【课件】动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

选择性必修3第2章细胞工程本节聚焦:什么是动物细胞融合技术？单克隆抗体是如何制备的？在临床上有哪些应用？第2节动物细胞工程（二）动物细胞融合技术与单克隆抗体植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养意义：打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种。

温故而知新温故而知新实验：人——鼠细胞荧光标记融合实验1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.结果：形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。3.原理：细胞膜具有一定的流动性4.诱导融合的方法：PEG融合法电融合法灭活病毒诱导法动物细胞融合细胞膜的流动性细胞增殖一、动物细胞融合技术动物细胞培养5.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能1.什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。灭活病毒诱导法相关信息2.灭活病毒诱导细胞融合的原理病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能动物细胞融合技术与植物体细胞杂交的比较7向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。早期获得抗体的方法资料1为解决这一难题，科学家进行了多年的研究和探索。产量低、纯度低、特异性差资料2人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的浆细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个浆细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用克隆单个B淋巴细胞形成细胞群。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体B淋巴细胞不可能无限增殖如何获得大量、单一的抗体？如何解决体外培养时一个B淋巴细胞不能无限增殖这一问题？动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案：资料3一个极富创造力的方案从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养多种已免疫B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合小鼠的脾脏中获取1.单克隆抗体的制备过程注射特定的抗原,小鼠脾产生特定抗体的淋巴B细胞[思考]从脾中收集到的B细胞仅仅是浆细胞吗？不是，有B细胞、浆细胞和记忆B细胞。需要的是浆细胞022杂交瘤细胞(多种)13置于选择性培养基上培养第一次筛选融合的细胞BBBB瘤瘤瘤瘤1.单克隆抗体的制备过程B瘤B瘤第一次筛选：用特定的选择培养基在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长目的：得到杂交瘤细胞02克隆化培养抗体检测第二次筛选(抗原-抗体杂交技术)能分泌所需抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞(多种)1.单克隆抗体的制备过程抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（分泌的抗体能和特定的抗原结合）1402体外培养单克隆抗体体内或体外培养能分泌所需抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔1.单克隆抗体的制备过程①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。筛选出杂交瘤细胞方法？培养基中加入氨基蝶呤B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡杂交瘤细胞能无限增殖，生长【第一次筛选择】获得杂交瘤细胞知识拓展资料1多孔细胞培养板阳性孔在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔抗体检测板分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞【第二次筛选】能分泌所需抗体的杂交瘤细胞知识拓展抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法【小结】单克隆抗体的制备过程（目的：获得能产生相应抗体的B淋巴细胞）（方法：PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法）（目的：得到杂交瘤细胞）（目的：得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞）杂交瘤细胞的特点：单克隆抗体的优点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体特异性强、灵敏度高、可大量制备单克隆抗体制备的原理：细胞膜的流动性、细胞增殖练一练

请用箭头把以下各步骤的字母按正确顺序连接起来。单克隆抗体的应用思考•讨论1.ADC的抗体和药物各具有什么作用？抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。单克隆抗体的应用思考•讨论2.除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？①

可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗；②

一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗提示：单克隆抗体的应用思考•讨论3.单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？①

单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒；②

ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点。提示：抗原-抗体杂交法抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体在妊娠第8天就可以作出诊断，比原来诊断方法提前了10d左右，准确率在90﹪以上。具有准确、高效、简易、快速特点诊断优点：(1)诊断试剂——最广泛应用2.单克隆抗体的应用(2)运载药物优点：位置准确、疗效高、副作用小单克隆抗体+接头+药物（如细胞毒素）=ADC（抗体-药物偶联物）单克隆抗体+药物=“生物导弹”2.单克隆抗体的应用单克隆抗体+同位素（荧光标记）在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。结合荧光标记的单克隆抗体药物2.单克隆抗体的应用(2)运载药物1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要为了获得细胞产品，后者主要为了获得杂种植株C教材课后习题·概念检测2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制