全文03-10压缩版脂氧素对心搏骤停后心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究

脂氧素对心搏骤停肌缺血再灌注损伤的作用及机制研背景和目标以缺血再灌注为始动因素的炎症级联反应加重了心脏损伤，导致的心功径来改善复苏肌损伤。，材料和方法18Sham（n=6CPR（n=6）LX组（n=6。LX组合CPR组动物用气管夹闭法诱导心搏骤停造模，行心肺复苏到自主（ROSC2%乙醇溶液。ShamROSC6h后取血和心肌组织检测验证等指标和观察组织损伤。结果LXLVSP、dp/dtmax、-dp/dtmaxMAPCPR6LXCPR组明显下降，pH降低坏死范围明显小于CPR组；心肌细胞及间质结构损伤和炎性浸润轻于CPR，IL-10表达较CPR结论给予外源性脂氧素A4可以显著改善兔复苏肌损伤，具体机制可能是促进心搏骤停肌缺血再灌注后的炎症消退，减少中性粒细胞浸润，抑制NF-κB的活化，下调引reperfusionI/R）症反应综合征（SystemicinfltoryresponsesyndromeSIRS脂氧素A4对多种炎症细胞和炎症相关有显著的负性调节作用，并同时上调2、IL-4IL-10等抗炎因子的表达等[3,4]，因其具有广泛的抗炎促消退作用，被看成是炎症反应的“刹车信号”A4对于缺血再灌注后脑损伤及结扎冠状动脉所造成的心肌缺血再灌注损伤的保护作用已得到证实[5,6]，但尚无关于心搏骤停肌缺血再灌是否具有保护复苏肌损伤及改善血流动力学的作用，并研究其可能机制。材料与方所有实验动物大学A3实验动物中心提供实验场地为大学中南医院实验动物中心。18Sham组（n=6，CPR组（n=6）和LX组（n=6。1.9~2.kg12h1%（3.5mlkg4TYEvita2dua，，（Draeger医疗设备，中国设置呼吸频率为50次/分钟，潮气量10ml/kg，吸呼比为1:2，氧源为空气。右侧股动脉压、中心静脉压和左室内压都使用16G心脏导管连接BL-420F生物信号系统（泰能，中国）监测，心电图采用Ⅱ导联，，持续监测肢体Ⅱ导联心电图,稳定并记录基础血流动力学数据后，LXCPR组动物关闭呼吸机，在呼气相夹闭气管插管约5~9分钟，诱导3分钟的心搏骤停（自主脉搏，（MAP≤10mmHg180次/1/350次/2分钟后观察5秒钟，若没有达到ROSC（自主脉搏恢复，并且伴随动脉收缩压（Systolicarterial，从心电监护上观察出现室颤则予以双相电除颤1能量为10J，电除颤为每2分钟1次，10ROSC，则视为复苏失败。持续自主循环恢复定义为ROSC持续时间大于5分钟，并定义恢复自主循环的时相点为ROSC后0h。然后LX组给予脂氧素A4（1.5ug/kg）乙醇溶液，对照组给予等体积2%乙醇溶液。连续监测复苏死动物取心脏，剪取心尖做病理、电镜检测，剪取500mg心室肌液氮保存集齐肌匀浆WesternBlot和ELISA，剩余部分心肌做坏死面积检测。，CAROSCROSC ROSCAnesthesiaWave 5-

Drug

血流动力学及心功能测定血压内压等数据由系统BL-420F生物机能取血检测：Sham组及各LX组复苏后6h后股动脉穿刺取血快速送检查血常规和血气，靠近心尖切取4××4mm的心肌组织，加入1:0体积的4﹪的多聚，℃冰箱保存。（1部分组织行快速E（部分组织用TUEL（3）部分组织用免疫组化观察L1β、L6、L10、TN-α、B在心肌组织的分布，并用H2000晰度彩色医学图文分析系统值进行数据分析。各切片的制作均严格按照指定程序及试剂盒说明书进行。冰上剪取300mg到500mg的左室心肌液氮冻存（1）ELISA方法测定兔心肌组织匀IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TnI的含量（2）WesternBlot检测NF-κBp65的含量。NF-κBp65的测定程序严格按照试剂盒说明书进行。×100％取ROSC6h后各组心尖组织检测在冰上切取各组心尖部1×1×1mm的心肌组织，2.5%铅，在H-600型透射电镜（日立公司，）下观察并照相。统计学处理：计量资料表示为均数±标准差（x±s，多个样本均数之间的比较采用单ANOAmeasurement （HP（MAP（VSP3.1可知，CPR组和LXMAP、LVSP、dp/dtmax、-（P<0.05CPR组（P<0.05；VSP0.5h、2h、4h、6hCPR组（P<0.05；dp/dtmax（P<0.05，-复苏后2h、6h两个时相点高于CPR组（P<0.05。CPR组和LX组的心率与复苏前比较无（P>0.05（P>0.053.2各组心肌炎性和凋亡坏死表达水平比较（x项 CPR组 TNF-α(pg/ml)IL-1β(pg/ml)IL-6(pg/ml)IL-10(pg/ml)NF-κBp65(IOD值

β-actin(IOD值)IOD比值

3.57±0.28Sham组比较，＊P＜0.05CPR组比较，P＜0.05Sham组比较，0.013.23.2.1可知，各组间左室切片总面积基本一致，无显著性差异＞0.05（P＜0.05（P＜0.053.2.1TTC由表3.23.2.2可知，左室心肌凋亡CPRLX组高于Sham组（P<0.05，同LXCPR组，有显著性差异（P<0.05（P<0.05（P<0.053.23.2.3.13.2.3.2Sham组在心肌细胞结构完整性、肌纤维肿胀、中心粒细胞浸润等方面优于PCRLXLX组优于PCR组。LX组较Sham组表达（P＜0.05（P＜0.05（P<0.05（P<0.053.2.3.1各组心肌光镜结构比较（HEA.Sham组；B.CPR组；C.LX3.2.3.2各组心肌光镜结构比较（HEA.Sham组；B.CPR组；C.LXA.Sham组；B.CPR组；C.LX NF-κBp65ß-action1、2、3Sham组4、5、6CPRNF-κBp657、8、9LXNF-κBp65CPR组减少3.2.4WesternBlotNF-κBp65蛋白的表达ROSC6h血常规LX组中性粒细胞、左室心肌坏死面积、TnI、凋亡指数、HE染A4能显著减少中性粒细胞的活化和浸润，减轻心博骤停肌细胞的坏死和凋亡。至于其引起的血小板减少，目前尚无表明是其副作NF-κBA4促进心搏骤停后炎症消退的机制涉及下NF-κB在心肌细胞和炎性细胞的核位移，具体机制有待进一步的研究。实验组6pH较对照组下降，BE较对照组下降，余指标无统计学差异，推测可能表明是脂氧素A4的副作用，亦可能是心搏骤停后未对实验动物纠正酸，具体机制有待进心搏骤停肺复苏实际是机体经历缺血损伤后再灌注的一个过程，不仅没有使缺血损伤的组织结构得以修复，甚至加重了心脏的结构损伤和功能。其涉及到的因素有：钙超载、氧自由基、中性粒细胞的激活、心肌能量代谢、血管内皮损伤、心肌凋亡等脂氧素A4（Lipoxins，LXA4）是二十烷类中一类花生四烯酸的代谢产物，对多种TNF-α、IL-1TNF-β1，IL-10的表达[5,11,12]NF-κBNF-κB的负性调节不仅可以抑制炎性刺激引起的包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和血小板活化因子（PAF）等在