无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座

目录主题1：为何要进行培养基灌装验证？主题2：相关GMP法规对培养基灌装验证要求主题3：培养基灌封试验常规要求主题4：特殊剂型培养基灌装验证方法主题5：培养基灌装验证设计、执行与文件编制主题6：培养基灌装验证关键点分析主题7：培养基灌装验证检验关键点1无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第1页主题1：为何要进行培养基灌装验证？

2无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第2页为何需要进行培养基灌封试验？3无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第3页几个概念无菌状态Asepsis(FDA指南)：经过使用无菌工作区及预防暴露无菌产品受到微生物污染方式进行操作所到达一个控制状态

无菌工艺Asepticprocessing(PDATR22)：在对空气、物料、设备、人员进行微生物和颗粒物污染严格控制环境下，对无菌物料进行加工。无菌灌装Asepticfilling(PDATR22)：将预先灭菌产品灌和/或装入无菌容器中并密封，属于无菌工艺一个组成部分。关键区Criticalarea(PDATR44)：经过设计使产品、容器、封装件和设备能够保持无菌性一个区域。4无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第4页概况洗瓶机干热隧道隔离柜冻干机轧盖机转移瓶塞灌装机容器5无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第5页来自生产工艺要求……对产品进行最终灭菌，是降低微生物污染风险惯用方法。但有大量药品不适合用于最终灭菌而只能采取无菌生产工艺方法。无菌生产工艺是制药领域中最难工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大难点。降低无菌工艺药品污染风险两项主要方法人员培训无菌工艺验证6无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第6页最终灭菌工艺与无菌生产工艺差异最终灭菌工艺在高洁净净环境下进行灌装和密封通常，产品、容器和密封件微生物污染水平很低在密封容器中进行最终灭菌无菌生产工艺产品、容器和密封件分别进行灭菌，然后进行灌封在极高洁净环境下进行灌装和密封产品在最终容器中不再做深入灭菌处理对各个组成部分灭菌工艺需要进行严格验证和监控在灌封前和灌封过程中操作会带来污染风险空瓶灭菌隧道密封件蒸汽灭菌釜除菌过滤人员半压塞瓶冻干机全压塞瓶7无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第7页无菌生产系统8消毒剂灭菌设备清洗设备蒸汽灭菌干热灭菌水预处理纯蒸汽发生器高风险操作区域混合灌装其它VHP,EO发生器冻干机最终灭菌压缩空气无菌检测8无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第8页污染类型举例起源（举例）处理方法（举例）非活性（粒子）金属斑点衣物纤维仪器人员衣物外部空气供水悬浮粒子由高效过滤器过滤接触部分清洁和灭菌纯化水系统活性（微生物）细菌酵母，霉菌人员水外部空气仪器工具辅料活性物质有限无菌关键区干扰悬浮粒子由高效过滤器过滤溶液无菌过滤（0.2um）蒸汽灭菌或零件辐射灭菌内毒素（通常与空气中细菌无关）起源于某种有机体细胞壁（经常水生）潮湿设备或更换零件，或暴露一段时间后容器/密封容器加热苛性钠溶液高温（大于200度）时间视情况而定ISPE：无菌设施设计规范P169无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第9页USP注射剂无菌测试结果试验目标：不合格可能性(%)试验批量：60,000支试验方法：按美国药典无菌测试方法真实不合格率测试20支样品不合格可能性测试40支样品不合格可能性1％18.2%33.1%5％64.2%87.2%15％96.1%99.8%30％99.9%≈100.0%10无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第10页无菌工艺产品无菌确保

无菌工艺产品PersonnelEnvironment工艺验证人员原料环境无菌检验11无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第11页注射剂生产风险分析内源性影响原因系统设备工艺过程物料和中间体质量外源性影响原因人员12无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第12页作业步骤与风险作业步骤验证难易度人员依赖程度相关风险灭菌易低低房间设计N/AN/A中等环境监测中等可变高消毒难高高更衣难很高很高物品转移难高高无菌技术（灌封）难很高很高无菌装配难很高很高13无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第13页厂房/房间人员无菌工艺生产线工艺人流物流布局HVAC/公用工程*日常无菌确保培养基灌装QA/QC消毒操作偏差&环境控制趋势RichardL.Friedman,M.S.药品评价及研究中心法规办公室，美国FDA*包含设计及维护14无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第14页为何要进行无菌工艺验证证实采取无菌工艺生产无菌产品能力无菌工艺人员资格和确保符合现行GMP要求15无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第15页无菌工艺意义无菌工艺试验仅证实无菌工艺系统（环境、设备、程序和人员）能力在某一个时间点表现。并不确保生产程序在同一个生产线不一样时间段表现出相同微生物质量水平。经过控制和验证所以相关工艺，如环境监测、人员确认和清洁、灭菌程序验证，维持工艺模拟验证时无菌水平。16无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第16页主题2：相关GMP法规对培养基灌装验证要求17无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第17页来自FDA和USP要求FDACGMP无菌工艺药品指南（年版）Anasepticprocessingoperationshouldbevalidatedusingamicrobiologicalgrowthmediuminplaceoftheproduct.

Thisprocesssimulation,alsoknownasamediafill.USP31<1116>洁净室和其它控制环境微生物学评价Toassurethatminimalbioburdenisachieved,additionalinformationontheevaluationofthemicrobiologicalstatusofthecontrolledenvironmentcanbeobtainedbytheuseofmediafills.Anacceptablemediafillshowsthatasuccessfulsimulatedproductruncanbeconductedonthemanufacturinglineatthatpointintime.18无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第18页来自EUGMP和国内要求EUGMP附件1无菌药品生产（年2月新版）

Validationofasepticprocessingshouldincludeaprocesssimulationtestusinganutrientmedium(mediafill).中国药品生产质量管理规范附录（1998年修订）SFDA化学药品注射剂基本技术要求（试行）…培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作一个系统验证,是判断无菌确保水平关键伎俩…

…采取无菌生产工艺粉针剂，应能确保SAL小于10-3…

19无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第19页附录一：无菌制剂第四十七条无菌生产工艺验证应包含培养基模拟灌装试验。应依据产品剂型以及培养基选择性、澄清度、浓度和灭菌适用性选择培养基。应尽可能模拟常规无菌生产工艺，包含全部对产品无菌特征有影响关键操作，及生产中可能出现各种干预和最差条件。

培养基模拟灌装试验首次验证，每班次应连续进行3次合格试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常应按生产工艺每班次六个月进行1次，每次最少一批。20无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第20页培养基灌装容器数量应足以确保评价有效性。批量较小产品，培养基灌装数量应最少等于产品批量。培养基模拟灌装试验目标是零污染，应遵照以下要求：（1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品；（2）灌装数量在5000至10000支时：1.有1支污染，需调查，可考虑重复试验；2.有2支污染，需调查后，进行再验证。（3)灌装数量超出10000支时：1.有1支污染，需调查；2.有2支污染，需调查后，进行再验证。（4）发生任何微生物污染时，均应进行调查。21无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第21页主题3：培养基灌封试验常规要求

22无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第22页定义与目标

目标证实生产线采取无菌工艺生产无菌产品能力对人员进行资格确认符合GMP要求使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对无菌工艺进行验证。又称为“工艺模拟试验”.23无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第23页工艺模拟试验通常流程将培养基暴露于设备、容器胶塞密封系统表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。对装有培养基密闭容器进行培养以检验微生物生长。评价结果，确定实际生产中（如灌装前调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染可能性。

24无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第24页工艺模拟过程从灭菌开始到完全灌装结束全过程。如处方混合阶段采取无菌过程必须作为验证一部分。配制后除菌、原液保留。如取样、保留时间、物料循环等操作。灌装操作。如容器、设备CIP和SIP；设备依照设定速度和包装规格包装容器等，正常与异常干扰等。冻干工艺过程25无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第25页模拟条件-最差条件最差条件目标是有意对工艺、系统、设备在更高挑战条件下进行验证。使用原料、组件和密封在无菌工艺区域保留时间超出控制要求；增加灌装人员数量，超出正常灌装生产所需人员数量；在工艺模拟试验中使用促生长培养基，而不是使用有抑制性或保护性处方。

HACCP、FEMA、FAT方法确定最差条件26无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第26页培养基灌封试验时机：

初始验证与再验证初始验证需要重复屡次，以确保结果一致性和有效性。有差异屡次试验结果工艺过程失控象征定时再验证定时进行，评定无菌工艺受控情况。应综合考虑每一班次及班次改变过程中有代表性活动及干预。对人员资格再确认应纳入到定时再验证中。27无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第27页培养基灌封试验时机：–增补性培养基灌封试验变更及其评定对产品或生产线每一个变更，均应依据书面变更控制系统进行评定。假如经过评定认为此项变更会影响到无菌生产工艺产品无菌确保水平，则需要进行增补性培养基灌封试验。比如，设施或设备改变、生产线配置变动、人员主要变动、环境监控结果异常、容器-胶塞系统变更、停车时间延长、无菌检验结果阳性等。28无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第28页试验用培养基和培养温度选择选择时注意事项适应广谱微生物生长，包含细菌和真菌很好澄明度，较小粘度易于除菌过滤惯用培养基：3％大豆胰蛋白肉汤（TSB）厌氧培养基仅在特殊情况下使用培养温度FDA-20-35℃，目标值±2.5℃，不少于14天；如选择两个温度，则每一温度下最少培养7天，从低温开始。PIC-20-25℃下最少14天，或，先20-25℃下7天，然后30-35℃下7天。29无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第29页培养基选择试验培养基配制和灭菌培养基验证分装到若干数量无菌小瓶或试管制备三种微生物（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌混悬液，菌液浓度控制在100-1000个菌/ml分别加入菌悬液各0.1ml,每份最少2瓶（支）培养：30-35℃（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌）20-25℃（白色念珠菌））观察：假如在7天内，每种微生物培养据最少有50%长菌，则可认为培养基可用于无菌工艺验证。30无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第30页灌装体积与数量灌装体积每只容器灌装体积不少于总容积1/3一样，灌装体积也不宜过大既要考虑到瓶倒转或旋转时，培养基能充分接触到容器和密封件内表面，又要确保容器内有足够氧气支持微生物生长。灌封数量综合考虑统计学要求和实际生产批量。FDA(>5000瓶)：假如正常生产批次量低于5000瓶，则培养基灌封最少应为实际生产线最大批次量。PIC(>3000瓶)：假如正常生产批次量低于3000瓶，则培养基灌封最少应为实际生产线最大批次量。31无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第31页灌封时间与批次量控制灌装时间对于初始性验证，培养基灌封试验应安排在一周内不一样时间进行。对于再验证，可选择在一周结束或其它最差条件下进行。灌封时间要涵盖实际生产班次。批次量控制首次验证，最少要连续成功灌封3个批次。再验证最少需要成功灌封1个批次。32无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第32页培养基灌封试验合格标准FDA指南（版）与EUGMP附件1标准统一灌封量<5000瓶时，若有1瓶污染，需彻底调查，并重新验证(3批)。灌封量为5000-10000瓶时，若有1瓶污染，视调查结果决定是否需要重新进行1批培养基灌封试验；若有两瓶污染，必须重新验证（3批），同时进行彻底调查。灌封量>10000瓶时，若有1瓶污染，需彻底调查；若有两瓶污染，必须进行彻底调查，并重新验证（3批）。

注：欧盟标准将自年3月起执行。33无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第33页培养基灌封试验合格标准年3月以前欧盟通用标准：污染率低于0.1%计算公式：实际污染率=(95%置信限值)/(灌封容器数)×100%污染瓶数与95%置信限值间关系污染瓶数01234567891095%置信限值34.746.37.759.1510.5111.8413.1514.4315.7116.9634无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第34页培养基灌封试验合格标准SFDA化学药品注射剂基本技术要求（试行）培养基灌装试验批量与判断合格标准批量（瓶）3000475063007760允许污染数量（瓶）0≤1≤2≤335无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第35页主题4:特殊剂型培养基灌装验证方法36无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第36页冻干制剂对培养基灌封要求冻干制剂经典生产流程配制→灌装→冻干→加塞→轧盖第一个方式，模拟装载/卸载过程，缩短放置时间（首选）容器内灌封好培养基，以半压塞状态装入冻干机冻干机内部分抽真空（500mbar），在室温放置一定时间，不得冷冻。用无菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞轧盖缺点:真空度不能过高，不能照成培养基沸腾。注意，若所使用容器透明度不高，应将内容物倒出进行检验。冻干制剂培养基灌封试验特殊性对产品在冻干机内放置步骤模拟37无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第37页冻干制剂对培养基灌封要求第二种方式，模拟冻干时间半压塞产品在冻干机腔室内放置时间同于正常工艺。缺点：耗时长第三种方式，以经稀释培养基模拟冻干过程容器内灌封好经稀释培养基（dilutedmedium），以半压塞状态装入冻干机模拟冻干过程，直到容器内培养基大致到达正常浓度（fullstrength）为止。缺点：耗时长，需开发特殊冻干程序，营养支持性不均一，影响微生物存活力。38无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第38页粉针剂对培养基灌封要求第一个方法在灌装线上直接灌装液体培养基，灌装后压塞-轧盖或熔封。第二种方法先灌装干粉培养基，再加入注射用水第三种方法先灌装惰性剂，再加入液体培养基关键点采取第二、三种方法时，所用惰性剂或干粉培养基需事先经过辐射灭菌。惯用惰性剂有聚乙二醇8000、羧甲基纤维素、乳糖。39无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第39页混悬剂/半固体制剂对培养基灌封要求悬浮剂需要模拟搅拌或循环流动过程。假如有没有菌添加过程，也应进行模拟。半固体制剂需要将液体培养基增稠到适当粘度。可选取琼脂或羧甲基纤维素作为增稠剂，也可选取其它试剂，但要证实其没有抑制细菌或真菌作用。在培养结束后，需将培养基从塑料或金属管中挤出检验其混浊度和真菌菌落，也可进行无菌检验试验。假如选择显色培养基碰到污染物变色方法，则需要对其进行验证。40无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第40页主题5：培养基灌装验证设计、执行与文件编制41无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第41页制订培养基灌封试验方案考虑原因（一）生产线最长运行时间及其造成相关风险干预次数、类型和复杂程度是否有冻干工序设备无菌装配总人数和所从事操作无菌加入和无菌转移次数班次更换、暂停和必要更衣无菌设备拆卸与连接环境监测42无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第42页制订培养基灌封试验方案考虑原因（二）生产线配置和运行速度产品重量检验容器/密封系统与无菌操作相关各种特殊要求总人数和所从事操作总标准综合考虑生产线可能造成污染各种原因

尽可能模拟实际生产无菌操作

可能时，应包含最差条件模拟测试43无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第43页验证开始前准备工作设备确认通风系统（HVAC）确实认设备在线清洗和灭菌CIP,SIP灭（除）菌工艺验证湿热、干热灭菌工艺除菌过滤空气过滤器完好性检测容器/胶塞密封完好性测试人员培训洁净室环境到达设计要求44无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第44页培养基灌封试验方案内容举例定义被模拟工艺定义使用房间，灌封线和设备使用容器和密封件类型灌装线速度灌封数量模拟过程中干扰和中止数目和类型参加人员数目使用培养基灌封到容器内培养基体积选择最差条件及其原理培养条件，培养温度，培养时间所进行环境监测批统计复印件职责说明全部工作合格标准列举最终汇报中需要文件此次模拟连续时间45无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第45页方案执行与统计（一）培养基灌封日期和时间使用房间和设备容器胶塞型号和尺寸培养基种类和灭菌方式每容器中灌装体积灌装速度灌封瓶数，灯检丢弃瓶数和原因培养瓶数，阳性数量培养时间和温度46无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第46页方案执行与统计（二）环境监测数据参加培养基灌封人员培养基灵敏度检验结果有没有阳性结果。如有，要给出微生物判定结果。如发生异常情况，需给出调查汇报。47无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第47页培养基灌封试验中环境监测环境监测－按摄影应规程进行，包含：空气粒子数沉降碟浮游菌表面监测人员监测对无菌生产区环境评定48无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第48页培养基灌封试验中灵敏度检验试验培养基灵敏度检验试验：使用完成14天培养灌封前期培养基样品用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉和环境菌作为阳性菌将每个菌种准备含<100cfu/0.1ml菌液，每个菌种接种2支培养基样品，同时并平板计数（双份）对真菌在20-25C下培养，对细菌在30-35C下培养，天天检验，5天内需有生长迹象49无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第49页再验证与增补性验证要求再验证对每条生产线，每年进行两次再验证，间隔时间为5-7个月。人员最少每年参加一次再验证，以进行资格再确认。每条生产线轮番使用最大和最小规格容器，变换生产线速度。增补性验证依据风险程度决定培养基灌封试验批数。通常为1-3批。50无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第50页培养基灌封试验总结汇报最终汇报中应包含以下内容模拟最差条件事件清单环境监测结果微生物判别结果培养基营养检验试验结果培养条件、结果读取日、结果读取人、每位参加者灌装瓶数等信息。结论（结果是否能够接收）合格证书工艺验证/再验证合格证书人员资格确认证书51无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第51页培养基灌封试验阳性结果调查(一)调查范围应包含环境微生物监测数据，空气悬浮粒子监测数据CIP设备，清洁、消毒程序执行情况培养基、设备和零件灭菌工艺，灭菌釜校正情况高效过滤器检测(空气悬浮粒子水平，过滤器检漏，风速测量，密封系统检验，使用年限等)除菌过滤器完好性房间气流型式与压差人员操作技术培训情况52无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第52页培养基灌封试验阳性结果调查(二)调查范围还应包含以往产品无菌检验试验结果人员卫生情况监测数据培养基灌装试验中干预方式分析该区域近期是否有过维修活动，生产线改造情况该生产线培养基灌封试验历史数据已灭菌物品储存条件培养基灌封过程中异常事件阳性污染菌与环境监测污染菌判别53无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第53页培养基灌封试验阳性结果调查(三)调查结论与风险评定培养基灌封试验结果有效暂停生产，直至确定污染起源并采取有效纠偏办法。再验证合格后，产品方可放行。对培养基灌封试验后和以前所生产产品，进行风险评定培养基灌封试验结果无效→重新进行培养基灌封试验条件1无菌灌装区物理条件不满足要求条件2人员未按照正常生产程序操作54无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第54页污染率灌装过程(时间或灌装量)在灌装过程中污染率上升

这表明污染可能起源于液体培养基(如与培养基贮罐非无菌连接，在循环管路中受到污染)。很主要是，在灌装结束后，保持培养基贮罐处于无菌状态，当等到培养基灌装结果时，能够核实这么假设。55无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第55页污染率灌装过程(时间或灌装量)在灌装过程中污染率下降这表明污染发生于生产设备中（胶塞容器/轨道,计量泵/针头)，在灌装过程中污染被部分或全部“清洗掉”。56无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第56页污染率灌装过程(时间或灌装量)在灌装过程中污染率出现尖峰一个尖峰（在短时段一些产品被污染）可能与在灌装过程中不正确操作造成关键失误相关。对于这个原因，很关键是必须知道被污染产品灌装准确时间，以及当初实施干预办法（灌装操作过程录像是非常有用）57无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第57页污染率灌装过程(时间或灌装量)污染率出现尖峰后，呈上升趋势

与前面例子相同，但假如错误干预办法能够影响到液体管路/回路时（如培养基贮罐改变，泵或针替换）58无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第58页污染率灌装过程(时间或灌装量)孤立事件(试验中少数污染)不幸是，这些现象是最普通，也是最难调查。假如这种现象在屡次试验中重复出现，可能说明这个工艺存在“环境噪声”，所以需要根本办法（如更衣/着装、消毒剂和气流模式改变)59无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第59页主题6：培养基灌装验证关键点分析60无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第60页培养基灌封后生产培养基灌封后能够进行生产，但要等培养基灌封合格后产品才能放行（产品有报废风险）。无效培养基灌封后能够进行生产，但所生产批次要在成功培养基灌封后方可放行。培养基灌封失败生产线不能用来生产，依据调查结果决定培养基灌封次数和数量，培养基灌封合格后，才能生产。61无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第61页讨论：最差条件WorstCase最差条件高于或低于正常范围条件程度，与正常生产条件相比最有可能造成工艺或生产失败条件。注意假如一些做法会带来污染风险，则不允许用培养基灌封结果为它不合理进行辩护62无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第62页最差条件设计（1）储存时间Holdingtime灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌封前能够放置最长时间1.灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料需要再灭菌（除菌）时间间隔Worstcase:用超出保留时间灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料参加培养基灌封2.产品从无菌过滤到灌封加塞完成所需要时间Worstcase：无菌过滤后存放在储罐内培养基模拟实际生产时产品最大储存时间后再灌封产品在灌装后储存时间应在培养基灌封中验证63无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第63页最差条件设计（2）灌封连续时间Durationofruns最保守设计：在培养基灌封试验中，模拟用时最长瓶子满批量生产所需要时间，其中包含正常干扰时间（换班、设备维修）。其它设计：1.在生产完成后接着进行培养基灌封试验2.为了降低灌封瓶数，在每批试验刚开始及结束前均灌装培养基，中间空运行灌封机以到达所需要时间在任何情况下模拟了与实际生产不相同情况，都要有统计，并解释原因在正常生产过程中所需最长时间，包含可能发生事件，人员换班等，应给予模拟64无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第64页最差条件设计（3）灌封数量灌封数量没必要总是满批量通例：小批量，最少要满批量大批量，普通最少5000瓶在模拟无菌生产时间时会超出5000瓶65无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲座第65页最差条件设计（4）灌封速度与瓶子规格灌封速度和瓶子规格关系最慢速度，最大瓶子规格最小瓶子规格，最快速度66无菌工艺验证培养基灌封试验专家讲