第五章-色谱柱综述

第五章

色谱柱色谱柱确认填充柱与毛细管柱的区分计算柱效和分别度介绍快速色谱介绍保留时间锁定功能理解柱的选择性确认柱操作的步骤学习炉温的恒温操作和程序升温操作样品流动相固定相分别的过程示意图安排填充填充柱载气液体相固体支撑物特别多的孔具有极大的表面积气液色谱(GLC)壁涂开管柱(WCOT)液体相毛细管柱(占应用的90%)“相似相溶"或同极性相互作用通过样品在固定相中的分配或不同溶解度实现分离组分基于不同的极性而分离(偶极力的作用)通常例如： 醇类是极性化合物 聚乙二醇(Carbowax)是极性固定相气液色谱(GLC)ABCD气流色谱过程示意图柱效: 色谱柱形成尖锐峰的能力分离度: 色谱柱将两个峰彼此分开的能力选择性: 色谱柱确认两个峰化学与/或物理性质差别的能力优差优差柱分别指标分析物时间进样不保留组分tmtR'tR我们希望知道组分保留在固定相中的真实时间。将n与柱长相比：或每米塔板数(N)=nL每块理论塔板高度(HETP)=nL因此，柱效越高，“N”值越大，“HETP”值越小n=5.545tR'Wh2tR-tm=tR'tR'tR'计算柱效Rt'=调整保留时间n=有效理论塔板数Wh=半峰宽柱长(cm)不保留组分的保留时间(sec)线速度=估算不保留组分的保留时间如果溶剂是流出的第一个组分，就使用它的保留时间。也可从打火机中取5cc丁烷气，使用丁烷峰的保留时间。GC/MS用空气的保留时间使用如下公式来估算柱长：Length=

dk其中d=柱卷成的圈的直径k=柱圈圈数

=3.14使用下面的公式，可利用线速度计算流量

流量(ml/min)=r2

m60其中r=柱半径cmm=平均线速度cm/sec60=从sec到min的转换因子测量线速度和流量HETPC传质阻力项A涡流项分子扩散项m(optm)}}B{HETP=A++CmBm柱效受载气线速度和流量影响。曲线的最低点代表最小板高HETP(或最大每米理论塔板数)也就是最好的柱效。毛细管柱中不存在“A”项。柱效与载气线速度HETP与线速度形成的曲线叫做范德姆特曲线。曲线最低点的线速度值即为可获得最好柱效的最佳线速度值。1. 运用内径更小的柱子。2. 减小固定相百分组成或固定相液膜厚度。3.减小进样量。4.选用更长的柱子。5.运用程序升温改善后流出组分峰形。@ 好的进样技术可以保障高柱效。进样应当紧凑快速， 以免峰展宽。如何提高柱效时间(Min.)4564.55.51.0E52.0E53.0E54.0E55.0E56.0E5响应值RT=4.41RT=4.59RT=5.10分别度是柱将两个相邻峰分开实力的反映。通过两个欲分别相邻峰的分开程度来测算分别度。一般我们选择两个最难分开的峰，假如它们被成功分开，那么其它的也就解决了。1.18(RT-RT)21(W+W)12R=R=1.5认为可以实现基线分别W1=化合物1的半峰宽W2=化合物2的半峰宽分别度1.欲分别样品2.柱内径3.固定相4.柱长5.膜厚或填充剂%量A. 柱容量B. 保留实力C. 惰性D. 柱效E. 流失柱选择方面的考虑先试手边的柱子向同事询问查询已发表的相像应用假如难以确定，先用一个非极性柱，如HP1或HP5这只是一些好的开端，而操作者必需自行优化条件。柱选择色谱柱类型载气条件色谱炉条件进样参数检测器参数样品信息

应用举例说明：恒温程序升温在整个分析过程中，色谱炉温保持恒定。用初始时间设定运行结束时间。升温速率设为“0”。后流出的峰展宽。

当组分有较宽的沸点范围(>100°C)时运用。削减分析时间并使峰变窄。增加柱流失，引起基线漂移。可设多阶程序升温。HP6890可设“快速变更速率”至120°C/min。柱温操作