共23页第12页/共23页第13页/共23页差异点:第14页/共23页蛋白质的分离与鉴定蛋白质经双向电泳分离及图像分析后,将蛋白质斑点胶块切下,用蛋白酶通常用胰蛋白酶)对蛋白质样品进行胶内酶解,获得肽片段
上质谱分析蛋白质成分第15页/共23页质谱基础
样品离子源质量分析器离子检测器固体液体蒸汽形成离子(带电分子)电离质量分选(过滤)检测根据m/z分选离子数据处理质谱检测离子基本步骤:1.样品离子化2.根据质量(m/z)不同分离离子3.检测每种质量离子的数目4.收集、处理数据得到质谱图第16页/共23页组织切片或印片原位质谱分析技术两级飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF)傅里叶转换回旋共振质谱(FTMS)表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)联合技术精确鉴定蛋白质第17页/共23页第18页/共23页第19页/共23
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