啤酒厂化验室设计

广西工业职业技术学院设计说明书课题名称：啤酒厂微生物实验室设计姓名：廖国旭专业：食品药品监督管理班级：药监1031班起止日期：指导教师：韦丽前言设计化验室目的在于对啤酒原辅料及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量，维护消费者权利，为企业提供有力销售保障，使企业强有力的立足于世界市场。化验室基本任务是对啤酒原辅料、半成品及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量。化验室功能是为啤酒的质量提供有效的保障，让啤酒达到消费者可接受水平，保证啤酒质量，通过工作人员运用精密的检测仪器设备对啤酒进行检验与验证，以合格的身份进入销售市场，让消费者买的放心喝得开心。化验室主要由理化实验室、微生物室、值班室、办公室、仪器室、天平室、更衣室、洗涮室、缓冲间、无菌室、准备室。摘要对于啤酒生产来说，质量检验的重要性是不言而寓的。化验室应该摆脱仅仅进行化验的狭隘定义，而要为啤酒生产的各个工序提供指导，对啤酒质量进行有效的控制。为保证分析结果的准确性，就要从多个方面对化验室进行建造，建立合理完善的管理制度。

本分析化验室主要担任本厂所有原料、半成品及成品的检测,起到控制和管理生产,保证和监督本厂生产的味精的质量和卫生指标的作用,也为开发新产品、制定合理的工艺参数提供数据依据.本分析化验室主要包括:办公室、仪器室、试剂室、理化实验室、准备室、微生物检验室.

啤酒厂分析化验室的主要任务是对原材料分析、半成品化验分析、成品化验分析起到控制和管理生产，保证和监督食品质量和卫生指标作用。在成品成厂时，必须对出厂的各规格啤酒，经过检验，各理化指标、技术质量均要符合卫生标准，以保证人民健康和商品信誉。本分析化验室的整体目标是完成对原料、辅料、半成品及成品的检测和质量控制，保证产品的质量。并对新产品、新工艺的开发。目录1.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准······················41.2原料的检测项目及标准······································41.3半成品检测项目及标准······································41.4成品检测项目及标准········································52.啤酒原料、半成品及成品的检测方法····························62.1啤酒原料的检测方法········································62.2啤酒半成品的检测方法···································72.3啤酒成品的检测方法······································7-233.试剂和仪器清单·············································243.1试剂清单·················································253.2玻璃仪器清单············································263.3设备清单················································273.4化验室的月试剂消耗量······································274.化验室的平面布置图及设计说明································284.1化验室设置···············································294.2化验室的平面布置图·······································304.3设计说明（包括水、电、平面布置说1明）······················315.化验室人员配制和组织管理····································326.化验室的岗位责任制··········································347.参考文献····················································368.谢辞···················································361.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准1.1啤酒半成品检测项目及标准序号微生物检验检测标准1致病菌、厌氧菌不得检出2乳酸菌数≥1×106cfu/mL1.2啤酒成品检测项目及标准序号微生物检测项目检测标准1菌落总数≤502大肠菌群≤33致病菌不得检出2.啤酒半成品及成品的检测方法2.1半成品2.1.1酵母死活细胞（死亡率）的测定活的菌体，由于新陈代谢不停的进行着，细胞内氧化还原值（rH）较小，而还原力强。这时如有像美蓝那样的无毒染料进入活的细胞内，即被还原脱色：而死的细胞代谢停止，无还原力，即被染成蓝色。美蓝无毒，且能为活细胞还原成无色故多用于区别细胞的死活。但美蓝浓度、作用时间等都用影响，因此以制片后五分钟内计算的死细胞数为据。检查方法：取0.1%美蓝一滴，置载玻片中央，然后去酒母液少许和入美蓝液中，搅拌均匀，加盖玻片，在显微镜下检查数已变蓝的细胞及未变蓝的细胞（可数5~6个视野的细胞数），计算死细胞占总细胞数的百分率。死亡率的计算：酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞数的百分数，在显微镜下数一定的细胞数，并记录死活细胞数，按下式计算死亡率死亡率=b/a%2.2成品2.2.1志贺氏菌检验范围本标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella)的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a恒温培养箱：36℃±1℃；b冰箱：2℃～5℃；c膜过滤系统；d厌氧培养装置：41.5℃±1℃；e电子天平：感量0.1g；f显微镜：10×～100×；g均质器；h振荡器；i无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；j无菌均质杯或无菌均质袋：容量500mL；k无菌培养皿：直径90mm；lpH计或pH比色管或精密pH试纸；m全自动微生物生化鉴定系统。培养基和试剂a志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素。b麦康凯（MAC）琼脂。c木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂。d志贺氏菌显色培养基。e三糖铁（TSI）琼脂。f营养琼脂斜面。g半固体琼脂。h葡萄糖铵培养基。i尿素琼脂。jβ-半乳糖苷酶培养基。k氨基酸脱羧酶试验培养基。l糖发酵管。m西蒙氏柠檬酸盐培养基。n粘液酸盐培养基。o蛋白胨水、靛基质试剂。p志贺氏菌属诊断血清。q生化鉴定试剂盒。操作步骤增菌以无菌操作取检样25g（mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。于41.5℃±１℃，厌氧培养16h～20h。分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定初步生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36℃1℃培养20h～24h，分别观察结果。凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。0生化试验及附加生化试验1生化试验用中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即β-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的β-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2。表2志贺氏菌属四个群的生化特征生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌ß-半乳糖苷酶－a-－a+尿素－－－－赖氨酸脱羧酶－－－－鸟氨酸脱羧酶－－－b+水杨苷－－－－七叶苷－－－－靛基质－/＋(＋)－/＋－甘露醇－＋c＋+棉子糖－＋－＋甘油(＋)－(＋)d注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性；（+）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。2附加生化实验由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenicE.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36℃培养24h～48h)。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。表3志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌大肠埃希氏菌A-D菌葡萄糖铵－－－－＋＋西蒙氏柠檬酸盐－－－－dd粘液酸盐－－－d＋d注1：+表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。注2：在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D（碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。3如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据表3的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。4结果报告综合以上生化试验的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出志贺氏菌。2.2.3沙门氏菌检验范围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1）冰箱：2℃～5℃。2）恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。3）均质器。4）振荡器。5）电子天平：感量0.1g。6）无菌锥形瓶:容量500mL，250mL。7）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。8）无菌培养皿：直径90mm。9）无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。10）无菌毛细管。11）pH计或pH比色管或精密pH试纸。12）全自动微生物生化鉴定系统。培养基和试剂1）缓冲蛋白胨水（BPW）。2）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。3）亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。4）亚硫酸铋（BS）琼脂。5）HE琼脂。6）木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。7）沙门氏菌属显色培养基。8）三糖铁（TSI）琼脂。9）蛋白胨水、靛基质试剂。10）尿素琼脂（pH7.2）。11）氰化钾（KCN）培养基。12）赖氨酸脱羧酶试验培养基。13）糖发酵管。14）邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONΜG）培养基。15）半固体琼脂。16）丙二酸钠培养基。17）沙门氏菌O和H诊断血清。18）生化鉴定试剂盒。操作步骤.1前增菌称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。.2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL，转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。.2分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。.3生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA＋（－）＋（－）＋可疑沙门氏菌属KA＋（－）＋（－）－可疑沙门氏菌属AA＋（－）＋（－）＋可疑沙门氏菌属AA＋/－＋/－－非沙门氏菌KK＋/－＋/－＋/－非沙门氏菌注：K：产碱，A：产酸；＋：阳性，－：阴性；＋（－）：多数阳性，少数阴性；＋/－：阳性或阴性。接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h，以备必要时复查。表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应序号硫化氢（H2S）靛基质pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶A1＋－－－＋A2＋＋－－＋A3－－－－＋/－注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性。反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶判定结果－－－甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）－＋＋沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性）＋－＋沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：＋表示阳性；＋表示阴性。反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3：补做ONΜG。ONΜG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别。表5沙门氏菌属各生化群的鉴别项目ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ卫矛醇＋＋－－＋－山梨醇＋＋＋＋＋－水杨苷－－－＋－－ONΜG－－＋－＋－丙二酸盐－＋＋－－－KCN－－－＋＋－注：＋表示阳性;－表示阴性。如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。结果与报告综合以上生化试验的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。2.2.4金黄色葡萄球菌检验设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃。、冰箱：2℃～5℃、恒温水浴箱：37℃～65℃、天平：感量0.1g、均质器、振荡器。无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。无菌培养皿：直径90mm。注射器：0.5mL。pH计或pH比色管或精密pH试纸。培养基和试剂10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤。7.5%氯化钠肉汤。血琼脂平板。Baird-Parker琼脂平板脑心浸出液肉汤(BHI)。兔血浆。稀释液：磷酸盐缓冲液。营养琼脂小斜面。革兰氏染色液。无菌生理盐水操作步骤.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。.2增菌和分离培养将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。.3鉴定染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm～1μm。血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面，36℃±1℃培养18h～24h。取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入BHI培养物0.2mL～0.3mL，振荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培养18h～48h，重复试验。葡萄球菌肠毒素的检验：未检出金黄色可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素。.4结果与报告结果判定：符合5.2.3、5.3，可判定为金黄色葡萄球菌。结果报告：在25g（mL）样品中检出或葡萄球菌。2.2.4菌落总数样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内培养计数各平板菌落数计算菌落总数每皿中加入15mL～20mL平板计数琼脂培养基，混匀报告用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。培养琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃℃培养48h±2h。水产品30±1℃培养72h±3h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。结果与报告若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。计算：…………………（1）式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。菌落总数的报告菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。2.2.5大肠菌群测定范围木标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。仪器和试剂冰箱:0℃-4℃。恒温培养箱:36℃士1℃。恒温水浴锅:46℃士1℃.显微镜:10X~100X。均质器或灭菌乳钵。架盘药物天平:0g-500g,精确至0.5g.灭菌吸管1mL(具0.01mL刻度),10mL(具0.1mL刻度)。灭菌锥形瓶:500mL.灭苗玻璃珠:直径约5mm.灭菌培养皿:直径90mm.灭苗试管:16mm×160mm.灭菌刀.剪子、摄子等。培养基和试剂乳糖胆盐发酵管。伊红美蓝琼脂平板。乳糖发酵管。EC肉汤。磷酸盐缓冲液.0.85%灭菌生理盐水.革兰氏染色液。操作步骤.1检样稀释以无菌操作将检样25g（mL)放于含有225ml，灭菌生理盐水或其他稀释液的灭茵玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000r/min~10000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注人含有9ML灭菌内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递一次，换用1支1ml灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对检样污染情汉的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种三管。.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL以及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管，置36℃士1℃温箱内，培养24h士2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为人肠菌群阴性，如有产气省，则按下列程序进行。.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃士1℃温箱内，培养18h-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。.4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃士1℃培养箱内培养24h士2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值..6粪大肠菌群(Faecalcoliform)用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见4.2)转种于EC肉汤管内，置44.5℃士0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24h士2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置培养18h-24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）粪大肠菌群的MPN值（见表1）。表1大肠菌群最可能数（MPN）检索表阳性管数MPN100mL（g）95%可信限1mL（g）×30.1mL（g）×30.01mL（g）×3下限上限000000000123<30306090<590000011110123306090120<51300000222201236090120160000033330123901301601901111000001234070110150<51020021011111111012370110150190103023036011112222012311015020024030360111133330123160200240190222200000123901402002601030360370222222220123210280350420401004701500222233330123290360440530333300000123230390640950407015012001300380033332222012343075012001600701403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000≥240003607101500130002400048000注1：本表采用3个稀释度[1mL(g)、0.1mL(g)和0.01mL(g)]，每稀释度三管。注2：表内所列检样量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1mL、0.01mL（g）和0.001mL(g)时，其余可类推。3.试剂和仪器清单3.1试剂清单试剂名称规格数量蔗糖500g2葡萄糖500g2D—果糖25g2乳糖500g2淀粉酶250g2胰蛋白酶250g2琼脂粉100g2牛肉膏500ml2酵母膏500ml2大豆蛋白胨500ml2蛋白胨500ml2胰蛋白胨500ml2胰酪胨500g2植物蛋白胨500g2多胨500g2氢氧化钠500g2品红25g4异戊醇500ml2乙醇500ml2石蕊25g3乙醚500ml2浓硫酸500ml2甲基红25g4硫酸铜、500g4硫酸钾500g4硼酸250ml4溴甲酚绿25ml2酚酞25ml3盐酸500ml3磷酸500ml23.2玻璃仪器清单仪器名称规格（ml）需要量（个）烧杯100104004锥形瓶250105005漏斗2分液漏斗2镊子4吸管110210510105205255玻璃棒5灭菌刀或剪子5橡胶管5试管18*18010烧瓶5003酸、碱式滴定管50各3量筒102502100525055002温度计100℃5酒精灯5表面皿中号5平皿90cm100容量瓶10450510010250550023.3设备清单仪器名称型号数量双数显振荡培养箱BS-1E型3烘箱SX2-2.5-10型5高压蒸汽灭菌锅MLS-3750型3干热灭菌器MOV-112S90L/AT型5自动菌落计数仪迅数AS1型5微生物采样器JWL-I型5卧式超低温保存箱MDF-293型5冰箱西门子KG23E6710°C-4°C生化培养箱SPX-250B型205L4014±1°C，25°C～60°C生物显微镜XS2-3G40~1600X2004140143干燥消毒箱GRX202PH计33.4化验室的月试剂消耗量例：以金黄色葡萄球菌检验中的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量计算，每次实验所消耗的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为225ml,每周做一次检测项目的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为225ml,则每月使用的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为量为900ml，规格为1000ml瓶，折合得使用10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤为0.9瓶.4.化验室的平面布置图及设计说明4.1化验室设置设计的化验室包括：微生物化验室、办公室、缓冲间、无菌室、天平室、设备室、更衣室。4.2化验室平面图4.3设计说明4.3.1微生物化验室布局微生物化验室是按2：1的比例尺来进行设计的。整个微生物化验室总面积为（长3000cm×宽2000cm），化验室操作台坐落在微生物化验室的西南角，操作台（长1234cm×宽276cm），操作台两边各设2个水槽，操作台上配有均质器、水浴锅、通风橱（长334cm×宽276cm），有毒或刺激性药物的取用在通风橱内操作，操作台旁电源开关一组，电插座2个。整个化验室的所有门都是防火防腐蚀的,门统一规格为141cm,向内推开式，化验室内各功能室采用隔板做墙隔开，以减小占地面积,隔板也为防火防腐蚀的，采用耐火或不易燃材料建筑；电路电线埋入墙体内，以免遭氧化及腐蚀。操作区.1整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方,为了减少粉尘流动,防止交叉污染,操作区应与外界分开。操作区地面用专用拖把每天拖1次,每周用消毒剂擦洗一次。每天早上工作前,用紫外线照射30min，或每天工作后,用紫外线照射60min，对整个操作区进行消毒,下午工作结束后用消毒液消毒工作台面,以保证工作环境的安全清洁。.2光线：细菌培养的细小菌落及血清试验凝聚颗粒的观察,都需要有充足的光线。操作区除设置常规照明灯外，还必须安装操作台灯,以保证试验结果的正确判断。.3温度和湿度：由于无菌操作的要求,实验过程中经常使用酒精灯，因此,微生物学实验室不能安装吊扇。为了达到实验所需的适宜温度,尤其是满足某些仪器对温度湿度的要求,实验室应安装空调。.4污染物处理：操作区备有消毒缸,用于处理沾有活菌的玻片等污染物品。检验剩余的标本及使用过的带菌平板、试管均须集中地点安全防止，经消毒灭菌处理后再洗涤或丢弃。无菌室布局无菌室面积为（长782cm×宽925cm），无菌室温度控制在17℃～25℃；温度波动小于0.5℃/h；湿度50～75%，无菌室完全封闭，进出无菌室至少要经两道门,中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开的窗口，用于传递器具。第一缓冲间面积为(长782cm×宽545cm)，第二缓冲间面积为（长782cm×宽230cm）,最后才进到无菌操作室,无菌操作室内还设有无菌操作台（长782cm×宽275cm）,位于室中间，台面材料为具有耐酸，耐碱以及刚度好的塑料材料，地板为防滑地被砖、洁净、干燥，室内还应设有空调,灭火器。.1无菌室必须保持整洁，无菌室为10000级（局部100级）清洁区，采用紫外灯配合臭氧灭菌，工作人员进入无菌室应换专用鞋、专用衣。无菌室使用前必须用紫外线消毒30min，操作结束后清洁台面，再用紫外线消毒30min。定期用乳酸或甲醛熏蒸。4.3.2办公室布局办公室面积为（长782cm×宽725cm）,应设有办公桌(长260cm×宽155cm)、冰箱（长343cm×宽171cm）、空调、灭火器、桌上摆有电脑、打印机以及相关的检验书籍和文件等，办公桌旁设电源开关一组，电插座6个。4.3.3天平室布局天平室面积总为（长741cm×宽750cm），天平室有双层玻璃和窗帘，室内设有灭火器、空调、天平台（长423cm×宽316cm）,各天平之间有合理的间距,各不影响,天平台旁设电源开关一组，电插座1个。4.3.4设备室布局设备室面积为（长741cm×宽675cm），内设有灭菌锅、冰箱、低温保存箱、培养箱,还设有电源插座各一个。4.3.5更衣室布局更衣室分为男女更衣室,总面积为（长903cm×宽741cm），男更衣室（长460cm×宽354cm）,女更衣室（长460cm×宽387cm），男女更衣室间,各设有小型衣柜（长460cm×宽130cm），衣杆、水龙头1个、吹风器1台以及酒精消毒器1台，对工作人员进行工作前消毒。4.3.供电化验室建筑的供电应留有足够的负荷余量，设施应安全可靠，一般采用双路供电，不具备双路供电条件的，应设置自备电源。有特殊要求的，应配备不间断电源。各个实验室配置三相(338v)和单相(220v)供电路线、设置电源总开关、总开关上均安装上漏电保护措施（对电冰箱、等长期运行电器不受总开关控制），稳定供电电压吗，配置足够供电电源插座，电线路采用护套暗铺，且在走廊配置防爆灯等。为保障实验室的正常工作，电源的质量、安全可靠性及连续性必需保证。一般用电和实验用电必须分开，对一些精密、贵重仪器设备要求提供稳压、恒流、稳频、抗干扰的电源，必要时须建立不中断供电系统，还要配备专用电，如不间断电源(UPS)等。4.4供水供水要求为自来水和专用水，水压不够要设有水箱。排水中若有酸性或碱性物质，要标明浓度和数量；若有放射性物质要注明有多少种放射性物质和浓度。4.5通风 实验室经常由于实验时间长，人员多和实验过程中产生一些有害气体，造成空气污浊，对人体不利。为了防止实验室工作人员吸入或咽入一些有毒的、可致病的或毒性不明的化学物质和有机气体，实验室中应有良好的通风，必要时应设空调。5.化验室人员配制和组织管理5.1人员配置：化验室主任、技术负责人、质量负责人、仪器设备管理负责人、试剂管理负责人、检验人员（共10人）5.2化验室人员管理5.2.1所有化验员需培训考核合格后持证上岗，熟悉化验专业知识。5.2.2掌握采取样品的性质，熟悉采样方法，会使用采样工具。5.2.3掌握分析所用各种标准溶液的配置、储存、发放程序。5.2.4掌握动火分析方法、指标、采样时间、样品保留等必备知识。5.2.5掌握控制分析、产品分析、原料分析方法以及控制指标、结果判断。5.2.6掌握包装物检查管理规定、计量检斤规程及重量计算方法。5.2.7化验员需认真填写原始记录、检验报告，能够独立解决工作中的一般技术问题。5.2.8严格按程序和实施细则进行取样，按操作规程使用仪器设备，对所使用的仪器设备做到按要求定期保养，使用后及时填写使用情况记录。5.2.9努力专研业务，参加各项培训和学术交流，积极参加对比试验，不断提高检验水平。5.2.10检验工作要做到安全、文明、卫生规格化，做好安全保密工作，遵章守法，积极完成各项检验工作。5.3仪器管理要求5.3.1精密仪器的管理精密仪器应按其性质、灵敏度、精密程度，固定放置的房间和位置，不得随意挪动，放置精密仪器的房间应与化学处理室隔开。以防止腐蚀性气体及水汽腐蚀仪器。烘箱、高温炉应放置在不燃的水泥台或坚固的铁架上，天平及其它精密仪器应放在防震、防晒、防潮、防腐蚀的房间内，小件仪器用完收藏仪器柜中。精密仪器应设专人保管，建立技术档案，装入全部技术资料，如：说明书、调试记录、检定记录、维修记录等情况，贵重的精密仪器（电子天平）每使用一次要签名登记一次，对某种仪器没有使用过的人，最初几次使用应该有专人指导，不能自己拔弄。精密仪器的购置、拆箱、验收、安装、调试都应专人负责。未经批准不得任意拆卸。精密仪器均须标明责任保养人。保养人应按仪器的保养要求及时做好仪器的清洁保养工作。精密仪器使用、维护保养严格按相关作业指导书进行。5.3.2玻璃仪器的管理按玻璃仪器品种、规格、用途建立玻璃仪器使用台帐。台帐中应对玻璃仪器的收发、库存、领用、破损实行登记制度，台帐的管理指定专人负责，并每月进行汇总。对汇总结果异常的应说明原因。玻璃仪器按品种、规格进行分类存放并标识。标识的内容应包括品种、规格、数量、责任人等，玻璃仪器的领用由管辖该玻璃仪器的责任人负责和盘存，并将盘存结果每月报告一次对盘存异常的应说明原因。玻璃仪器为易碎品，使用、洗涤时应轻拿轻放，以防破碎。玻璃仪器的使用、校正、洗涤和干燥按相关作业指导书进行。5.3.3化学试剂的管理固体试剂和液体试剂应分开存放，固定试剂应按分类编号顺序存放和造册，以便查找。易燃易爆试剂应贮于铁柜（壁厚1mm以上）中，柜子的顶部都有通风口。严禁在化验室存放大于20L的瓶装易燃液体。易燃易爆药品不要放在冰箱内（防爆冰箱除外）。

相互混合或接触后可以产生激烈反应、燃烧、爆炸、放出有毒气体的两种或两种以上的化合物称为不相容化合物，不能混放。这种化合物系多为强氧化性物质与还原性物质。

腐蚀性试剂宜放在塑料或搪瓷的盘或桶中，以防因瓶子破裂造成事故。

要注意化学药品的存放的期限，一些试剂在存放过程中会逐渐变质，甚至形成危害。

药品柜和试剂溶液均应避免阳光直晒及靠近暖气等热源。要求避光的试剂应装于棕色瓶中或用黑纸或黑布包好存于暗柜中。

发现试剂瓶上标签掉落或将要模糊时应立即贴好标签。无标签或标签无法辩认的试剂都要当成危险物品重新鉴别后小心处理，不可随便乱扔，以免引起严重后果。

化学试剂定位放置、用后复位、节约使用，但多余的化学试剂不准倒回原瓶。5.4化验室安全管理5.4.1所有药品、标样、溶液都应标签，绝对不能在容器内装入与标签不相符的物品。5.4.2禁止使用化验室器皿盛装食物，也不能用茶杯、食具盛大装药品，更不能用烧杯当茶具使用。5.4.3稀释硫酸时，必须在硬质耐热烧杯或锥形瓶中进行，只能将浓硫酸慢慢注入水中，边倒边搅拌，温度较高时，应等其冷却或降温后再进行，严禁将水倒入硫酸中。5.4.4开启易挥发液体试剂之前，先将试剂瓶放在自来水中冷却几分钟，开启时瓶口不要对人，最好在通风橱中进行。5.4.5易燃溶剂加热时，必须在水浴中进行，避免明火。5.4.6装过强腐蚀性、可燃性、有毒或易爆物品的器具，操作者应亲手清洗干净，以防危及他人安全。5.4.7移动、开启大瓶液体时，不能直接放在水泥地板上，最好用纸板或其他垫板垫好，严禁开瓶时锤砸、敲打，以防破裂。5.4.8取下正在沸腾的溶液时，应用瓶夹类先轻摇动以后取下，以免溅出伤人。5.4.9将玻璃棒、玻璃管、温度计等插入或拔出胶塞，胶管时均应垫有棉布。且不可强行插入或拔出以免折断刺伤人。5.4.10开启高压气瓶时应缓慢，并不得将出口对人。配制药品或试验中能放出HCN、NO2、H2S、SO3、Br2、NH3及其他有毒和腐蚀性气体时应通风橱中进行。化验室中应备有烫伤药品等，消防器材和劳保用品。要建立安全制度和安全登记卡，健全岗位责任制，每天下班前检查水、电、窗、门等，确保安全。操作压力设备或其他检测仪器时，要严格按照作业指导书的要求进行，用电应遵守公司《安全用电规程》进行。5.5检验过程的管理5.5.1对样品的采集基本要求是采取的样品应具有代表性和有效性，做好标记。5.5.2检验过程中对试剂的添加需谨慎，添加时不能混淆，需做好标记。根据检验方法要求进行准备，检查仪器设备、环境条件的样品状况。5.5.3检验过程中出现的现象和数据要及时做好记录，因各种原因（如停电、停水、仪器发生故障、样品问题等）造成检验工作中断且影响检验质量，应做好相应记录向上级汇报。6.化验室的岗位责任制6.1化验室的主要负责人职能6.1.1在技术处的领导下，对化验室生产、行政管理全面负责。确保及时、准确地提供检验数据。实验工作质量应纳入主任任期目标责任制。6.1.2贯彻执行党和国家的方针、政策和法规。对上级主管部门负责，6.1.3主持召开室务会议，组织对实验室的生产、行政、计划、安全、生活等有关问题作出决定。6.1.4领导和组织职工认真执行各项规章制度，制定并督促检查本室各类人员岗位职责的执行，并主持制定化验室的年度计划，主持制定和修改各项规章制度。6.1.5根据公司下达的实验任务，结合化验室的具体情况，制订年度、季度和月份实验工作计划，制订完成计划措施，组织计划实施，确保按时完成任务。6.1.6组织制订仪器、设备申请计划、监督日常仪器维护保养工作、审核材料、试剂药品的购买、领用计划。6.1.7抓好经济管理，搞好经济核算和生产定额管理，组织职工开展增产节约和提合理化建议活动。6.1.8领导和组织职工搞好安全文明生产，做好环境保护工作，努力改善实验工作条件。6.1.9对化验室人员的培训、提拔、晋升、奖惩，向主管领导提出建议。并定期向公司汇报工作。6.1.10对因管理不善，对仪器设备、环境条件未达到规定要求而隐瞒不报，继续出具检测报告造成的检验过程中的质量事故负责；对不安全的隐患隐瞒不报，继续组织生产造成的不利影响负责；对非意外情况（停电、停水等）造成本室没有按照计划完成各项生产任务负责。6.2办公室负责人职责6.2.1在化验中心负责人领导下，管理办公室全面工作。6.2.2负责化验中心文字、数据材料的收集汇总，并负责起草工作总结进行汇报。6.2.3监督办公室人员工作，组织办公室全体人员及时、准确地完成产品检验文字、数据的整理任务。6.2.4树立全局观念、提高服务意识，搞好化验室办公室人员之间的协调配合，及时帮助窗口解决工作中出现的问题。6.3技术负责人职责6.3.1主持本项目的技术、质量管理工作，对检验技术、产品质量全面负责。6.3.2在检验中严格执行现行国家食品安全法律、法规、规范、强制规范和标准，严格按计划进行。6.3.3组织人员自审、会审，及时解决检验中出现的各种技术问题。6.3.4负责各项技术交底工作，组织技术人员、检验人员学习贯彻技术规程、规范、质量标准，并随时检查执行情况。6.3.5负责本检验的技术文件及技术资料查阅。6.3.6督促检查检验人员的检验技术质量，确保产品质量。6.3.7主持检验质量会议，对质量问题提出整改措施并监督及时处理。6.3.8对检验技术人员的工作进行考核，可根据技术人员的工作表现提出奖惩意见，对不称职的可建议退回公司。6.3.9搞好团结、协作、配合，完成领导交办的其它任务。6.4质量负责人职责6.4.1认真学习和贯彻有关质量方针、政策、法律和法规；6.4.2带头学习理解质量管理有关标准、知识、质量管理基本原则，对室内工作人员质量管理意识教育；6.4.3负责落实化验室的质量职能,完成工作任务,对化验室的工作质量负责；6.4.4主持室内有关质量工作会议；6.4.5负责批准发布由室内工作人员编制的仅涉及化验室工作的质量作业指导文件。6.5检验人员职责6.5.1按时、按量、保质完成产品质量安全检验任务。6.5.2熟悉检验标准，熟练掌握检验和仪器设备使用技术。6.5.3了解仪器设备的构造、原理和性能，遵守检验操作规程，防止发生意外事故。6.5.4检验数据真实、准确、完整，数据记录清晰、数据处理及时，校核、审核准确。6.5.5严格遵守保密制度，为保证检验数据客观、公正，有权拒绝行政干预。6.5.6做好仪器设备的保管、使用、保养工作参考文献食品伙伴网、百度资料、图书馆书籍、啤酒百科谢辞

附录资料：不需要的可以自行删除AK3+570通道施工组织设计编制依据1、实施性总体施工组织设计。2、《公路工程质量评定标准》（JTGF80/1—2004）。3、《公路桥涵施工技术规范》（JTG041—2000）。4、现场踏勘。工程概况分项工程名称：⑴AK3+570通道总体（编号：DWD-2-1-34-001）⑵AK3+570通道基础及下部构造（编号：DWD-2-1-34-002）⑶AK3+570通道上部构造预制、安装或浇筑（编号：DWD-2-1-34-003）⑷AK3+570通道钢筋加工及安装（编号：DWD-2-1-34-004）⑸AK3+570通道人行通道（编号：DWD-2-1-34-005）⑹AK3+570通道锥坡（编号：DWD-2-1-34-006）⑺AK3+570通道栏杆（编号：DWD-2-1-34-007）⑻AK3+570通道台背回填（编号：DWD-2-1-34-008）2、AK3+570钢筋砼通道断面为9.0m×5.0m,原设计长度为33.20m，作为过人和交通用，顶最大填土高度1.69米.后根据实际情况,为了和改线顺接,变更为斜交正做,斜交角度为10。。3、主要工作内容：挖基土方3611m3，C20混凝土涵身基础64.9m3，C35混凝土框架涵身825.7m3，C30混凝土涵内路面261.3m3，C30混凝土洞口翼墙46.5m3。4、涵洞所需水取工地附近地下水，砂来源于江东砂料场。混凝土采用业主指定的商品混凝土。工地用电和照明用电采取了和灌南小学协商解决。三、施工准备1、熟悉图纸，仔细对施工图纸进行复查，领会设计意图。2、清除杂物，整理场地；3、清查安装主要的施工机具；4、安装好施工现场水电供应设施；5、合理组织施工，做到责任明确，分工合理；6、准备足够的施工所需用的材料。四、施工平面布置在现场搭建临时仓库、变电房等临时设施。平整场地改移县道，接通施工用电、用水，具体施工场地平面布置见详附图1。五、施工方案及方法1、施工放样。仔细对施工图纸进行复查，领会设计意图。根据图纸确定的构造物的位置和标高，准确计算结构物中桩坐标和轴线方向，然后根据计算的具体位置进行施工放样，为便于开挖后的检查校核，基础轴线控制桩应延长至基坑外加以固定。放样完成后，根据基础的结构尺寸放出结构基础的边线，申请驻地监理工程师复查，得到确认之后，方可进行基坑开挖。2、基坑开挖基坑开挖采用机械人工配合的方法进行施工。开挖时严格按照《公路桥涵施工技术规范》要求施工，根据施工技术规范要求，按基础设计图，四边分别放宽1米，按1:1放坡，先用挖掘机开挖，待接近基坑设计标高时预留20cm深度，利用人工清理基坑底部，确保不扰动基底地质层。人工修整完后，对基底轴线、高程、平面尺寸进行自检，然后报监理工程师验收，并由试验室对原地基承载力进行动力触探试验（设计要求基底容许应力不小于150KPa），若地基承载力不能满足要求，报监理工程师审核变更基底处理方案；若满足设计要求，平整度达到规范要求后报请监理工程师验收签认。然后开始铺筑砂砾垫层，砂砾垫层为压实的连续材料层，粒径不大于40㎜，厚度为30㎝，砂砾垫层摊铺后用夯机分层压实，密实度达到98%以上。所开挖的各种杂土清运到弃土堆存放。开挖过程中根据开挖深度及土质情况注意观察坑壁的稳定性，及时采取有效措施加强坑壁支挡，以保证施工安全。基坑开挖过程中，在坑底基础范围之外设置集水井并沿坑底周围开挖排水沟，使水流入坑内，然后用潜水泵将水抽出排入附近沟渠中。基坑开挖边坡顶设置挡水圈。3、砼基础浇筑：⑴重新恢复测量桩，按施工图纸尺寸支架侧面模板。模板采用竹节板木支架，此时应注意水沟位置的模板安装问题。⑵按设计并经监理工程师批准的砼配合比使用C20商品砼。砼采用运输车运至现场，并在现场安排专人控制原材料用量及砼坍落度。⑶砼振捣采用先用插入式振捣器振捣，再用平板式振捣器，振捣时间为15-20s，防止漏振或过振。待其初凝后，立即进行洒水养护。⑷沉降缝要贯穿整个基础,且要顺直.4、主通道底板砼浇筑：⑴施工放样：待基础砼达到70%以上强度后，即在垫层面上准确测设出通道底板位置。⑵模板制作与安装：底板与侧墙的施工缝考虑设在距底板顶面45cm处。按施工图纸支架底板模板，模板采用竹节板、钢管支架。模板要求安装稳固，表面平整、紧密。沉降缝先采用全断面固定聚笨乙烯泡沫板，内侧B/2处的沉降缝防水材料待砼具有一定强度后再安装。⑶底板钢筋制安：严格按施工图纸尺寸下料，按图示间距安放、绑扎，主筋下垫4cm砂浆块以控制砼保护厚度。绑扎时注意在无弯起筋的骨架①中布置角隅加强筋箍筋，以及准确预埋通道侧墙钢筋。底板与侧墙施工缝处应焊接定位钢筋夹固定2mm厚的镀锌钢板以作为施工缝的防水措施。上述工作全部完成后报请监理工程师检查认可后方能浇筑底板砼。⑷底板砼浇筑：砼采用商品混凝土，砼运输车运输至现场，砼泵车浇筑。坍落度控制在10-30cm之间，并安排专人对坍落度等进行自检。砼浇筑时水平分层、斜向分段，每一单层厚度不超过30cm，且砼浇筑必须在前一段（层）砼初凝前完成，避免出现工作缝。砼振捣采用插入式振捣棒结合平板式振捣器，振捣时间为15-20s，防止漏振或过振，尤其是一些边角部位。当砼浇至顶面时，用水准仪辅以尼龙绳控其高程，用泥镘等工具把表面收平、压光，上接侧墙的施工缝做成企口式，以利施工缝位置衔接牢固。待砼初凝后立即进行覆盖洒水养护。⑸底板砼施工完成且具有一定强度，立即组织施工铺装人行道预制板。人行道板具体施工工艺同底板。铺装完成以后,采用现场焊接的方法制作安装护栏。5、通道侧墙、顶板施工：⑴施工放样：待底板砼达到70%以上强度后，立即恢复通道侧墙位置桩，以指导侧墙及顶板模板制作与安装。⑵侧墙、顶板钢筋制安：根据图示尺寸，在预埋钢筋上绑扎钢筋骨架。钢筋骨架沿通道纵向按①②③④①②③④的顺序循环绑扎（每排中心间距为12.5cm），主筋绑扎时垫4cm砂浆垫块以保证砼保护层的厚度。安装时仔细检查尺寸、位置。⑶模板连接安装：按照图纸设计结构尺寸进行放样。模板采用大型组合模板、型钢支撑。模板安装根据结构要求顺序进行，浇筑混凝土前对支撑板面进行检查，清除模板内污物，并在模板内面涂刷脱模剂，不得使用易粘在混凝土上或使混凝土变色的油料。支立模板时为了防止模板移位变形，支侧模时在模板外设立支撑固定，涵身的侧模设立对拉杆固定，浇筑在混凝土中的拉杆，按拉杆拔出的要求设计，拉杆外套塑料管，模板拆除后拔出重复利用。模板安装完毕后，为保证位置正确，必须对其平面位置、平整度、垂直度、顶部标高、节点联系及纵横向稳定性进行自检，合格后方可报监理工程师抽检，监理工程师认可后方能浇筑。混凝土浇筑时，发现模板有超过允许偏差值的可能及时纠正。⑷侧墙、顶板砼浇筑及养护：①涵洞混凝土采用商品混凝土，罐车运输，砼泵车。砼浇注时，必须对运到施工现场的砼进行严格的检查。如砼坍落度、和易性。②浇注前先对支架、模板、预埋件进行检查，模板内的杂物、积水应清理干净，模板如有缝隙必须填塞严密。③为了防止混凝土自高处向模内倾卸时发生离析，在浇注时，吊车倾卸高度不超过2米，通过串筒下落。④砼浇筑以设计沉降缝为单元格进行，根据沉降缝的设计宽度用塑料泡沫板加以隔开。砼浇筑时严格按照《公路桥涵施工技术规范》要求控制浇注层厚度，以一定的顺序和方向分层浇筑，并在下层砼初凝前浇筑完成上层砼，做到按计划、分段分层连续完成。⑤砼振捣由专业振捣工用插入式振动器进行。使用时，移动间距不应超过振动器作用半径的1.5倍；与侧模保持50～100mm的距离，并插入下层砼50～100mm；每次振捣完后徐徐提出振动棒。每一振动部位以不再冒出气泡，表面呈现平坦、泛浆为止。⑥在浇筑过程中按照规范要求制作砼试件。⑦浇注后24h拆除模板，洒水覆盖养护不少于7d。⑧混凝土浇筑过程中要按照设计要求掺加防裂纤维和减水剂。4、施工缝的处理：由于基础、涵身分别浇注，施工缝应认真处理，施工缝的处理采用人工凿除。在处理层混凝土浇筑完1-2天内，对其表面的水泥砂浆和松弱层进行拉毛，经凿毛处理的混凝土面用水冲洗干净，在浇筑次层混凝土前应对水平缝铺一层厚度为1-20cm的1：2水泥砂浆，对于钢筋砼、盖板砼的现场浇注施工应连续进行，避免施工接缝，当涵身较长时，可沿长度方向分段进行，接缝应设在涵身沉降缝处。5、沉降缝的处理：沉降缝的设置根据设计图纸洞身每墙4-6米设一道沉降缝，沉降缝的构造严格按施工图执行。沉降缝的设置必须上下贯通成一条垂线，基础墙身根据沉降缝的设计长度分段浇筑。浇筑时先在沉降缝位置处用木板作挡块，等到砼达到一定强度后，拆除木板挡块，于沉降缝位置处填塞沥青麻絮。6、出入口砌筑块石在使用前必须浇水湿润，表面如有泥土、水锈，应清洗干净。砌筑第一层砌块时，由于基底为黄粘土，必须碾压达到95%的压实度，形成比较好的整体性时，直接坐浆砌筑。砌体分层砌筑，各砌层的块石高度应大致一致，外圈定位行