重庆市万州分水中学高考生物第1章《基因工程》复习考点二基因工程操作步骤新人教版选修3

"重庆市万州分水中学高考生物第1章《基因工程》复习考点二基因工程的操作步骤新人教版选修3"察看基因工程的操作过程，剖析每一步骤的操作程序①从基因文库中获取获取目的基因—②利用PCR技术扩增③经过化学方法人工合成①目的基因②启动子(2)基因表达载体的建立—构成③停止子④标记基因将目的基因导入受体细胞—方法①植物：农杆菌转变法、基因枪法、花粉管通道法②动物：显微注射技术③微生物：感觉态细胞法(4)目的基因的检测与判定①利用DNA分子杂交技术检测目的基因的有无②利用分子杂交技术检测目的基因的转录③利用抗原—抗体杂交技术检测目的基因的翻译④利用个体生物学水平的判定检测重组性状的表达易错警告基因工程操作的8个易错点目的基因的插入位点不是任意的基因表达需要启动子与停止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与停止子之间的部位。基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象第一步存在逆转录法获取DNA，第二步存在黏性尾端连结现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。原核生物作为受体细胞的长处：生殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。一般状况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可防止质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连结。目的基因进入受体细胞内，而且在受体细胞内保持稳固和表达的过程，称为转变。转变的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。不熟习标记基因的种类和作用：标记基因的作用——挑选、检测目的基因能否导入受体细胞，常有的有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。对受体细胞模糊不清：受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培育)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则一定用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一般不用支原体，原由是它营寄生生活；必定不可以用哺乳动物成熟的红细胞，原由是它无细胞核，不可以合成蛋白质。(8)还应注意的问题有：①基因表达载体中，启动子(DNA片段)≠开端密码子(RNA)；停止子(DNA片段)≠停止密码子(RNA)。②基因表达载体的建立是最核心、最重点的一步，在体外进行。3．以下相关基因工程操作的表达中，正确的选项是()A．用同种限制酶切割载体与目的基因可获取同样的黏性尾端B．以蛋白质的氨基酸序列为依照合成的目的基因与原基因的碱基序列同样C．检测到受体细胞含有目的基因就标记着基因工程操作的成功D．用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是由于其抗性基因便于与外源基因连结答案A分析一种氨基酸能够由多种密码子控制，所以以蛋白质的氨基酸序列为依照合成的目的基因与原基因往常不一样；只有目的基因表达，使受体表现出目标性状或获取目标产物才标记着基因工程操作的成功；抗生素抗性基因作为标记基因，用于检测目的基因能否导入受体细胞。4．浙江大学农学院喻景权教讲课题组研究发现，一栽种物激素——油菜素内酯能促使农药在植物体内的降解和代谢。用油菜素内酯办理后，很多参加农药降解的基因(如P450基因和红霉素抗性基因)的表达和酶活性都获取提升，在这些基因“指导”下合成的蛋白酶能把农药渐渐转变为水溶性物质或低毒甚至无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一步进行了以下的实验操作，请回答以下问题：获取油菜素内酯合成酶基因的方法有____________________________________。步骤①用PCR技术扩增基因时用到的耐高温酶往常是指______________________________；步骤②用到的酶有___________________________________________________________________________________________________________________________________。图中导入重组质粒的方法是____________，在导入以前应用一定浓度的__________________办理受体细菌。导入重组质粒2此后，常常还需要进行检测和挑选，可用____________________制成探针，检测能否导入了重组基因，在培养基中加入________________可将含有目的基因的细胞挑选出来。(4)请你为该课题命名：____________________________________________________。答案(1)从cDNA文库中获取、从基因组文库中获取、人工合成目的基因或PCR扩增技术(任选此中两项即可)TaqDNA聚合酶限制酶和DNA连结酶转变法氯化钙溶液红霉素抗性基因红霉素研究油菜素内酯可否促使土壤中农药的分解分析进行基因工程操作时，第一要获取目的基因，其方法有多种：从cDNA文库中获取、从基因组文库中获取、人工合成目的基因或PCR扩增技术等。在建立基因表达载体的过程中，用到的工具酶有限制酶和DNA连结酶。图中的受体细胞是细菌，故用转变法导入基因表达载体，导入后，需查验和挑选。从图中能够看出，最后是通过比较实验来查验转基因细菌对土壤中残留农药的分解能力。1．获取目的基因(1)直接分别从基因组文库中获取：即用限制酶进行切割、分别从cDNA文库中获取：即利用mRNA反转录形成利用PCR扩增技术：获取大批目的基因人工化学合成：合用于分子较小的基因。2．基因表达载体的建立——基因工程的核心目的：使目的基因在受体细胞中稳固存在，而且能够遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。(2)基因表达载体构成目的基因启动子：为RNA聚合酶辨别和联合的部位，驱动转录mRNA停止子：使转录停止的一段有特别构造的DNA短片段标记基因：为了鉴识受体细胞中能否含有目的基因建立过程3．将目的基因导入受体细胞生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转变法显微注射技术感觉态细胞法受体细胞体细胞受精卵原核细胞将目的基因插入到Ti质将含有目的基因的表达C