选修一微生物的实验室培养专家讲座

专题2微生物培养与应用课题1微生物试验室培养选修一微生物的实验室培养专家讲座第1页培养基能够分为哪几类？培养基普通都含有哪些营养物质，另外还要满足哪些要求？取得纯净培养物关键是什么？什么是消毒、灭菌，惯用方法有哪些？制备牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤？

学习目标怎样倒平板？选修一微生物的实验室培养专家讲座第2页微生物类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞？选修一微生物的实验室培养专家讲座第3页选修一微生物的实验室培养专家讲座第4页一、培养基1.概念：人们按照微生物对_________不一样需求，配置出供其____________营养基质。营养物质生长繁殖2.培养基类型和用途按物理性质固体培养基:加琼脂；用于分离、判定、计数液体培养基：不加凝固剂；用于工业生产。半固体培养基：加少许琼脂；可用于保藏菌种。选修一微生物的实验室培养专家讲座第5页按化学成份合成培养基：成份明确；分类判定。天然培养基：成份不明确；用于工业生产。按目标用途分判别培养基：培养基中加入某种试剂或化学药品，区分出不一样类型微生物。选择培养基：依据某一个或一类微生物特殊营养要求或对一些物理、化学抗性设计培养基。如用青霉素选出酵母菌等。选修一微生物的实验室培养专家讲座第6页选择培养基选择培养基应用加入青霉素分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌不加氮源分离固氮菌不加含碳有机物无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素分离导入了目标基因受体细胞在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基。选修一微生物的实验室培养专家讲座第7页判别培养基依据微生物代谢特点在培养基加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以判别不一样微生物只起判别作用，并不能抑制其它微生物

选修一微生物的实验室培养专家讲座第8页固体培养基液体培养基选修一微生物的实验室培养专家讲座第9页培养基普通都含有哪些营养物质，另外还要满足哪些要求？选修一微生物的实验室培养专家讲座第10页不论哪种培养基，普通都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,比如:生长因子(即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。选修一微生物的实验室培养专家讲座第11页一.培养基：微生物生存环境和营养物质1.基本成份：碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：对于异养微生物，含C、N化合物既为碳源，也是氮源。选修一微生物的实验室培养专家讲座第12页牛肉膏蛋白胨培养基是一个应用最广泛和最普通细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g选修一微生物的实验室培养专家讲座第13页培养基配制标准⑴目标明确：⑵营养全方面、浓度适宜、百分比恰当⑶适宜pH值：有机碳源异养型：依据微生物种类、培养目标选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂（CO2碳源）生产科研选修一微生物的实验室培养专家讲座第14页2.无菌范围：试验操作空间消毒操作者手、衣着消毒试验用具灭菌试验操作过程二.无菌技术：预防外来杂菌污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作超净工作台选修一微生物的实验室培养专家讲座第15页二、无菌操作技术1.取得纯净培养物关键？预防外来杂菌入侵2、无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？防止操作者本身被微生物感染选修一微生物的实验室培养专家讲座第16页消毒与灭菌消毒：使用较温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物（不包含芽孢和孢子）。灭菌：使用强烈理化原因杀死物体内全部微生物，包含芽孢和孢子。灭菌与消毒技术是微生物相关工作中最普通也是最主要技术。选修一微生物的实验室培养专家讲座第17页芽孢

有些细菌在一定条件下，细胞里面形成一个椭圆形休眠体，叫做芽孢。芽孢壁很厚，对恶劣环境有很强抵抗力。每一细胞仅形成一个芽孢，所以其没有繁殖功效。细菌、原生动物、真菌和植物等产生一个有繁殖或休眠作用生殖细胞。能直接发育成新个体。孢子——特殊休眠结构选修一微生物的实验室培养专家讲座第18页消毒方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线适用对象：操作空间、液体、双手等选修一微生物的实验室培养专家讲座第19页灭菌方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.选修一微生物的实验室培养专家讲座第20页请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。（1）培养细菌用培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）试验操作者双手思考消毒灭菌灭菌选修一微生物的实验室培养专家讲座第21页练习：思索并讨论下面仪器分别用什么样消毒和灭菌方法？培养基培养皿空气接种环双手牛奶②巴氏消毒③化学消毒⑤紫外线消毒⑥高压蒸气灭菌①灼烧灭菌④干热灭菌选修一微生物的实验室培养专家讲座第22页单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功效：1.定义：三、菌落判定菌种主要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体选修一微生物的实验室培养专家讲座第23页1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.大肠杆菌纯化培养㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成份用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少许水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿选修一微生物的实验室培养专家讲座第24页倒平板约50℃预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基选修一微生物的实验室培养专家讲座第25页1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？问题讨论

答：用手触摸，刚不烫手。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？

答：灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。选修一微生物的实验室培养专家讲座第26页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？

答：皿盖凝结水珠，预防水珠落入培养基，造成污染；平板倒置，预防培养基表面水分挥发。

答：最好不用，空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生。选修一微生物的实验室培养专家讲座第27页二.大肠杆菌纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环预防划破培养基（重复试验）（空白对照）选修一微生物的实验室培养专家讲座第28页问题2：每次划线前灼烧接种环目标：问题3：划线结束后灼烧接种环目标：防止接种环上可能存在微生物污染培养基杀死上次划线结束后残留菌种及时杀死接种环上残留菌种，防止污染环境和操作者。问题1：第一步灼烧接种环目标：问题讨论选修一微生物的实验室培养专家讲座第29页2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？

答：线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。选修一微生物的实验室培养专家讲座第30页4.为何不能划破培养基？一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。选修一微生物的实验室培养专家讲座第31页6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液选修一微生物的实验室培养专家讲座第32页⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超出0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍选修一微生物的实验室培养专家讲座第33页⑴平板划线法：二.大肠杆菌纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后培养基和一个未接种培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并统计选修一微生物的实验室培养专家讲座第34页微生物培养与观察选修一微生物的实验室培养专家讲座第35页大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上经典特征

在普通琼脂培养基上：圆形，边缘整齐，表面光滑，半透明。经典大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上特征为:深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽圆形菌落。选修一微生物的实验室培养专家讲座第36页1.未接种培养基表面是否有菌落生长？假如有菌落生长，说明了什么？

2.在接种大肠杆菌培养基上，能否观察到独立菌落？它们大小、形状、颜色相同吗？

五、结果分析与评价若有，说明培养基灭菌不彻底

相同菌落，接种符合要求选修一微生物的实验室培养专家讲座第37页3.培养12h和24h后，观察到试验结果相同吗？假如不一样，请分析产生差异原因？4.假如在培养基上观察到不一样形态菌落，请分析其可能原因。

大小会有显著不一样无菌操作未到达要求：培养基灭菌不彻底；可能是接种时或培养时污染选修一微生物的实验室培养专家讲座第38页六.菌种保藏1.暂时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长久保留：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃斜面保藏