免疫组化应用培训课件

免疫组化应用免疫组化介绍

免疫组化原理Enlivision染色方法免疫组化的使用范围各系统肿瘤的抗体表达2免疫组化应用免疫组化的原理根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理，应用标记抗体检测组织中未知抗原的方法。抗原+抗体（标记）→抗原抗体复合物通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分（蛋白—抗原）显示系统：抗原抗体复合物+检测系统将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）3免疫组化应用PrimaryAntibodyPolymercomplexSubstrate-chromogensolutiontissue4免疫组化应用Enlivision染色方法(1)、将切片捞至APES胶片上，放入60℃温箱中烘烤1小时。(2)、经二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水后流水冲洗。(3)、过3％H2O2中20min后流水冲洗。(4)、修复高火3min后，低火15min后，自然冷却至室温。(5)、取出玻片放至湿盒，PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50μl的第一抗体40min。(6)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50μl的聚合物增强剂(试剂A），室温孵育20min。(7)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50μl的酶标鼠/兔聚合物(试剂B），室温下孵育30min。(8)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加2滴或100μl的DAB液，显微镜下观察，10min显色。(9)、流水冲洗，苏木素复染1-2min，0.1％盐酸分化，自来水冲洗后返蓝。(10)、梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。5免疫组化应用免疫组化的使用范围组织学标本中的应用细胞块中的应用6免疫组化应用各系统肿瘤的抗体表达对肿瘤进行来源分类

上皮性肿瘤的标记物CK间叶肿瘤的标记物Vimentin淋巴造血系统肿瘤的标记物LCA神经内分泌肿瘤的标记物Syn、CgA、CD56各系统肿瘤的抗体表达7免疫组化应用上皮性肿瘤中的腺癌8免疫组化应用CK7+CK20-Villin+Villin-可见于：胃腺癌(41.67%)、乳头状肾细胞癌(17.39%)、乳腺浸润性导管癌(5.36%)、卵巢浆液性腺癌(3.7%)少见于：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、直肠腺癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢粘液性癌。可见于：乳腺浸润型小叶癌(100%）、肺腺癌(95.83%）、乳腺浸润型导管癌(78.57%)、卵巢浆液性腺癌(70.37%）、嫌色细胞癌(66.67%）、卵巢粘液性腺癌(37.5%）、肺鳞癌(11.43%）、前列腺癌(9.09%）、直肠腺癌(2.78%）、胃腺癌(2.78%）、肾透明细胞癌(2.33%）。少见于：肺小细胞癌、乳头状肾细胞癌。9免疫组化应用CK7+CK20+Villin+Villin-可见于：胃腺癌(13.89%）、卵巢粘液性腺癌(12.5%）、直肠腺癌(5.56%），乳头状肾细胞癌(4.35%）少见于：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、卵巢浆液性癌。可见于：卵巢粘液性腺癌(12.5%）乳腺浸润性导管癌(3.57%）、胃腺癌(2.78%）、直肠腺癌(2.78%）。少见于：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液性癌。10免疫组化应用CK7-CK20-Villin+Villin-可见于：乳头状肾细胞癌(43.47%）、胃腺癌(18.06%）、直肠腺癌(16.67%）、卵巢粘液腺癌(12.5%）、嫌色细胞癌(11.11%）、前列腺癌(4.54%）。少见于：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、乳腺浸润型导管癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液性癌。可见于：肺小细胞癌(100%）、肾透明细胞癌(42/43，97.67%）肺鳞癌(88.57%）、前列腺癌(86.36%）、乳头状肾细胞癌(34.78%）、嫌色细胞癌(22.22%）、卵巢浆液腺癌(18.52%）、乳腺浸润型导管癌(16.07%）、胃腺癌(13.89%）、直肠腺癌(5.56%）、肺腺癌(4.17%）。少见于：乳腺浸润性小叶腺癌、卵巢粘液腺癌。11免疫组化应用CK7-CK20+Villin+Villin-可见于：直肠腺癌(52.78%)、卵巢粘液性腺癌(25%)、胃腺癌(6.94%)、卵巢浆液性癌(3.7%）。少见于：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌。可见于：直肠腺癌(13.89%）、卵巢浆液性腺癌(3.7%）。少见于：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢粘液性癌、胃腺癌12免疫组化应用1、软组织13免疫组化应用小圆细胞肿瘤

CKVimEMALCANSECgADesS-100小细胞未分化癌+-+-----神经内分泌癌+-+-++--神经母细胞瘤-+--++-+/-尤文肉瘤/PNET-+--++-+/-胚胎性横纹肌肉瘤-+----+-恶性淋巴瘤---+----恶性黑色素瘤-+---/+--+(HMB45+)CK、Vim、NSE、CgA、Des、HMB45胞浆

EMA胞膜/胞浆LCA胞膜S-100胞核/浆14免疫组化应用间皮：EMA、Calretinin阳性横纹肌：Desmin(+)Actin、MyoD1（弱+）Myglobin血管：CD31、CD34阳性颗粒细胞瘤：S-100、NSE15免疫组化应用CD34Bcl-2S-100神经纤维瘤+++孤立性纤维性肿瘤++-滑膜肉瘤-+-孤立性纤维性肿瘤CD99+滑膜肉瘤CK、Vimentin双阳16免疫组化应用2、乳腺

P63CK5/6E-cad34βE12导管原位癌+-+-浸润性导管癌--+-浸润性小叶癌---+P63胞核CK5/6胞浆E-cad胞浆、胞膜34βE12胞浆

17免疫组化应用乳腺病理ER、PR显示肿瘤的内分泌表达，与肿瘤的内分泌治疗反应率相关CerbB-2肿瘤相关因子，靶向治疗KI-67显示细胞增殖指数ER、PR胞核CerbB-2胞膜KI-67胞核18免疫组化应用

中间型上皮成熟型

CK5/6+,CK8/18+CK5/6-,CK8/18+干细胞CK5/6+,CK8/18-SMA-,P63-中间型肌上皮成熟型

CK5/6+,SMA+,P63+CK5/6-,SMA+,P63+CK5/6,CK8/18，SMA胞浆P63胞核19免疫组化应用CerbB-2的染色意义阳性强度的判断：强的着色是指4x或10x物镜下易于观察到，弱的强的着色是指需要用40x物镜观察。20免疫组化应用CerbB-2与治疗及预后的关系不仅与浸润型乳腺癌的不良预后有关，并能预测多种化疗药机内分泌治疗的敏感性。靶向药物赫赛汀21免疫组化应用CerbB-2的染色意义0+浸润性肿瘤细胞无着色1+任何比例的浸润性肿瘤细胞呈弱而不完整的包膜着色或＜10%的肿瘤细胞呈弱且完整着色2+≥10%的肿瘤细胞呈现弱或不一致的、完整的包膜着色；或≤30%的肿瘤细胞呈现强且完整的包膜着色3+＞30%的浸润性肿瘤细胞呈强且完整包膜着色22免疫组化应用指导治疗ER,PR,CerbB-2,Ki-67ER+PR+:60-70%的内分泌治疗反应率ER-PR-:10%的内分泌治疗反应率ER+PR-:40%的内分泌治疗反应率ER-PR+:46%的内分泌治疗反应率阳性分级（或阳性细胞数比例）与治疗反应的相关性尚缺乏统一认识23免疫组化应用3、消化CK7-/CK20+胃肠间质瘤CD117，CD34肝TTF-1浆阳、Hep、AFPCDX2主要表达于结肠，胃癌和卵巢粘液性腺癌也有表达CD117胞膜/胞浆，CD34胞膜CDX2胞核CK7，CK20，AFP，Hep胞浆24免疫组化应用肾

CK-HCK-LVimentinE-cadCD10EMACD117透明细胞-++-+(膜)+-（乳头状癌）嫌色细胞癌++-+-/+（浆）Hale铁++（嗜酸细胞腺瘤）集合管癌+++-±Villin-CK-H、CK–L、Vimentin胞浆CD10胞膜EMA、CD117、E-cad胞膜/胞浆

26免疫组化应用移行上皮：正常CK7阳性，CK20阳性提示肿瘤27免疫组化应用5、生殖28免疫组化应用卵巢上皮性肿瘤

CK7+/CK20-，CA125卵巢上皮（+）无性细胞瘤（女性）=精原细胞瘤（男性）

Vimentin，PLAP，CD117胚胎性癌

AFP，CD30，PLAP29免疫组化应用子宫

HCGHPL合体滋养叶+++弱+细胞滋养叶--中间滋养叶+/弱++++HCG，HPL胞浆30免疫组化应用

VimentinERCEA子宫内膜样癌++-宫颈癌--+Vimentin胞浆ER胞核CEA胞膜/胞浆31免疫组化应用前列腺基底细胞阳性标记：高分子量CK（34βE12,CK5/6）P504s肿瘤性腺泡（+），良性腺泡（-）PSA前列腺上皮（+）34βE12，CK5/6，PSA，P504s胞浆32免疫组化应用6、神经内分泌33免疫组化应用甲状腺TGTTF-1CalcitoninCD56乳头状癌++--滤泡癌++-+髓样癌-+++甲状腺乳头