2022年医学专题-猪蓝耳病及其防控策略20140123-王和平

猪蓝耳病及其防控策略(cèlüè)王和平(hépíng南中岸生物药业有限公司第一页，共六十四页。猪蓝耳病概述(ɡàishù)猪繁殖与呼吸综合征（PRRS，简称猪蓝耳病）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的，以妊娠母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎等生殖(shēngzhí)障碍和各阶段年龄的猪的呼吸道症状和仔猪断奶前死亡率高为主要特征的接触性传染病。第二页，共六十四页。1987，首次在美国“猪的神秘病”；未分离到病毒。1990年六月在德国“欧洲流产风暴”被命名为“母猪后期流产”，1990年12月开始荷兰的“猪流行性流产和呼吸道综合征”，1991年荷兰出现了“蓝色流产”。1991年荷兰中央兽医局用猪肺泡巨噬细胞分离到致病因子(yīnzǐ)“莱利斯塔的病毒”LV--Lelystad（地名），1992年国际兽医局决定使用“猪繁殖与呼吸综合征”。1998年我国的台湾从美国引种猪时就带入本病；1995年我国大陆是从加拿大引种查出PRRSV抗体并分离到病毒。1996年郭宝清首次从国内发病的猪群中分离出PRRSV；2006年，首先在我国南方爆发的“猪无名高热”疫情中，农业部最终调查结果表明，猪繁殖与呼吸障碍综合征变异株在此次疫情中扮演了重要角色。PRRS的流行(liúxíng)史第三页，共六十四页。分类地位

PRRSV属于尼多病毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的成员，根据病毒的抗原性，基因组及致病性的差异，PRRSV可分为2个型，即欧洲型（LV株为代表(dàibiǎo)株）和美洲型（ATCC-VR2332株为代表(dàibiǎo)株），两种毒株间氨基酸的同源性约为60%。PRRS的病原学第四页，共六十四页。PRRSV在OIE和我国病毒分类属于B（II）类动物传染病。粒子为球形，呈20面体对称，直径48-65nm，有囊膜，表面有纤突。核衣壳直径25-30nm，外绕脂质双层膜。N蛋白(dànbái)是核衣壳蛋白(dànbái)，抗原型最强E蛋白是由ORF5编码的，能诱导中和抗体。该病毒不能凝集红细胞，无血凝活性

PRRSV的形态(xíngtài)和理化特性PRRS的形态(xíngtài)第五页，共六十四页。▲PRRSV对乙醚、氯仿等脂溶剂敏感。▲不耐热，56℃处理15-20分钟，37℃处理10-24小时，20℃放置6天，病毒滴度下降10倍。56℃处理45分钟，37℃处理48小时，病毒彻底灭活。▲潮湿的环境有助于PRRSV存活，低温下保存(bǎocún)的PRRSV具有较好的稳定性，而干燥的环境中则迅速失活。▲PRRSV只在一个很窄的pH值范围保持稳定，pH小于5或大于7的情况下，其感染力下降90%以上。

理化(lǐhuà)特性第六页，共六十四页。

PRRSV基因组为不分节段、单股正链RNA病毒，其基因组长约15kb,含有8个开放(kāifàng)阅读框(ORF)，病毒基因组的每个ORF与相邻的ORF发生部分重叠。●ORF1编码(biānmǎ)病毒RNA的复制酶和聚合酶。●ORF2-7分别编码病毒的GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白。分子生物学第七页，共六十四页。ORF2ORF3ORF4ORF5ORF6ORF7AnORF1abAn15.1kb

GP2GP3GP4GP5MN771bp765bp537bp603bp525bp372bpAnAnAnAnAnAnAnmRNA1234567

PRRSVVR2332

PRRSV基因组第八页，共六十四页。●ORF1编码病毒RNA的复制酶和聚合酶。●ORF2-7分别编码病毒的GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白。●由ORF5编码的GP5蛋白为囊膜糖蛋白，可诱导细胞凋亡，这可能与疾病的发生有关。●ORF6编码的M蛋白是基质蛋白，M蛋白不仅可诱导产生中和抗体，还能够诱发很强的特异性细胞免疫应答。●N蛋白即核衣壳蛋白，由ORF7编码，N蛋白在病毒粒子中含量较高，免疫原性极强，是PRRS诊断中具有诊断意义的结构(jiégòu)蛋白之一，但其产生抗体无中和活性和保护性免疫反应。

基因(jīyīn)及其编码蛋白第九页，共六十四页。蓝耳病的四个特点(tèdiǎn)1、抗体依赖性病毒增殖效应(ADE)

ADE是指在一定抗体存在下可介导和加强病毒的感染力。在肺泡巨噬细胞中加入(jiārù)一定滴毒的PRRSV抗体，可以使PRRSV滴度提高10-100倍。第十页，共六十四页。–早期诱导产生的抗体能够促进病毒(bìngdú)在机体内的复制，促进蓝耳病临床症状的形成

非中和抗体(kàngtǐ)中和抗体(kàngtǐ)无抗体存在有抗体存在第十一页，共六十四页。蓝耳病的四个特点(tèdiǎn)２、强烈的免疫抑制破坏非特异免疫的巨噬细胞（PAM）系统(xìtǒng)使猪丧失了抗感染能力、对疫苗的反应能力和对药物治疗的支持能力极易引起混合感染或继发感染第十二页，共六十四页。巨噬细胞的作用(zuòyòng)

健康的猪巨噬细胞吞噬(tūnshì)病源微生物---

机体健康的保障第十三页，共六十四页。蓝耳病致病机理(jīlǐ)蓝耳病毒(bìngdú)强毒导致巨噬细胞死亡第十四页，共六十四页。感染PRRSV链球菌支原体链球菌副猪链球菌链球菌巴氏杆菌链球菌传胸链球菌猪流感链球菌伪狂犬链球菌圆环链球菌猪瘟由蓝耳病引起的混合感染(gǎnrǎn)和继发感染(gǎnrǎn)是使被感染(gǎnrǎn)猪群死亡率高的主要原因

继发感染(gǎnrǎn)免疫抑制猪瘟(zhūwēn)疫苗免疫抗体上不去促进PCV2繁殖和扩散能力第十五页，共六十四页。蓝耳病病毒感染对猪瘟疫苗(yìmiáo)免疫

的影响

第十六页，共六十四页。猪数量72320201814蓝耳感染平均程度（S/P）＊3.222.72.22.01.190.516猪瘟平均抗体水平(阻断率）49.15553.563.6563.575猪蓝耳病感染与猪瘟(zhūwēn)疫苗免疫应答的关系（后备猪）

注：1.各组的S/P值范围分别是3.0以上、2.5～2.0、2.0～1.5、1.5～1.0、1.0以下；2.共102头后备母猪，猪瘟(zhūwēn)疫苗已免疫3次。

结果表明，免疫后猪瘟抗体水平(shuǐpíng)的高低与蓝耳病毒感染有很强的负相关性。蓝耳病毒感染越严重，其瘟猪抗体水平(shuǐpíng)越低；

临床检测一第十七页，共六十四页。第十八页，共六十四页。猪数量1012151515蓝耳感染平均程度（S/P）＊2.782.251.570.680.24猪瘟平均抗体水平(阻断率）40.547.249.950.160.9猪蓝耳病感染与猪瘟疫苗免疫(miǎnyì)应答的关系（经产母猪）

注：1.各组的S/P值范围分别是2.5以上、2.5～2.0、2.0～1.0、1.0～0.4、0.4以下(yǐxià)；2.共67头经产母猪。

结果同样表明，经产母猪免疫后猪瘟抗体水平(shuǐpíng)的高低与蓝耳病毒感染也有很强的负相关性。蓝耳病毒感染越严重，其抗体水平越低；临床检测二第十九页，共六十四页。第二十页，共六十四页。猪数量1012971819蓝耳感染强度（S/P）2.852.251.851.270.670.25PCV抗体1.091.031.010.950.800.79PCV感染(gǎnrǎn)与蓝耳感染(gǎnrǎn)关系注：为两者之间的感染相关性直观些，表中的数据(shùjù)进行了处理第二十一页，共六十四页。结论：①猪群蓝耳病毒感染可强烈干扰了猪瘟疫苗的免疫应答，是目前猪瘟免疫不合格的一个重要原因。②猪群感染圆环病毒（PCV－2）后可加重蓝耳病毒的感染强度，间接干扰母猪群对猪瘟疫苗的免疫应答。办法：选择(xuǎnzé)合格的高效价的疫苗；加强管理提高猪体自身抵抗力。第二十二页，共六十四页。蓝耳病的四个特点(tèdiǎn)3、容易变异(biànyì)蓝耳病病毒是所有检测到的RNA病毒里进化速度最快的病毒。高致病性PRRSV是NsP2基因533-561位连续缺失29个氨基酸和481位氨基酸的缺失毒株，使之表达的E蛋白也发生了改变，毒力显著增强。猪可以被两种或两种以上类型的蓝耳病病毒感染第二十三页，共六十四页。蓝耳病的四个特点(tèdiǎn)4、持续感染猪感染后2~3周内出现病毒血症，且可以(kěyǐ)持续6~7周。蓝耳病毒可以在感染猪体内存在数月，感染猪能排毒80-100天（最长357天）并感染同群猪。持续性感染的后果：亚健康母猪存在，保育猪易感染。第二十四页，共六十四页。蓝耳病的特征之一是其能够长时间在感染猪群及猪体内(tǐnèi)存在，形成持续性感染第二十五页，共六十四页。主要(zhǔyào)传播方式1.通过初乳和乳汁将病毒传给哺乳仔猪2.通过精液传给配种母猪；3.母猪若在怀孕晚期(wǎnqī)感染PRRSV，则可发生经胎盘感染妊娠胎儿

疫病传入的主要方式是引种第二十六页，共六十四页。蓝耳病当前(dāngqián)主要症状母猪没有流产或偶尔出现；死胎、木乃伊可能比较多或根本没有；产弱仔多，八字腿多；部分仔猪眼睑水肿；母猪返情率很高；尤其配种后24-40天；44-61天返情；第一胎母猪返情率比较高；保育或中大猪呼吸道病很严重。喘气、发烧比例(bǐlì)20%以上。保育猪眼睑肿胀、皮肤发白、毛粗硬、甚至腹部出现紫色出血点，耳朵发紫。第二十七页，共六十四页。PRRS-母猪繁殖(fánzhí)障碍表现形式：1、怀孕后期感染，流产，产新鲜死胎，并且产活仔猪在断奶前死亡率升高。2、母猪产前短时发热或厌食，分娩时间延长(yáncháng)，产后无乳。3、母猪出现病毒血症，背腹部或耳部出现针尖状出血点。第二十八页，共六十四页。PRRS-仔猪呼吸(hūxī)障碍表现形式：食欲不振，厌食，四肢(sìzhī)皮肤出现“斑点”样充血或发绀；高热，呼吸困难、腹式呼吸，犬坐；流泪，眼睑水肿并形成“泪斑”第二十九页，共六十四页。1、发热或不发热，厌食，流感样症状；2、难于控制的腹泻(fùxiè)；3、外表正常猪注射其他疫苗后即发病。PRRS-仔猪(zǎizhū)隐性感染第三十页，共六十四页。第三十一页，共六十四页。PRRS-继发感染(gǎnrǎn)皮肤发红，发热，减食，继发细菌感染，副猪、链球菌、传胸。造成病毒病免疫失败，各种疾病混合感染。育肥猪发育迟缓，生长(shēngzhǎng)速度缓慢。保育阶段损失20-30%第三十二页，共六十四页。防控措施(cuòshī)控制(kòngzhì)蓝耳病的三个基本点：合格、优质的弱毒苗免疫最基本(jīběn)的猪场生物安全措施必要的、适时的药物保健措施第三十三页，共六十四页。蓝耳病疫苗目前国内现有(xiànyǒu)灭活疫苗：传统型灭活疫苗高致病性变异株灭活疫苗弱毒疫苗：传统型毒株致弱活疫苗高致病性变异株致弱活疫苗自然弱毒株疫苗第三十四页，共六十四页。国内猪繁殖与呼吸(hūxī)综合征

（PRRS）疫苗株活疫苗经典PRRS疫苗(yìmiáo)

VR2332株CH-1RR98株高致病性PRRS活疫苗湖南株（HuN4-F112株）江西株（JXA1-R株）天津株（TJM-F92）蓝耳病疫苗第三十五页，共六十四页。R98株中岸，瑞普，南农高科3个厂猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(VR2332株)德国1个厂猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(Ch-1R株)哈尔滨维科、上海海利、大北农、成都天邦、普莱柯、诺倍威、南京(nánjīnɡ)乾元浩、华派和易邦9个厂高致病性PRRSV活疫苗(JXA1-R株)9个厂高致病性PRRSV活疫苗（HuN4-F112株）4个厂高致病性PRRSV活疫苗（TJM-F92株）5个厂猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(Ch-1a株）哈尔滨高致病性PRRSV灭活疫苗(JXA-1)19个厂

蓝耳病活疫苗列表（31个厂）目前(mùqián)的蓝耳病疫苗第三十六页，共六十四页。自然(zìrán)弱毒和人工弱毒的区别自然弱毒：本身不致病，在猪体内天然存在，不会(bùhuì)对猪产生任何影响（致病），但是又具有良好的免疫原性，即接种后能有效的预防蓝耳病的发生。人工弱毒：本是强毒，能够引起猪发病，但经过人工方法致弱后，暂时不对猪产生致病性，接种后也能够预防蓝耳病的发生，但后遗症是若干代后存在毒力返强的可能，也就是说接种这种疫苗可能会导致以后蓝耳病的爆发。在科研中，自然弱毒株的疫苗是天然的疫苗，是可遇不可求的毒株，很多研究人员一辈子都得不到。37第三十七页，共六十四页。蓝耳病弱毒苗免疫(miǎnyì)后的好处疾病状态下缩短排毒时间缩短病毒血症和持续感染时间减轻肺组织的病变缩短病毒在脏器的存留时间预防情况下提高猪群免疫力杜绝了流产风暴，减轻PRDC的病情(bìngqíng)降低保育猪的发病率和死亡率、发病时疾病的可控程度显著提高减少混合感染和继发感染：可以降低圆环病毒感染对养殖场的影响第三十八页，共六十四页。影响(yǐngxiǎng)PRRS疫苗质量的关键因素免疫佐剂快速提升免疫力，增强(zēngqiáng)免疫效果第三十九页，共六十四页。兰芷优---中国(zhōnɡɡuó)第1个蓝耳病自然弱毒活疫苗第四十页，共六十四页。兰芷优的优势(yōushì)自然弱毒株，安全稳定不变异免疫原性好，经典变异均保护抗原含量高，纯净高效无应激进口稀释液，快速提升(tíshēng)免疫力滴鼻和肌注，适用于任何猪群第四十一页，共六十四页。一、自然(zìrán)弱毒株，毒力不返强，安全稳定不变异毒力返强试验：R98株分离自蓝耳抗体阳性(yángxìng)而临床健康的猪群，为美洲型自然弱毒株，高度安全稳定。疫苗种毒在细胞上连续传100代，猪体连续回归10代，毒力稳定，不返强。疫苗种毒体内外连续传30代，病毒基因序列未发生变异，遗传稳定性好。第四十二页，共六十四页。兰芷优种毒不同(bùtónɡ)代次病毒接种

仔猪无致病性（1-100代不返强）不同代次病毒仔猪发病率病变阳性率病理变化临床症状F1、F5、F10、0000F20、F35、F1000000第四十三页，共六十四页。兰芷优种毒不同代次病毒接种母猪(mǔzhū)无致病性试验（F1-F100)不同代次病毒母猪发病率病变阳性率病理变化临床症状过胎率F1、F5、F1000000F20、F35、F10000000第四十四页，共六十四页。不同免疫剂量的安全性试验：分别以单剂量和10倍剂量免疫1日龄仔猪、14日龄仔猪和不同日龄妊娠母猪（配种前21天后备母猪，妊娠30天经产母猪，妊娠60天经产母猪及妊娠90天经产母猪）。免疫仔猪及母猪精神、食欲、体温均正常，无任何不良反应，母猪在预产期顺利产仔，对各组所产仔猪进行(jìnxíng)RT-PCR检测，均未检测到蓝耳病毒。结果表明：该疫苗对猪是高度安全的。第四十五页，共六十四页。母猪(mǔzhū)安全性试验母猪种类后备母猪（配种前21天）经产母猪（妊娠30天）经产母猪（妊娠60天）经产母猪（妊娠90天）组别免疫组对照组免疫组对照组免疫组对照组免疫组对照组母猪头数55555555总产仔数5554555453545555死胎22122123弱仔11211211健康仔猪数5251525150515251检测仔猪带毒情况*0/550/540/550/540/530/540/550/55仔猪成活率94.5%94.4%94.5%94.4%94.3%94.4%94.5%92.7%

注：各免疫每头肌肉注射10头份“兰芷优”，对照组肌肉注射生理盐水。免疫后观察猪体温、采食量、增重情况，产仔情况及仔猪成活率等指标，并且对所有(suǒyǒu)仔猪进行蓝耳病毒PT-PCR检测。“检测仔猪带毒*”：分母代表检测数，分子代表阳性数。第四十六页，共六十四页。仔猪(zǎizhū)安全性试验组别（10头/组）接种剂量(头份/头)接种途径连续观察21日临床表现连续28天RT-PCR检测仔猪血清中PRRSV*7天14天21天28天7日龄健康易感仔猪1滴鼻10/10正常9/106/100/100/107日龄健康易感仔猪1肌注10/10正常10/106/101/100/107日龄健康易感仔猪对照肌注10/10正常0/100/100/100/1014日龄健康易感仔猪10肌注10/10正常10/107/102/100/1014日龄健康易感仔猪对照肌注10/10正常0/100/100/100/10注：评价指标为：观察免疫猪体温、采食量、增重情况；“*”：分母代表检测数，分子(fēnzǐ)代表阳性数。第四十七页，共六十四页。兰芷优10个使用剂量注射后观察(guānchá)21天，猪的体温、精神、食欲没变化5头份疫苗各注射0.2ml观察(guānchá)10天全部存活兰芷优疫苗(yìmiáo)安全检验第四十八页，共六十四页。二、免疫原性好，经典(jīngdiǎn)变异均保护R98株与美洲型经典毒株VR2332株同源性高达99.5%以上，免疫后能有效刺激机体快速产生(chǎnshēng)保护性抗体、细胞免疫和粘膜免疫，对蓝耳病经典毒株和变异毒株均能提供有效保护。对不同的蓝耳病病毒攻击，均有良好的交叉保护，对普通蓝耳病临床保护95.4%以上，对高致病蓝耳病保护率为80%以上。完全可代替进口蓝耳病活疫苗。第四十九页，共六十四页。兰芷优对变异株蓝耳病毒的攻毒保护(bǎohù)试验用28~30日龄PRRSV抗体阴性健康仔猪5头，每头颈部肌肉注射1头份兰芷优，同时设同龄(tónɡlínɡ)PRRSV抗体阴性健康仔猪5头作为对照。接种后30日，分别用变异毒株JXA1株（105.0TCID50/ml）攻击，滴鼻2ml/头，连续观察4周，根据体温、临床表现和转归情况进行判定。结果表明：疫苗免疫组发病率降低80%，死亡率降低40%。试验证明：“兰芷优”对变异株蓝耳病有很好的免疫保护作用。见下表：第五十页，共六十四页。兰芷优对变异(biànyì)株蓝耳病毒的攻毒保护试验组别猪号体温≥40℃天数临床表现*归宿**发病率（%）死亡率（%）兰芷优免疫组A2--20（1/5发病）0（0/5发病）B4--C2--D5--E6++-对照组F8++++100（5/5发病）40（2/5死亡）G10++++H6++-I7++-J8++-注：试验中攻毒毒株为猪繁殖与呼吸综合征变异毒株JXA1株；临床表现*：-无明显临床异常表现，+表示临床症状严重程度；归宿**：-没有(méiyǒu)死亡，剖杀，+死亡。第五十一页，共六十四页。三、抗原含量高，纯净(chúnjìng)高效无应激采用细胞工厂替换原有转瓶生产工艺，同时采用病毒复种技术，在提高了病毒产量的同时，确保疫苗(yìmiáo)批内一致，批间稳定；采用超声破碎收毒工艺，规避传统工艺对病毒免疫原性和效价的影响，确保每头份疫苗抗原含量≥106.0TCID50(国标≥105.0TCID50)，病毒含量高，免疫无需加量，一次免疫仅需1头份，即可产生较好的免疫保护。采用低温连续流离心纯化技术，快速有效地去除细胞培养液中细胞碎片等杂蛋白，疫苗纯净无应激。第五十二页，共六十四页。细胞(xìbāo)工厂细胞工厂（CellFactory）是一种设计精巧的细胞培养装置，在有限的空间内利用了最大限度(xiàndù)的培养表面，从而节省了大量的厂房空间，无需进行任何厂房改造即可实现扩大产能的目的。采用世界最先进的丹麦NUNC公司生产的NUNC细胞工厂系统培养疫苗。目前有1，2，10和40层的规格的设备。低污染风险，节省空间，培养表面经测试保证最有利于细胞贴附和生长。特有的专利设计能有效的保证操作的无菌性，最大限度降低批间差异，提高病毒产量，实现操作规程化。第五十三页，共六十四页。细胞工厂(gōngchǎng)培养设备第五十四页，共六十四页。病毒(bìngdú)复种细胞长满单层，接种病毒后，在培养液中再接种一层细胞，提高细胞密度(mìdù)，提高病毒产量，减少批间差异。第五十五页，共六十四页。连续流管式分离机低温(dīwēn)连续流离心纯化技术

Continuouscentrifugationtechnique

1、去除杂蛋白等，降低疫苗(yìmiáo)副反应2、低温环境，快速离心，保持良好的抗原性第五十六页，共六十四页。四、进口专用稀释液，快速(kuàisù)提升免疫力中岸生物采用法国进口免疫(miǎnyì)增强剂，调节免疫(miǎnyì)功能，特别是提高细胞免疫(miǎnyì)效力，可有效提升疫苗的免疫(miǎnyì)效果。免疫(miǎnyì)后7天产生抗体，14天即可产生有效保护，一次免疫(miǎnyì)有效抗体水平可维持140天。用于紧急免疫(miǎnyì)，效果显著。第五十七页，共六十四页。五、滴鼻和肌注，适用(shìyòng)于任何猪群兰芷优可滴鼻免疫，蓝耳病主要是经呼吸道传播感染的，模拟自然感染途径，滴鼻接种可快速产生局部粘膜免疫，形成蓝耳病的第一道防疫屏障，再结合注射(z