临床血液学检验：红细胞膜缺陷的检验

红细胞膜缺陷的检验红细胞膜成分

人的红细胞胞膜由蛋白质、脂质、糖类及无机离子等组成。脂质占50%、蛋白质占40%、糖类占8%。磷脂分子比较特殊，它主要有一个圆球状的头部（亲水端）和两个细长的尾部（疏水端）。而细胞膜是由磷脂双分子层为基本支架，其间镶嵌着多种膜蛋白。红细胞膜结构红细胞膜的特点：1.膜的不对称性

2.膜的流动性红细胞膜缺陷检验方法红细胞膜蛋白电泳分析红细胞渗透脆性试验红细胞孵育渗透脆性试验自身溶血试验及其纠正试验酸化甘油溶血试验高渗冷溶血试验红细胞膜蛋白电泳分析

方法：红细胞膜蛋白的十二烷基硫酸钠聚丙酰胺凝胶电泳原理：SDS与红细胞膜蛋白结合成SDS多肽复合物，并进行SDS电泳，根据各种膜蛋白相对分子质量的不同，得到电泳图谱，求出各膜蛋白组分百分率应用评价：操作复杂，但可直接反应红细胞膜蛋白缺陷，有助于溶贫病因查找，是红细胞膜缺陷性疾病诊断的主要依据红细胞渗透脆性试验实验原理：

红细胞渗透脆性试验是检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液抵抗力的一个半定量试验。根据不同NaCl浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况间接反映红细胞表面积与容积的比值，反映对低渗盐溶液的抵抗性。比值愈小，红细胞抵抗力愈小，易于破裂，渗透脆性增高；反之抵抗力增大，不易破裂，渗透脆性减低。红细胞渗透脆性试验结果示意图红细胞渗透脆性试验结果示意图红细胞渗透脆性试验参考范围：简易半定量法开始溶血：3.8~4.6g/LNaCl溶液。完全溶血：2.8~3.2g/LNaCl溶液。

红细胞渗透脆性试验临床意义：1.增高

主要见遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血性贫血、遗传性口型红细胞增多症等。2.减低

主要见于珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白C、D、E病，低色素性贫血，阻塞性黄疸，脾切除术后（红细胞胞膜面积增大）、肝炎、肝硬化、肝癌等。某些中药（如当归）、磁场、紫外线亦可降低红细胞渗透脆性。球形红细胞椭圆形红细胞红细胞渗透脆性试验应用评价1.本试验简便实用，但应严格控制影响试验因素；本试验敏感性较差，需结合其他试验项目检查结果进行综合分析。2.本试验对溶血性贫血的病因诊断有参考价值，渗透脆性增高、减低和正常，分别提示溶血可能是由于红细胞的膜、血红蛋白和酶的异常所引起。3.对红细胞变形性轻型病例的诊断，采用敏感性更高的红细胞渗透脆性孵育试验更有价值。红细胞孵育渗透脆性试验原理：将患者血液置于37℃孵育24小时，使红细胞代谢继续进行。由于能源葡萄糖的消耗，储备的ATP减少，红细胞膜对阳离子的主动传递受阻，造成钠离子在红细胞内聚集，细胞膨胀，孵育渗透脆性增加。有细胞膜缺陷及某些酶缺陷的红细胞内能源容易耗尽，使孵育脆性明显增加临床意义：多用于轻型遗传性球形红细胞增多症、遗传性非球形红细胞溶血性贫血的诊断与鉴别诊断自身溶血试验及其纠正试验

实验原理：红细胞在37℃孵育48小时，其间由于膜异常引起Na+内流倾向明显增加，钠泵作用增加，ATP消耗过多，或糖酵解途径酶缺乏所引起的ATP生成不足等原因，导致ATP储备量减少，钠泵功能减弱，Na+和水在细胞内蓄积，红细胞膨胀，破解溶血，称为自身溶血试验（autohemolysistest）。在孵育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察溶血能否有一定的纠正，称为纠正试验（correctingtest）。自身溶血试验及其纠正试验参考范围：红细胞在无菌条件下孵育48小时，不加纠正物的溶血率一般<4.0%,加葡萄糖的溶血率<0.6%，加ATP的溶血率<0.8%.自身溶血试验及其纠正试验

临床意义：1.遗传性球形红细胞增多症自身溶血率增加，能被葡萄糖或ATP纠正。2.G6PD缺乏症等戊糖旁路代谢缺陷的患者自身溶血率增加，能被葡萄糖纠正。3.PK缺乏症时，不能利用葡萄糖产生ATP，其自身溶血率明显增加，不能被葡萄糖纠正，但能被ATP纠正。4.获得性自身溶血性贫血或自身免疫性溶血性贫血时，试验结果常各有不同，对诊断的意义不大。自身溶血试验及其纠正试验

应用评价：本试验不够敏感和特异，仅对遗传性球形红细胞增多症有较大的诊断价值。若结合其他试验，对多种原因导致的溶血性贫血的鉴别诊断有参考价值。酸化甘油溶血试验实验原理：酸化甘油溶血试验（acidifiedglycerinhemolysistest,AGLT）的原理是：当甘油存在于氯化钠磷酸缓冲液的低渗溶液时，可阻止低渗溶液中的水快速进入红细胞内，减慢溶血过程。但甘油与膜脂质又有亲和性，可使膜脂质减少，促进红细胞溶血。检测时，吸光度随溶血的增加而下降。当红细胞膜蛋白与膜脂质有缺陷时，它们在Ph6.85的甘油缓冲液中较正常红细胞溶解速度快，导致红细胞悬液的吸光度下降至起始吸光度一半时所需的时间（AGLT50）明显缩短。酸化甘油溶血试验参考范围：AGLT50>290s。临床意义：1.缩短遗传性球形红细胞增多症AGLT50可明显缩短（25~150s），自身免疫性溶血性贫血、肾衰竭、妊娠等AGLT50也可缩短。2.HbH红细胞溶解明显减少，与缺铁性贫血不同，可作为初筛试验。应用评价：本试验对遗传性球形红细胞增多症诊断的敏感性和特异性较高，也是进行家系调查的较理想方法。本试验操作简单，但应准确配制所用试剂盒，严格控制试验温度，以保证结果的可靠性。高渗冷溶血试验实验原理：在高渗状态下，温度骤然变化影响红细胞膜脂质的流动性，并可能累及膜磷脂和膜骨架蛋白结合位点，红细胞容易破裂而发生溶血。当膜蛋白缺陷导致膜表面积与体积比值降低，溶血率明显增加；反之，溶血率降。本试验即测定红细胞在不同浓度高渗缓冲液中，从37℃水浴立即置于0℃水浴一定时间的最大溶血率。参考范围：

9mmol/L或12mmol/L蔗糖：最大溶血率66.5%~74.1%。

7mmol/L蔗糖：最大溶血率0.1%~16.9%。高渗冷溶血试验临床意义：增加遗传性球形红细胞增多症明显增加。降低珠蛋白生成障碍性贫血和异常血红蛋白病明显降低。正常自身免疫性溶血性贫血基本正常。应用评价：本试验简便、易行，无需特殊试剂和仪器，是遗传性球形红细胞增多症的筛检试验之一。红细胞膜缺陷检验方法红细胞膜蛋白电泳分析红细胞渗透脆性试验红细胞孵育渗透脆性试验自身溶血试验及其纠正试验酸化甘油溶血试验高渗冷溶血试验病例女，36岁，因“中期妊娠、重度贫血”入院。既往史：无特殊。查体：贫血面容，心肺查体未见明显异常，无头晕、眼花，无胸闷、气促，无心悸，无恶心、呕吐，无皮肤瘀点、瘀斑，无咳嗽、咳痰，无腹痛、腹胀，无阴道流血、流水，无血尿、黑便等不适。检验检查结果：网织红细胞比率:3.18%，未成熟网织红细胞:0.09%，平均网织RBC体积:157.4fLRBC(1012/L)Hb(g/L)Hct(%)MCV(fL)MCH(pg)2016-01-131.086312.8118.558.32016-02-231.265816.0124.6462016-02-290.965414.0145.756实验室检查抗核小体抗体：阴性，抗SS-A抗体:阳性(+)，抗SS-B抗体:阴性，抗Sc1-70抗体:阴性，抗Sm抗体:阴性，抗着丝点B蛋白抗体:阴性，抗Jo-1抗体:阴性，抗nRNP/Sm抗体:阴性，抗核糖核蛋白抗体:阴性，抗组蛋白抗体:阴性，抗双链DNA抗体:阴性，抗核抗体定量:141.17U/mL。白蛋白:33.7g/L，总胆红素:33.7umol/L，直接胆红素:6.5umo