实验一药理实验基础知识

药理学实验的基础知识药理学实验的目的和要求药理学实验的目的在于通过循序渐进的常规实验，使学生验证和巩固所学的基本理论；通过综合实验了解较为先进的科研方法和技能，同时培养学生联想及综合分析问题的能力；通过设计性实验，培养学生独立思考、科学思维及创新的能力，建立实事求是、严谨的科学态度，提高解决实际问题的能力，为后续知识的学习和毕业后的科研工作奠定良好的基础。为了达到上述目的，要求学生做到以下几点。【实验前】仔细阅读实验指导，了解实验目的、原理、要求、方法和操作步骤。2.结合实验内容，复习有关药理学、生理学、生物化学及免疫学等方面的理论知识，做到充分理解。3.预测实验中可能出现的情况和发生的问题。【实验时】实验器材的放置力求稳当、整齐、有条不紊。严格按照实验指导上的步骤进行操作，准确计算给药量，节省器材和药品。要注意保护实验动物和标本，避免与实验内容无关的刺激。仔细、耐心地观察实验过程中出现的各种现象，实事求是地记录药物出现反应的时间、表现以及最后的转归，联系课堂讲授的内容进行思考。在实验过程中遇到疑难之处，先要自己设法解决，如一时解决不了，应向指导教师说明情况，请求教师协助解决。对于贵重仪器，在未熟悉其性能之前，不可轻易调试。实验室内保持安静、整洁。用药后须用原瓶塞塞好，公用药品和器材不可随意挪动。【实验后】将实验用器材清洗擦干，清点整理后放到指定位置。如有损坏、缺少，应及时报告老师。将存活和死亡动物分别送至指定处所。认真整理实验记录，经过分析思考，撰写实验报告，按时交给指导老师。做好实验室的清洁卫生工作。药理学实验设计的基本原则在进行药理学实验时，为保证实验结果的客观性和可信性必须遵循以下基本原则：一．对照原则：进行实验时必须设对照组。设置对照组是为了使观察指标通过对比而发现其在处理因素（如药物等）的作用下而表现出的某种特异性变化，消除各种无关因素的影响。这就要求在比较的各组实验对象之间除了处理因素不同外，所有非处理因素应尽量保持相同，从而根据处理与不处理之间的差异，了解处理因素带来的特殊效应。对照有多种形式，如空白对照(又称正常对照)，即对照组不施加处理因素，但给予同容积的溶剂；模型对照，即造成疾病模型，但不给予药物处理，给予同容积的溶剂；阳性对照，即给予相同适应症的市售药物，以监控实验条件；假手术对照，即除造成某种疾病模型的关键步骤外，所有手术操作均同模型对照组。自身对照，对照与实验均在同一实验对象进行，即同一个体处理前后的对照，如给药前后的对比等。若观察给药前后的指标变化，此种对照必须以指标本身对时间变化相对稳定为首要前提。二．随机原则：随机是指对实验对象的实验顺序和分组进行随机处理。在分组时，对实验对象进行随机抽取可保证被研究的样本能代表总体，从而减少抽样误差；在施加多个处理因素时采用随机原则，可保证各组样本的条件基本一致，可减少组间人为的误差。三．重复原则：“重复”在这里有两方面的含义，一是指实验结果的可再现性，一是指实验结果应该来自足够大的样本。样本越大，重复的次数越多，实验结果的误差越小，可信度越高。药理学实验一般应当设有正常对照组、模型对照组、阳性药对照组及受试药2个以上剂量组（新药研发时要求至少设立三个给药剂量组，以考察量效关系）等，如需手术造成疾病模型，还应设假手术对照组。而学生药理学实验课时，由于时间等条件的限制，可酌情减少实验分组，只设空白对照组或模型对照组及受试药一个剂量组。一．动物分组的一般原则实验时，要遵循受试药组与对照组一致性原则，即两组只允许在被实验因素方面有所不同，在其他方面(包括实验对象、实验者、实验条件、环境、时间以及仪器等)应力求一致。除了被实验因素外，如果两组还有不一致的地方，则对照组的存在失去其应有意义。两组之例数应相等或相近似，认为对照组只有少数几例即可，是不正确的。分组时，为了满足以上要求，避免主观因素需要采取随机抽样的方法。所谓随机抽样就是指按着机会的安排来抽取样本，换言之，不论任何被实验的对象都有相等的机会被抽出。随机抽样的方法很多，如应用骰子法、单双号法、卡片法以及随机数表等。必须指出，随机抽样比较适宜大样本时的分组，而小样本时随机抽样不能保证各组的一致性，故小样本时必须用人为的方法来保证各组的一致性，其目的是更好地贯彻随机抽样原则，与主观选择有本质上的区别。二．小样本的分组法主要有分群法(Stratify)和配对(群)法。分群法是按某几个因素将对象先分为数群，而后再按随机抽样法将每群中的对象分到各组中去。有时先分为几个大群，而后每大群再分为数小群，最后将每小群中的对象再随机抽样地分到各组中去。分群可按性别、体重或血压等生理或病理因素进行，一般应以观测指标或对观测指标有主要影响的因素为准来分群，如降压实验，应以血压为准来分群；豚鼠的平喘实验，须对豚鼠进行初筛，分组时，应以哮喘潜伏期来分群；降血脂实验，应以血脂水平为准来分群。而多数是按性别、体重分群。配对(群)法，是把各方面相近似的对象配成多数的对或群(二组则二个一对，三组则三个一群)，然后每对(群)中的对象按随机抽样原则分到各组中去。以最常用的分群法为例，说明如下：【举例】由实验动物中心取来同种属并且出生日期相近似的小白鼠36只，欲就性别及体重将其分为实验及对照两组，可进行如下分组：先就性别将动物分为雌雄两大群，每群再按体重分为数小群(以1g为组距)，假定其性别及体重分布情况如表1-1之左侧所表示，则可按随机抽样原则将各小群的动物分到两组中去。如果有的小群动物数是奇数时，则应尽力照顾到两组的均衡来分配之，最终的分组情况正如表1-1之右侧所表示。表1-1分组法分布情况分组情况性别体重（g）动物数(只)实验组对照组雌18-19619-20620-21321-22333332112Σ1899雄18-19519-20320-21621-22432123322Σ1899一、实验结果的记录及表示方法实验过程中，要对实验数据进行及时、客观的记录。凡是属于量反应资料（又称计量资料，即药物作用可以用数值的变化来表示，如血压的高低、时间的长短、心率的快慢、肿瘤轻重、心输出量的多少等）均应以正确的单位和数值标定。凡是由曲线记录测量指标的实验，应尽量用曲线记录实验结果，在所记录的曲线中应标注有给药或刺激记号、时间记号等。为便于对实验结果进行分析、比较，多以各组数据的均值加减标准差来制表或绘图来表示实验结果，表格要有表题，图要有图题。制作表格及作图时，应注意以下几点：1.表格应制三线表，表格中不用纵向线。一般按照组别、剂量、动物数、观测指标的顺序在表内由左至右填写。2.作图时，通常是以实验观察指标的变化为纵坐标，以时间或给药剂量为横坐标而作图，例如呼吸曲线、肌肉收缩曲线等；横、纵坐标轴均应加以标注，如药物剂量、时间单位、测量指标及单位等。3.实验数据若呈连续性变化，则以曲线形式体现实验结果，绘制经过各点的曲线或折线应光滑；实验数据若不呈连续性变化，则不宜用曲线表示，可采用直方图的形式表示。4．表及图下面应有必要的说明，如统计学显著性的表示等。二、差值的显著性测验实验结束后，实验者必须对所获得的实验结果进行统计学分析处理，才能发现问题，得出结论。药理学实验往往要在两组或两组以上实验对象上进行，如一组为实验组，一组为对照组，然后就两组所获得的实验数据进行比较，判断两者有无差异，从而确定被实验因素是否对实验对象确实具有某种影响，例如药物疗效之观察等。但药理学研究的实验对象大都是各种动物（临床药理学研究的对象是人），所以实验中生物个体差异所造成的误差是不可避免的，此外也还有一些其他性质的误差，可统称之为实验误差。从而两组实验获得数据的差异就有可能是实验误差所造成，而在被实验对象的数目很少时(小样本)，此种可能性更大。两组数据的差值究竟是被实验因素所致，还是实验误差影响所致，这不能主观决定，而一定要通过生物统计学的客观方法来判断，以确定此差值是否有意义。此种方法就称为差值的显著性测验。如果测验的结果是两组之间差异“显著”，则提示两组之间的差异可能是因处理因素（如药物）造成的；若“不显著”，就说明此差值很可能是实验误差所造成的，没有实际意义。但不应只根据一次的结果而轻率地下结论，在动物数少时尤其如此。应视具体情况，进行重复实验。需要指出的是，统计学方法之运用需建立在对实验对象客观的、科学的分组和正确的实验资料的基础之上。不当的实验设计与错误的实验资料，即使经过统计处理，其结论仍然是不可靠的。因实验指标有量反应指标和质反应指标的不同，其统计处理方法也不同。分述如下：1．量反应指标的差值显著性测验法差值显著性测验最常应用的方法为“t检验法”。t值即差值的绝对值与差值标准误之比。亦即用误差单位来衡量差值的大小，视其有无意义。根据实验数据计算出者称实验t值，t0为由t值表查出者，称标准t值。基本公式：……X……被实验个体实验观察指标量的大小。N……该组被实验的对象数。……该组X的均值，为测量指标最常应用的综合指标。S……标准差，是用以估计原始数据(X)的分散程度或原始数据的实验误差程度的人为单位。……标准误，用以估计均值(X)的可靠程度或均值的实验误差程度的人为单位。……两组均值数据差(差值)的绝对值。自由度……统计学一专门术语。只关系到一组时为例数减一(n—1)，如关系到两组时则为总例数减二(n1+n2-2)。∑……总和。首先假设两组的差异是由实验误差所致，处理因素对实验结果没有影响。然后将实验数据带入公式计算t值。将实验t值(ts)与标准t值(t0)相比较，判定标准如下：t0(1％)＞ts＞t0(5％)，则0.01＜P值<O.05，即无效假设成立的可能性小于5%，换言之，组间差异是因处理因素（如药物）所致的可能性大于95%，组间差异有显著意义。ts＞t0(1％)，则P值＜O．01，即无效假设成立的可能性小于1%，换言之，组间差异是因处理因素（如药物）所致的可能性大于99%，差异非常显著。ts＞t0(5％)，则P＞0．05，即无效假设成立的可能性大于5%，差异不显著。P值为机率或危险率。标准t值可根据t值表查出，由该表有关自由度及特点危险率(5％或1％)而找出该标准t值。标准t值表自由度机率自由度机率5％1％5％1％12345678910111212.7064．3033．1822．7762．5712．4472．3652．3062．2622．2282．2012．17963．6579．9255．8414．6044．0323．7073．4993．3553．2503．1963．1063．0551314151617181920301001000X2．1602．1452．1312．1202；1102．1012．0932．0832．0421．9841．9621．9603．0122．9772．9472．92l2．8982．8782．8612．8452．7502．6262．5812．5762．质反应指标的显著性测验法计数资料显著性测验最常用的是X2(卡方)检验法，它可以用来检验两个或多个百分比(率)之间的差异。计算方法和步骤如下：首先假设两组的差异是由机会所致，即两组的阳性是相同的。将数据带入四格表，并根据X2计算公式算出X2值。判断无效假设是否成立。四格表组别阳性阴性合计用药组aba+b对照组cdc+d合计a+cb+da+b+c+d=nx2检验的公式如下：根据自由度查x2值表，自由度的计算公式为：n（自由度）=（行-1）（列-1），故四格表法的自由度为1。查x2值表可知，求得的x2值若大于3.84，则P值小于0.05，有显著差异；若求得的x2值大于6.63，则P值小于0.01，有非常显著差异。即求得的x2值越大，否定假设情况的可能性就越大，差值是由处理因素所致的可能性越大；反之，x2值越小，否定假设情况的可能性越小，即差值是由实验误差所致的可能性越大。注意：数据中无0或1时才可以用上述公式计算x2值。如果数据中出现了0或1，则要用简化值直接概率法计算。实验动物数必须大于40。x2值表自由度大于此值之机率P0.9000.7500.5000.2500.1000.0500.0250.0100.00510.020.010.451.322.713.845.026.637.88第五节实验报告的书写要求实验报告是实验者对其完成的实验工作进行的扼要的文字总结，是综合评定实验课成绩的重要依据之一。学生每完成一次实验都应提交相应的实验报告。实验报告通常的格式如下：姓名专业班级组别日期1．实验题目：2．实验目的及原理：3．实验材料：包括实验器材、实验动物及药品试剂。实验动物要写明其种类、性别、体重。如果所使用的仪器和方法与实验教材规定的有所不同时，可作简要说明。4．实验方法：实验步骤可作简要描述。5．实验结果:应详细记录原始数据，对较长的曲线记录，可选取一段有变化的曲线，剪下后贴在实验报告中，并根据原始资料，真实、准确记述所观察到的实验现象。将原始数据进行统计学处理，最后用图或表来表示。绘图时，应在横轴和纵轴上画出刻度，标明数值单位。一般以纵轴表示反应强度，横轴表示时间或药物剂量。绘制表格时，应制三线表，表内布局要合理，标题在表的上方。6．讨论：实验结果的讨论是根据已知的理论知识和已有的文献资料对实验结果的解释和分析，判断所得到的结果是否为预期的结果；对于非预期结果要分析可能的原因。还应在讨论中指出实验结果的生物学意义。7．结论：是对该实验所能证明的作用或作用机制的简明总结。不要简单地罗列具体的结果，而应在讨论的基础上归纳出概括性的判断。结论应言之有据，不能充分证明的理论分析不应写入结论中。第六节实验室守则1.遵守学习纪律，准时到达实验室。在做实验时因故外出或早退应向指导老师请假，经同意后方能离开实验室。2.实验时应严肃认真，不得高声谈笑及进行任何与实验无关的活动，应保持实验环境的宁静。参加实验时应穿着实验工作服。3.参加实验者应先熟悉实验仪器和设备的性能及使用要点，而后使用。一旦发现仪器和设备故障或损坏，应立即向指导教师报告，以便能及时维修或更换，不可擅自拆修或调换。仪器和设备不慎损坏时，应及时向指导教师汇报情况，按章赔偿。4.各实验小组的实验仪器和器材各自保管使用，不得随意与他组调换挪用。如需补发增添时，应向指导教师申报理由，经同意后方能补领。每次实验后应清点实验器材，用品。5.爱惜公共财物，注意节约器材，爱护实验动物，实验室内物品不得擅自带走。6.保持实验室的整洁卫生，不必要的物品不要带进实验室内。实验完毕后，应将实验器材，用品及实验桌凳收拾干净；实验动物尸体和废物应放到指定的地点，不得随地乱丢。实验室的清洁卫生工作应由各实验小组轮流负责打扫，以保证实验室环境整洁卫生。(邹莉波)动物实验的基本操作技术第一节药理学实验常用动物的种类及特点一．小白鼠(mouse)小白鼠属哺乳纲，啮齿目，鼠科。其温顺易捉，繁殖力强，价格低廉，对实验动物同种、纯种、性别和年龄的要求比较容易满足，生活条件也容易控制，因此是药理学实验最常用的动物，特别适用于需要大样本的实验，如药物筛选、药物半数致死量的测定等。小白鼠对多种疾病有易感性，可以复制多种疾病模型，如癌症、肉瘤、白血病、血吸虫病、败血症、癫痫、药物依赖性、痴呆症等。二．大白鼠(rat)大白鼠亦属哺乳纲，啮齿目，鼠科，受惊时有攻击性，易对实验者造成伤害，应注意防护。大白鼠也可用于多用实验和复制多种动物模型，如复制水肿、炎症、缺氧、休克、发热、胃溃疡、高血压以及肾衰等动物模型；大白鼠的垂体-肾上腺功能很发达，常用来作应激反应、肾上腺及垂体等内分泌功能实验。大白鼠的高级神经活动发达，因此，也广泛用于脑功能定位、神经元细胞外记录等实验中。三．家兔(rabbit)家兔属哺乳纲，啮齿目，兔科。其特点是性情温顺，易于饲养。常用于与呼吸功能、泌尿功能、心血管功能有关的实验中，如呼吸运动的调节及呼吸衰竭的处理、血压的调节和心衰的处理等。因家兔对致热源敏感，故常用于研究解热药和检查热源。此外，因家兔耳长大，血管清晰，便于静脉注射和采血，故也广泛用于药物的血管刺激性及溶血性的研究。四．豚鼠(guinea-pig)豚鼠又称天竺鼠，荷兰猪。属哺乳纲，啮齿目，豚鼠科。其特点是性情温顺，对组胺和结核菌敏感。常用于复制哮喘、组胺过敏、结核病模型，以研究平喘药、抗组胺药以及抗结核药的作用。也用于药物安全性试验中的全身主动过敏性试验。五．猫(cat)猫属哺乳纲，食肉目，猫科。与兔相比，猫对外科手术的耐受性强，血压相对稳定，但极具攻击性。常用于去大脑僵直、下丘脑功能以及血压方面的实验。犬犬常用于观察动物对冠状动脉血流量的影响、心肌细胞电生理研究、降压药及抗休克药的研究等；经过训练，可与人合作，很适用于慢性实验，如条件反射试验。犬的体形大，对手术的耐受性较强，常用于其他小动物不易进行的手术中，如胃瘘、肠瘘、膀胱瘘、胆囊瘘以及冠状动脉结扎等。在进行临床前长期毒性试验中，犬是常用动物。七．蟾蜍(toad)蟾蜍属于两栖纲，无尾目。由于进化较低，其离体标本(如心脏、腓肠肌等)能在较长时间内保持着自律性和兴奋性，而且蟾蜍容易获得并价格便宜，故经常被用于研究药物对心脏的影响、反射弧分析以及肌肉收缩等实验中。第二节实验动物的选择为了获得理想的实验结果，必须根据实验目的选择适宜的观察对象，在选择动物时，需考虑如下因素：一．种属的选择不同种属的动物对同一疾病病因刺激的反应程度会有很大的差异。在选择实验动物时，尽可能选择对刺激因素较为敏感且与人类接近的种属。例如在进行发热实验时，宜首选家兔：在进行过敏反应和变态反应实验时，宜首选豚鼠；小鼠则宜用于半数致死量等方面的观察。二．性别的选择由于成年雌性动物的代谢存在着明显的性周期的变化，这些变化会影响受试动物对某些实验因素的反应状态。因而在选择实验动物时，一般多用雄性动物，但热板法镇痛实验不宜选用雄性小鼠或大鼠，半数致死量的测定应雌雄各半。三．周龄或体重的选择一般选择成年动物，小鼠体重18-22g，大鼠体重200-250g，豚鼠体重350-450g，家兔体重2.5-3.5kg，beagle犬体重8-20kg。但有些实验对动物体重或周龄有特殊要求，如大鼠足肿胀法的抗炎实验，宜选用120-150kg的大鼠，对致炎剂敏感。制作大鼠脑永久性低灌注模型时，宜选用13周龄以上的大鼠，可大大降低死亡率。四．状态的选择实验动物对人类疾病的表达程度及对施加因素的反应情况，除了与动物自身的生理特征有关外，还受动物的状态，如是否饥饿、睡眠是否足够、是否患有其他疾病等的影响。因此，应选择健康、反应机敏以及其它各个方面条件尽量一致的动物作为观察对象。五．实验条件的选择由于环境因素对实验结果有着很强的干扰作用，如明、暗(即光照周期)对体内代谢就有着重要的影响。在实验时应选择与受试动物自然生活尽量一致的实验环境或人为地将实验环境控制到符合条件的程度。实验动物的编号在药理学实验中为了观察并记录每只动物、各组动物的变化情况，必须在实验前预先对动物进行随机分组和编号标记。对于比较大的动物如狗，兔等，可将号码烙在金属牌上，实验时将其固定于狗链条或兔耳上。对于家兔还可采用化学药品涂染背毛或采用兔耳打孔法。下面以药理学实验最常用动物为例，介绍大鼠和小鼠的编号标记方法。大鼠和小鼠的编号一般都采用各种不同颜料涂擦被毛的方法来标记，也可用不同颜色的油性记号笔在尾部标记。常用的涂染化学品如下：涂染黄色，用3%～5%苦味酸溶液。涂染红色，用0.5%中性红或品红溶液。涂染咖啡色，用2%硝酸银溶液。涂染黑色，用煤焦油的酒精溶液。最常用的是3%～5%苦味酸溶液。用毛笔或棉棒蘸取此溶液，在动物的不同部位涂上苦味酸溶液表示不同号码。一般习惯涂染在左前腿上为1，左侧腰部为2，左后腿上为3，头部为4，背部正中为5，尾基部为6，右前腿为7，右侧腰部为8，右侧后腿上为9，不涂染鼠为10（如图2-1A、B）。如果实验时动物的编号超过10，且在20～99之内，可采用在上述动物同一部位上，再涂染另一种涂染剂（如0.5%中性红或品红溶液）斑点，表示相应的十位数。例如，在左前腿标记红色和黄色斑点，这就表示为11；如果红色标记在左前腿上，而黄色标记在左腰部，这就是12，以此类推（如图2-1C、D）。也可以用同一种颜色涂在两个部位来标记10以上的记号。如左前腿和左后腿都标记苦味酸溶液，表示13号，以此类推。图2-1A图2-1B图2-1C图2-1D上述苦味酸溶液等颜料标记的优点是持续时间比较长，一个月左右也不会退色，对于慢性实验尤其适合。如果是急性实验，或饲养小鼠时间在一周之内，可用不同颜色的油性记号笔在尾部标记，如图2-2所示。图2-2标记要有记录，做到实验者心中有数，以免时间长忘记。实验动物的捉持和给药方法正确地捉拿与固定动物是药理学实验的基本操作之一，也是实验顺利进行的保证。掌握正确的动物捉拿与固定方法，不仅可有效防止实验者被动物咬、抓伤，也可确保动物不被过分激惹，以保证其正常的生理活动不受明显干扰，从而不致明显地影响实验结果。一．小鼠的捉持和给药方法捉拿小鼠时，先用右手将鼠尾抓住并提起，将小鼠放在鼠笼上或较为粗糙的台面上，在其向前爬行时，用右手向后拉尾，用左手的拇指和食指抓住小鼠的两耳及头颈部皮肤，将其置于手心中，拉直四肢并用左手的无名指压紧尾部，右手即可作注射和进行其它操作(如图2-4-1)。也可只用左手捉拿小鼠，方法是先用左手的拇指和食指抓住小鼠的尾部中段，然后用左手的无名指和小指夹住尾的根部，并轻压向背部，用左手的拇指和食指抓住小鼠的两耳及头颈部皮肤，将其置于手心中。此种方法熟练后，比两手捉拿小鼠方便快捷，也便于右手的操作。取尾血或进行尾静脉注射时，可将小鼠固定在金属、玻璃、塑料或木制的固定器上。图图2-4-1给药方法：1．灌胃法左手捉拿小鼠，右手持灌胃管(1～2ml注射器上连接玻璃或金属制的灌胃管)，灌胃管长4～5cm，直径约lmm。操作时将灌胃管插入口腔，沿上腭壁轻轻插进食管，当插进2～3cm时，灌胃管的前端到达膈肌水平，此时可稍感有抵抗（图2-4-2）。一般在此位置推注药液即可。如此时动物呼吸无异常，可将药液注入；如遇阻力应抽出灌胃管重新插入；若误插入气管注药可引起动物立即死亡。推注药液后轻轻拉出灌胃管。一次灌注量为0.1～0.32．皮下注射法注射部位可选颈背部皮下。操作时轻轻拉起背部皮肤，将注射针注入皮下,稍稍摆动针头，若容易摆动则表明针尖的位置确在皮下,此时注入药液。拔针时，轻捏针刺部位片刻，以防药液逸出。3．肌肉注射法小鼠固定如上述。将注射器的针头刺入小鼠臀部外侧肌肉，注入药液。注射量一般为每次每鼠0.2ml。4．腹腔注射法左手固定动物，使小鼠腹部朝上。右手持注射器，使针头与皮肤呈45度角方向在左或右侧下腹部刺入腹腔（图2-4-3）。针尖刺入腹腔时可有抵抗消失感，此时可轻轻推注药液。一次注射量为0.05～0.1ml/10g体重。图图2-4-3图2-4-25．尾静脉注射法将小鼠装入固定筒内或玻璃钟罩内，使其尾部外露。尾部用75％酒精棉球擦拭,使其血管充血和表皮角质软化。以拇指和食指捏住尾根部的两侧，阻断其静脉回流，使其尾静脉充盈明显。以无名指和小指夹住尾尖，用中指托起尾巴，使之固定。用4号针头选其一侧尾静脉穿刺。如针头确在血管内，则推注药液无阻力，否则皮肤隆起发白，阻力增大，此时可退回针头重新穿刺。注射完毕后，按压片刻止血。需反复静脉注射时，宜从尾端开始，逐渐向尾根部移动。一次注射量为0.05～0.1ml/10g体重。大鼠的捉持和给药方法捉拿大鼠时，实验者应注意防护，如戴帆布手套进行操作。捉拿时先用右手将鼠尾抓住并提起，放在较为粗糙的台面或鼠笼上，然后将鼠尾向后轻拉，用左手的拇指和食指抓紧两耳和头颈部皮肤，其余三指紧捏背部的皮肤，将整个动物固定于左手中（如图2-4-4A、B）。也可用左手的拇指和中指分别放到大鼠的腋下，食指放于颈部，使大鼠伸开两前肢，握住动物，用右手进行操作。图图2-4-4A图2-4-4B给药方法：1．灌胃法大鼠的灌胃法与小鼠相似。采用灌胃管(安装在5ml注射器上的金属灌胃管)长6～8cm，直径1.2mm,尖端呈球状。一次给药量为1～2ml／lOOg2．腹腔注射法同小鼠。3．皮下注射法注射部位为背部或大腿外侧皮下。操作时，轻轻拉起注射部位皮肤，将注射针刺人注射部位皮下。每次注射量为lml／100g体重。4．静脉注射法麻醉大鼠可从舌下静脉给药。清醒大鼠可从尾静脉给药。将大鼠置于大鼠固定器内，而将鼠尾留在固定器外，以供实验操作。尾静脉注射时，用75％酒精棉球擦拭或用40～50℃温水浸泡尾部，使尾静脉扩张充盈，易于穿刺。每次注射量为0.3-0.5ml／100g兔的捉持和给药方法用右手抓家兔颈部的被毛与皮肤，用左手托住其臀部和腹部使其体重大部分集中在左手上，然后按实验要求固定(如图2-4-5)。家兔的固定方式有腹卧式和仰卧式两种：作各种手术时，一般对麻醉后的动物进行仰卧式固定，即将动物的四肢用粗的棉线固定，头部则用兔头固定夹固定;作耳血管注射或取血时，可行腹卧式固定，即将家兔安放到特制的固定装置内。图图2-4-5给药方法：1.灌胃法可两人合作进行。一人坐好，将兔的躯体夹于两腿之间，左手抓住双耳，固定其头部，右手握住其两前肢。术者将开口器横放于兔口中，将兔舌压在开口器下面。此时助手用双手固定开口器。术者将导尿管经开口器中央小孔慢慢沿上腭壁插入食管15～18cm(如图2-4-6)。为避免误入气管，将导尿管的外口放入一杯水中，确认无气泡或管中液面不随呼吸而上下波动，则可用注射器将药液灌入，并以少量清水冲洗灌胃管。若动物挣扎剧烈，应拔出重新插入。灌胃完毕后，先拔出导尿管，再拿出开口器。如用兔固定箱，可一人操作，2.腹腔注射法参照小鼠腹腔注射法。3.静脉注射法静脉注射一般采用耳缘静脉（兔耳外缘的血管为静脉，中央血管为动脉）。将家兔放入固定盒内，拔去耳外缘部位的兔毛，用酒精棉球涂擦静脉部位皮肤，使静脉充盈。以左手拇指和中指捏住兔耳尖，食指放在注射部位下将兔耳垫起，右手持注射器，尽量从血管远端刺入血管（不一定有回血）。注射时针头先刺入皮下，沿皮下向前推进少许，然后刺入血管（如图2-4-7）。针头刺入血管后再稍向前推进，轻轻推动针栓，若无阻力和局部皮肤发白隆起现象，即可注药；若推药有阻力或发现皮肤发白隆起，表示针头在血管外，这时应将针头稍退回，再重新穿刺血管，注射完毕后，用棉球压住针眼，拔去针头。图图2-4-7图2-4-6豚鼠的捉持和给药方法先用左手掌迅速扣住其背部，抓住其肩胛上方，将手张开，用手指握住颈部或握住身体的四周，再拿起来。怀孕或体重较大的豚鼠，应以另一只手托住其臀部。豚鼠的固定方法基本同大白鼠。给药方法：1.灌胃法可参照小鼠和大鼠灌胃法进行。2.皮下注射法注射可选用大腿内侧，背部，肩部等皮下脂肪少的部位。通常在大腿内侧注射。操作时，助手把豚鼠固定在台上，术者将注射侧的后肢握住，将注射器针头与皮肤呈45度角方向刺入皮下。确定针头在皮下后，注入药液。注射完毕后以指压刺入部位片刻，以防药液漏出。3.腹腔注射法同小鼠。4.静脉注射法注射部位可选用前肢皮下头静脉，后肢小隐静脉，耳壳静脉。一般前肢皮下头静脉较易穿刺成功；后肢小隐静脉上部明显可见，故也较容易穿刺成功；也可在颈前部将皮肤切一小口，暴露颈前静脉，然后直接穿刺血管。注射量小于等于2ml.猫的捉持和给药方法捉猫时应戴手套，以防止被其抓伤。先将猫关入特制玻璃容器中，投入乙醚棉团快速麻醉，取出后趁其未醒立即固定。给药方法：1.灌胃法猫轻度麻醉，把导尿管从鼻腔或口腔插入食管内给药。2.皮下注射法猫注射于臀部皮下，注射针刺入皮肤与肌肉之间给药。3.腹腔注射法参照小鼠腹腔注射法。但注意在腹白线两侧注射，离腹白线1cm处进针。4.静脉注射法猫装于固定带或笼内，取出前肢，紧握肘关节上部，用乳胶管扎紧，使皮下头静脉充血，局部去毛消毒，右手持注射器从肢体末端朝向心端穿刺，证实针头在静脉内之后放松肘关节或松开乳胶管，可缓慢注射药液。犬的捉持和给药方法犬的性格凶猛，会咬人。捆绑固定至少由2～3人进行。实验者先抚摩，逐步接近，勿使其惊恐或将其激怒。用粗棉绳兜住狗的下颌，并在上颌打结（勿太紧）。操作时，注意犬的动向，以防被犬咬伤，最后在犬耳根后颈项上打一个活结。如犬不合作，则先用一根特制长柄狗头夹，从后面夹住犬颈，限制犬头部活动，再按上述方法捆住犬嘴。然后将犬侧卧，一人固定其肢体，由另一人注射麻醉药。给药方法：1.灌胃法将木质开口器横放于犬上下门齿间固定，经开口器之小孔插入导尿管向前推入食管。将导尿管外端置于水中，如无气泡逸出即可将药液注入,再注入少量清水冲洗残留药液。也可将药物装入胶囊，直接放入犬口中，并给少量清水，使其自然吞咽。2.静脉注射法对未经麻醉的犬，可选用前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉注射(如图2-4-8A对已麻醉的犬，可剖开腹股沟部，从股静脉直接插管给药。图图2-4-8A图2-4-8B注意事项1．捉拿动物时既要大胆果断，也要小心谨慎，动作应尽量轻柔，切忌粗暴。2．捉拿大鼠，尤其是已经受到激惹的大鼠时，一定要注意防护，以免被其咬伤。若不慎被动物咬伤或抓伤应对伤口进行妥善处理。3．捉拿动物时一定要按规范进行，否则容易对动物造成损伤。例如，对于家兔采用抓双耳或抓取腹部的方法是错误的。4．不可玩耍动物或使动物逃跑。实验动物给药剂量的确定与计算给药剂量的确定药物的药理作用都是在一定剂量范围内产生的，如果剂量设计不当，有可能得出药物无效的结论，而实际上，药物可能有效，只是没有找到合适的剂量范围。进行实验设计时，经常会遇到如何确定药物剂量的问题。药物对于某种动物的适当剂量不能凭空推算。首先应该查阅该药的有关文献，了解前人的经验。如能查到用于同一目的的实验，且给相同种类动物用药的剂量，那就可以直接应用；有时查不到用于同一目的实验的剂量，但能查到给相同种类动物相同给药途径的不同用药目的的剂量，也可以按照此文献剂量进行预实验；如在文献中查不到治疗剂量，但若知道LD50，也可先用1/10～1/3LD50来进行试验，最终找出有效剂量范围。如果查不到待试动物的剂量，但知道其他动物或人用剂量，可通过换算得到所需动物的等效剂量。不同种类动物间用药剂量的换算，一般按单位体重所占体表面积的比值进行，如表所示。表2-1人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表小鼠(20g)大鼠(200g)豚鼠(400g)家兔(1.5kg)猫(2.0kg)猴(4.0kg)狗(12kg)人(70kg)小鼠(20g)大鼠(200g)豚鼠(400g)兔(1.5kg)猫(2.0kg)猴(4.0kg)狗(12kg)人(70kg)1.00.140.080.040.030.0160.0080.00267.01.00.570.250.230.110.060.01812.251.741.000.440.410.190.100.03127.83.92.251.00.920.420.220.072.974.22.41.081.00.450.230.07864.19.25.22.42.21.00.520.16124.217.84.24.54.11.91.00.32367.956.031.514.213.06.15.11.0例某一降压药，大白鼠灌胃给药时的剂量为200mg/kg。请粗略估计狗灌胃给药时的剂量。如按表2-1进行计算，12kg狗的体表面积为200g大白鼠的17.8倍。200g大白鼠需给200×0.2=40mg，于是狗的等效剂量应是mg/kg。上述不同种类动物间剂量的换算法只能提供一个粗略的参考值。究竟是否有效，只有通过预试验才能了解。二、药物浓度的计算一定容积的溶液中所含溶质的量称为溶液浓度。常用的浓度表示方法有如下几种。（一）百分比浓度：包括质量百分比浓度、质量-体积百分比浓度及体积-体积百分比浓度。所谓质量百分比浓度是指溶液的浓度用溶质的质量占全部溶液质量的百分比来表示。例如，5%的葡萄糖溶液就是表示100g的溶液里，含有5g的葡萄糖和95g的水。计算公式为：质量百分比浓度=质量-体积百分比浓度是指每100ml溶液中所含溶质的克数，用“%”表示。例如，20%戊巴比妥钠溶液，即指100ml溶液中有戊巴比妥钠20g。计算公式为：质量-体积百分比浓度（%）=体积-体积百分比浓度，是指100ml溶液中所含溶质的毫升数。如消毒用酒精的浓度为75%，这表示在100ml溶液中含有纯酒精75ml。计算公式为：体积-体积百分比浓度（%）=（二）比例浓度：药典中常见的比例浓度符号为1：X，即指1g固体或1ml液体溶质加溶剂配成Xml的溶液，叫做比例浓度。如不特别指定溶剂种类时，都是以蒸馏水为溶剂。例如，重碳酸钠20g配成400ml溶液的比例浓度如下：比例浓度=1：=1:20摩尔浓度以1L溶液中所含溶质的摩尔数来表示溶液的浓度叫做摩尔浓度，用符号mol/L表示。第六节实验动物的麻醉方法一．麻醉药的选择原则在对动物进行手术之前，需将动物麻醉。由于不同种属动物对同一种麻醉药物的敏感性不同，而且各种麻药对动物的生理功能的影响和麻醉的时间也存在着差异，因此，根据实验的要求与动物种类的不同，选择适当的麻醉药对于保证实验的顺利进行和获得正确的实验结果，是十分重要的。理想的麻醉药应具备以下三个条件：第一，麻醉效果好，使动物无痛，麻醉时间能满足实验要求：第二，对动物的副作用和对于所要观察的指标影响最小；第三，使用方便。二．几种常用的麻醉药及其使用方法在药理学教学实验中，常用的麻醉药物有氨基甲酸乙酯、氯醛糖、巴比妥类等。1．氨基甲酸乙酯：也称乌拉坦（Urethane）。多数动物实验都可使用，但常用于小动物的麻醉。猫和家兔可采用静脉注射、腹腔注射或直肠灌注等多种途径给药。优点是价格低廉，使用简便，易溶于水，且麻醉过程较平稳，动物无明显挣扎现象。缺点是苏醒慢，麻醉深度较难掌握。使用时可配制成10％～～表2-2不同动物的表2-3不同动物的动物狗猫兔每公斤体重用量16-25mg16-25mg7-10mg～mg／kg，以对抗乙醚刺激呼吸道分泌粘液的作用。三．使用麻醉药的注意事项1．不同动物个体对麻醉药的耐受性是不同的。因此，在麻醉过程中，除参照上述的一般用量标准外，必须密切注意观察动物的状态，以决定麻醉药的用量。静脉麻醉时，注射速度应当缓慢。动物达到最佳麻醉效果的表现是：皮肤夹捏反射消失，肢体肌肉松弛，呼吸节律变得深慢而平稳，角膜反射迟钝，肢体呈自然倒下。2．麻醉过量时，应根据动物的表现而采取不同的处理办法：若动物呼吸极慢且不规则，但血压或脉搏仍属正常时，可行人工呼吸和注射苏醒剂；若动物呼吸停止，血压下降，舌头开始由红变紫，但仍有心跳时，可进行人工呼吸，同时静脉注射适量温热的50％葡萄糖，l：10，000的肾上腺素以及苏醒剂。常用的苏醒剂有咖啡因(1mg／kg)、可拉明(2～5mg／kg)和山梗菜硷(0.3～lmg／kg)等，使用时可通过肌肉注射或静脉给药。3．如动物麻醉过浅，可临时补充麻醉药，但一次补药剂量不宜超过总量的1／5。第七节实验动物被毛的去除方法动物的被毛有时能影响实验操作和观察结果，因此常需去除或剪短动物的被毛。除毛的方法有剪毛、拔毛和脱毛三种。剪毛一些对无菌条件要求不十分严格的手术前以及给犬等大动物静脉注射之前等许多情况，都需要用弯剪刀剪去切口部位的被毛。剪毛时要把剪刀贴近皮肤，不能用手提起被毛，以免剪破皮肤。拔毛给兔耳缘静脉注射或取血时，应将局部被毛拔除，以便于操作。另外，拔除被毛时会刺激耳缘静脉而使其更加充盈。脱毛脱毛系指用化学品脱去动物的被毛，适用于无菌手术野的准备、观察动物局部皮肤血液循环和病理变化以及贴剂等皮肤给药。常用的脱毛剂有以下三种：硫化钠3g,肥皂粉1g,淀粉7g,加水适量调成糊状；淀粉7g,糖4g,甘油5g,硼砂1g,加水75ml；硫化钠8g,溶于100ml水中。以上脱毛剂配方可用于家兔、大白鼠和小白鼠等小动物。(邹莉波)

附录资料：不需要的可以自行删除职业健康安全与环境保护施工管理**储物流有限公司技改项目（一期）工程开工前将建立以项目经理为领导的工程项目职业健康安全、环境管理体系，制定职业健康安全、环境保护责任制，树立“管生产必须管职业健康安全、环境保护”，“谁施工谁负责”，把生产与职业健康安全、环境保护统一起来，认真贯彻执行国家的职业健康安全、环境保护相关的方针、政策、法令、法规和标准，用以指导施工。10.1职业健康及环境目标10.1.1职业健康安全目标(1)工程安全文明施工合格率100%；(2)创市级安全文明施工工地；(3)杜绝重大伤亡和机械设备事故；(4)重伤率不超过0.4‰，轻伤率不超过6‰；(5)计量器具有效率100%，设备完好率90%。(6)保持职业健康安全管理体系有效运行并持续改进。10.1.2环境目标和指标(1)工程文明施工合格率100%；争创市级文明工地；(2)杜绝重大环境事故和投诉事件；(3)资源、能源有效利用最大化，节能5%；(4)杜绝职业病和火灾的发生。(5)杜绝重大环境事故和投诉事件；(6)污水达标排放；(7)噪声排放达标；(8)固体废物排放达标；(9)保持环境管理体系有效运行并持续改进。10.2.安全、环保施工保证体系成立以项目经理为首的安全与文明生产领导小组，根据该工程的特点设专职安全员、环保员，各施工班组设兼职安全员、环保员，建立一套完整有效的安全、环保管理体系，见下图“安全、环保施工保证体系框图”。项目经理质安部安全负责人项目总工项目副经理质安部安全负责人项目总工项目副经理工程测量组工程测量组钢筋砼工程作业队建筑装饰工程作业队砌筑作业队给排水安装作业队建筑电气安装作业队钢筋砼工程作业队建筑装饰工程作业队砌筑作业队给排水安装作业队建筑电气安装作业队图10.2－1安全、环保施工保证体系框图10.3.安全管理制度10.3.1认真贯彻公司的有关安全工作的规定的规程，贯彻执行各级安全生产岗位责任制。安全组成员由项目经理、安全员、作业长等组成。项目经理是工程项目施工安全第一责任人，具有安全管理资质的专职安全员负具体管理责任。10.3.2项目部安全组实行定期安全例会制度。每月必须召开2～4次安全例会，例会主要内容有：(1)分析近期安全形式，查找安全工作中的主要问题；(2)通报上一时段隐患整改和违章考核情况；(3)布置近期安全工作重点和防范措施；10.3.3建立施工方案安全技术交底制度。编制分项工程施工方案时其中必须编制安全技术措施且应进行交底讨论，审批安全技术措施必须符合实际针对性强的原则。10.3.4项目经理部每月组织一次专业施工单位参加的联合检查。班组兼职安全员应在施工过程中随时对安全操作，安全措施进行检查，发现隐患及时整改。专业施工单位安全员，项目部安全员负责日常安全检查及重点项目跟踪检查。安全检查做到全面全员全过程控制，隐患整改率为100%。10.3.5对各施工单位人员、作业班组人员一方面通过签订明确了双方的责、权、利的安全合同(协议)，另一方面加强对其进行监督检查等管理活动的开展：(1)其施工方案、安全预测对策表、技术交底记录等有关方案资料进行检查；(2)不定时地到施工现场进行检查，并严格按有关协议条款进行考核。10.3.6落实五项制度(1)安全岗位责任制工程负责人——工程安全第一责任人技术负责人——工程安全技术第一责任人安全负责人——工程安全具体管理责任人施工技术员——安全技术具体管理责任人班组安全员——作业区、班组安全具体管理责任人作业长、班组长——安全技术实施、过程管理责任人(2)确认制机具可靠性——设备员负责执行现场吊点可靠性——作业长、班组长负责执行安全技术措施到位性——安全负责人负责执行安全技术交底到位性——作业长、班组长负责执行歇复岗人员安全教育到位性——公司安全员、班组长负责执行特殊作业人员资格——安全负责人负责执行设备操作人员资格——安全负责人负责执行作业环境、作业人员安全状况——作业长、班组长负责执行(3)联保互保制同工联保；同班联保。互相监督，互相保护。各班组长负责按规定要求将班组人员结成一对对联保互保对子，并报安全人审批存档。(4)旁站制只要施工现场还有人，就必须有安全管理人员在场监护。安全管理人员应是第一个到达施工现场、最后一个离开施工现场的人。(5)日清制当日事当日毕，施工现场每天清理干净，保证安全通道始终通畅。有违反规定、酿成事故者，严格按照有关法规文件执行，进行主要责任、相关责任追究相关部门予以经济行政或刑事处罚。10.3.7安全职责(1)项目经理部安全组职责：a.认真贯彻国家、地方和本企业的安全生产、职业卫生、环境保护的政策、法规、制度标准。b.讨论制订本工程施工安全生产总体规划、目标和具体方案。c.依据施工组织设计、施工安全措施方案组织好安全文明施工。d.研究解决本工程安全生产方面的重大问题。e.组织安全生产定期检查和专业检查，督促施工单位开展好日常巡查及隐患整改。f.每月组织一次安全宣传教育活动。g.做好安全生产记录，建立健全下列资料档案：―工程分承包合同―工程分承包安全协议―施工组织设计（施工方案）―对各施工单位安全交底卡―各施工单位特种作业人员名册―安全教育活动记录―安全例会记录―安全检查记录―事故隐患整改台帐―违章处理记录―脚手架搭设验收单―安全网架设验收―文明施工检查记录―施工用电检查记录―安全事故台账发生伤亡事故，立即组织抢救，保护现场并迅速通知安环部。参加职工伤亡事故的调查、分析，组织落实整改措施。(2)项目部经理安全职责：a.对工程项目安全管理负全面责任，负责组织编制与审定本工程项目安全工作计划、目标和具体方案。b.负责建立完善的安全管理体系，选配项目部专、兼职安全员，并指导、支持其开展管理工作。c.负责组织对脚手架、安全网的搭设及高处或深基础、拆除等危险作业，编制专项安全措施方案，并组织实施。d.定期组织安全会议和安全教育活动。e.协调工程进度，尽量减少各作业体间的立体交叉作业。f.组织抓好现场文明施工。g.参加安全定期检查并落实隐患整改。h.协助有关部门搞好事故调查，组织落实整改措施。i.负责督促作业人员正确使用劳动保护用品。(3)项目部安全员职责a.协助项目经理抓好安全工作，对施工安全具体负责。b.每周组织一次联合安全检查；每天进行工地巡查。检查安全措施和安全标准化作业的实施情况，发现问题，立即督促整改。c.参与安全技术交底工作。d.发现危及职工生命安全的重大险情，有权下达停工令，然后报告项目经理。e.协调各作业体在设置安全设施或交叉作业时的矛盾。f.负责督促隐患整改和进行违章考核。g.做好有关安全会议记录，负责各种安全管理资料的立卷工作。(4)项目部施工技术员的安全职责a.负责编制符合安全技术规范要求的施工作业方案，从施工技术上保证安全施工。b.负责对检修工程、拆除工程及高处及深基础工程、脚手架、安全网搭设作业编制专项安全措施方案，并组织验收。c.负责对施工作业单位进行开工前的安全技术交底。d.根据施工现场进度和环境变化，随时增补专项安全技术措施和进行补充交底。(5)项目经理部作业长安全管理职责a.对本作业区内的安全管理负全面责任。b.负责对作业区内的施工人员进行工程安全技术交底和班前安全交底。c.负责按作业方案组织搭设和拆除脚手架、安全网、用电线路和装置及其他安全设施，并参与检查验收。d.负责指派安全监督岗对危险作业实行全过程监控。e.具体负责落实施楼梯口、通道口、预留洞口和阳台边、房屋边、框架边、卸料平台边、深基础坑边的安全防护措施。f.负责工区内的现场文明施工：――按平面布置图摆放材料――保持施工道路通畅――建立和保持良好的排水系统――合理布置临时用电线路――及时清理和外运建筑垃圾g.负责督促作业人员搞好个体劳动保护，制止违章指挥和违章作业。对双违人员有权予以教育、考核直至停工。(6)安全监督岗安全职责a.对所有监护区域施工安全负具体责任。b.负责检查、督促本区域作业人员进入施工现场戴好安全帽、高处作系好安全带、特种作业人员正确使用劳保用品(用电焊手套、防滑、绝缘胶鞋等)。c.在本作业区域内，负责地面安全监护，设置警戒区，严防落物伤害。d.在脚手架搭设、拆除时，负责全过程监护。e.配合作业长，检查、监督林边防护、楼梯防滑、孔洞围护加盖、漏电保护，架设安全网，设置安全走绳等安全技术措施的落实。f.有权制止违章作业、违章指挥，有权越级上报安全部门。在发现有危及人身安全的情况时，有权命令作业人员从危险区域内撤出。g.坚持安全巡查，制止违章，清查隐患督促整改。10.4安全施工保证措施10.4.1落实安全生产责任制(1)在施工中执行本企业《施工项目安全生产责任制》。(2)全体施工人员必须严格执行《建筑安装工程安全技术规程》。(3)严格执行安全管理奖惩制度，使各项安全管理规章制度变为广大职工的自觉行动。(4)坚持岗位安全技术培训，坚持特殊工种考核，持证上岗制度。(5)坚持安全技术交底制度。a.做好各方案实施安全交底工作，由方案编制人向施工班组交底，特别是安全工作重点部位以及采取的针对性措施均要一一交待清楚。b.开好施工班组每天班前会，班长要根据当天工作特点，做好有针对性的安全技术交底，并检查各项安全措施落实情况。10.4.2安全检查(1)工地项目部积极开展“安全月”，“安全周”活动，主动接受政府、劳动部门及建设管理部门检查。(2)坚持项目三级安全检查制度。(3)根据工程进展情况和时令季节情况，组织进行施工阶段性安全大检查及季节性安全大检查，对不安全情况，限期整改，落实到部门和落实人员。(4)认真贯彻“五同时”，在计划、布置、检查、总结、评比生产任务的同时，计划、布署、检查、总结、评比安全工作。a.项目部每月安排施工计划的同时，针对施工计划安排安全工作计划制定安全方针、目标、措施以及安全控制重点，并落实具体人员对口。b.项目部每周在调度会上调度施工任务的同时，总结上周安全工作情况，并布置本周的安全工作计划。c.项目部每月召开总结生产任务的同时，总结上月的安全工作并布置落实本月的安全工作措施。10.5安全管理点及安全技术措施施工现场工作人员必须严格按照安全生产、文明施工的要求，积极推行施工现场的标准化管理，按施工组织设计，科学组织施工。10.5.1安全管理点根据工程施工安全特点，施工安全重点防护对象为：(1)人员高空坠落；(2)高空落物，物体打击人员或物品；(3)塔吊设备事故；(4)塔吊操作，指挥联络失误产生的事故；(5)脚手架设计、使用、管理；(6)“四洞口，五临边“处的安全防护；(7)立体交叉作业，隔离防护措施；(8)环境、气候的影响；(9)施工建筑物防火；(10)防触电、雷击等。10.5.2安全技术措施(1)防人员坠落和物体打击措施a.楼梯口临时防护——楼梯形成后，设钢管扣件栏杆，立杆间距1500mm，扶手高度900mm，扫地杆距踏步面300mm。详见下图：b.基坑周边防护防护用钢管扣件搭设，立杆间距≯1.5m，扶手高度1200mm，扫地杆距地面300mm，在立杆靠坑一侧设斜撑并固定。见下图：c.楼层预留孔洞的防护短边＞1000mm的预留孔、洞周边防护用钢管扣件搭设，立杆间距≯1.5m，扶手高度1200mm，扫地杆距地面300mm，在立杆靠坑一侧设斜撑并固定，需作材料运输通道的孔洞四周设三面固定、一面活动的钢管扣件护拦，活动护拦采用万向扣件作铰。d.外墙部位安全防护 物体打击的因素主要来源于高处落物、塔吊转运材料不慎等。因此,重点应在这些方面采取可靠的安全措施。——凡进入施工现场人员必须正确佩戴安全帽，佩带胸卡，非本工程施工人员，不得入内。——作业层周边采取用彩条布全封闭方法：沿外架侧拴挂，垂下至下一层楼面以上，并沿斜撑钢管按间距≯2m，用10#铁丝固定。——楼层设置材料转运平台应相互错开投影面位置，同时要兼顾塔吊工作半径尽可能小。转料平台楼应设置在建筑物南面。脚手架及操作平台上的施工荷载严格执行规定，严禁超载使用。——高空作业所用材料、成品、半成品均应堆放平稳，工具应随手放工具袋内；传递物件禁止抛掷，禁止向下丢弃任何工具、材料、建筑垃圾等。——土建施工与安装施工垂直交叉作业，必须采取有效的安全隔离措施。e.塔吊——塔吊护臂按其设计说明及《施工组织设计》要求安设。——≥5级大风时应停止工作，吊钩升至最高处并回至最近半径处。——材料转运及装货、卸货点均应有专人负责套绳牵、缆风、指挥。f.在建工程的临建设施、设备、未装栏杆的平台及槽、沟、坑等都要根据具体情况做好防护，深度超过2m靠近人行道的必须设防护栏杆，夜间设红灯示警。g.在大基坑周边挖孔桩开挖前必须搭双排脚手架、操作面满铺跳板，对危岩进行清理，同时在周边挖孔桩和挡墙基础施工时必须用钢管脚手架搭设防护棚，上铺竹跳板和竹脚板。(2)施工用电施工现场临时电线路、设施的安装和使用必须符合建设部颁发的《建设工程施工现场供用电安全规范》（GB50194—93）的规定，具体要求如下：a.在建工程（含脚手架、吊篮）的外侧边缘与架空线路最小安全距离为：1KV以下为4m、1～10KV为6m。实际距离小于安全距离时，必须按规定采取防护措施，增强屏障，并设醒目的警告标志。b.起重机的任何部位和被吊物的边缘与10KV以下架空线路的边线距离不得小于2m。c.施工现场专用中性点接地的电力线路，必须实行三相五线制，如引入的电源为三相五线制时，在引入的第一级开关的零线端子处，做好重复接地，工作零线和保护零线同时从重复接地处引出，重复接地电阻值不大于10Ω。d.施工配电系统按施工组织设计要求设总配电箱，分配电箱，开关箱，实行分级配电，开关箱必须装漏电保护器。（漏电保护器应符合GB6829—86标准）。e.导线穿墙、坑、洞、棚或过路时应穿管保护，严禁乱拉乱扯把线等。f.当施工现场临时用电与甲方共用一供电系统时，要根据甲方的要求做保护接零或作保护接地，严禁一部分接地另一部分接零。g.地下室、沟槽内及操作时使用的手把行灯，电压不得超过36v，潮湿场所、金属容器内不得超过12v，露天装设的灯具，其灯口和开关要使用防水灯具，与地面的间距不小于2.5m，碘钨灯具应在3m以上，电线固定可靠，不得靠近灯具。h.职工宿舍、工具房照明及施工用移动式照明采用低压安全电源。i.手动开关电器只许用于直接控制照明电路和容量不大于5.5kw的动力电路，对于容量大于5.5kw动力电路，应采用自动开关电器或降压起动装置控制。j.低压干线的架设、配电箱、熔丝等要根据现场条件，依据规程规范进行布置，应设在干燥、通风、操作方便及常温场所，露天应有防雨设施。k.施工周期较长，用电设施较多的工程要有电气设计。l.所有电工必须持证上岗。(3)防火措施a.灭火器的配置：民工宿舍、木工加工房、铆焊加工房、配电房、库房是必须配置灭火器的重点部位。b.木工房、铆焊房、配电房、库房及堆放易燃易爆物质的场所应在显眼部位挂防火告示牌。c.气瓶应有防震圈、安全帽，存放地点有明显标志，并有防火防爆措施。d.可燃与助燃气瓶安全距离应大于5m，与作业距离大于10m。e.施工现场生活用锅炉的安全装置要齐全有效。f.有易燃物品的场所或其上空不准随意动火(氧割或电焊)必须动火，应先申报，并采取切实可行的防火措施---砌临时防火墙、采用防火材料(石棉板等)临时遮盖后方可进行。(4)起重吊装施工机械应按照施工总平面图规定的位置线路设置，不得侵占场内道路。施工机械进场安装后需经过安全检查，合格后方能使用。起重符合GB6067—85《起重机械安全规程》规定，确保安全限位装置齐全有效。超限吊装设备应制定切实可行的吊装方法和技术措施，保证吊装安全。a.起重机严禁超载吊装，满载工作时，左右回转范围不得超过90°,严禁横吊，以免倾翻。较大型设备的吊装及场地窄小，障碍严重的起重作业要编制施工方案，安全技术保证措施要可靠详尽。b.电动卷扬机应安装在视野宽阔，距起吊物15m以外的位置。固定必须牢固，防止吊物时产生倾复与滑动尾部的封绳必须正确的锁固在锚桩上。c.手拉葫芦吊钩、链条等主要受力件不得损坏。提升过程中，拽动手拉葫芦链条用力应均匀和缓，禁止用力猛使链条跳动或卡环。d.千斤顶必须放在结实可行的基础上，防止重物滑动。每台起重能力不得小于载荷的1.2倍，顶升高度不得超过有效顶程。e.各种起重机械按规范规定配备可行有效的安全装置。f.严格遵守“十不吊”：斜拉斜挂不吊；超负荷或物体重量不明不吊；安全装置失灵不吊；捆绑、吊挂不牢或不平衡不吊；指挥信号不明、光线暗淡、视物不清不吊；吊件带棱角、缺口无措施不吊；吊件上有人或添置物不吊；吊件埋在地下、重量不清或未采取措施不吊；氧气瓶、乙炔瓶等具有爆炸性物品无防护措施不吊；露天作业六级以上大风不吊。g.起重吊装设专人指挥，指挥工具、信号统一。(5)“三宝”及“四口”的防护a.凡进入施工现场人员必须正确佩戴安全帽。b.根据作业种类选择合适的安全带，凡在2m及2m以上的高处作业的必须系好安全带。c.凡在4m及以上的在建工程施工，必须支安全网。d.在建工程的楼梯口、通道口、预留口、均应进行防护，上料口要加可移动的栏杆。e.在建工程的临建设施、设备、未装栏杆的平台及槽、沟、坑等都要根据具体情况做好防护，深度超过2m靠近人行道的必须设防护栏杆，夜间设红灯示警。(6)施工机具a.各类施工、加工机具自身的安全保护装置必须齐全有效。b.手持电动工具应选用Ⅱ类电动工具，并装额定电流不大于15mＡ，动作时间小于0.1s的漏电保护器，若使用Ⅰ类工具时还应作保护接零。露天潮湿场所金属架上，严禁使用Ⅰ类手持电动工具。c.电焊机一、二次应用接线并加罩防护，二次线应用线板、线鼻子接牢，露天存放应有良好的防雨、防潮设施。d.潜水泵、水泵、打压泵等均应有保护接零。(7)压力容器及其他a.空气压缩机空气泵的安全阀、压力表、调节器、温度表、电流表必须灵敏可靠，指示正常，空压机应由有证人员操作。b.气瓶应有防震圈、安全帽，存放地点有明显标志，并有防火防爆措施。c.可燃与助燃气瓶安全距离应大于5m，与作业距离大于10m。d.施工现场生活用锅炉的安全装置要齐全有效。(8)高空作业防护高处作业必须设置防护措施，并符合JGJ80—９1《建筑施工高处作业安全技术规范》的要求。按照GB3608—83《高处作业分级标准》实行三级管理。——2～5m为一级管理，由专业工班长负责；——５～15m为二级管理，由专业施工负责人负责；——15m以上为三级管理，由项目经理负责。a.项目部施工负责人对该工程的高处作业安全技术负责，安全防护设施应由项目部负责组织验收，因工作必需临时拆除或变动安全防护设施时，必须经项目部施工负责人同意，并采取相应的可行措施。b.各工种进行上下立体交叉作业时，不得在同一垂直方向上操作；作业时，上下层间应隔离。c.脚手架的搭设必须符合安全技术规程的规定。并经有关技术人员检验合格后方可投入使用。d.移动式梯子，梯脚底部应坚实，上端应有固定措施，立梯工作角度以75°±5°宜。不得有缺档和垫高使用。拆梯使用时上部夹角35°～45°为宜。并有可靠的拉撑措施；禁止二个人同时上梯作业。e.安装管道时必须有已完结构或操作平台为立足点，严禁在安装中的管道上行走。f.雨天进行高处作业时，必须采用可靠的防滑措施。高耸建筑物应设置避雷设施。遇有六级以上强风、浓雾等恶劣气候不得从事高处作业，强风暴雨后，应对高处作业设施逐一进行检查，发现有松动、变形、损坏等现象，应立即修理完善。g.作业人员高空使用工具时，为防滑落，应用绳子将工具系牢，牢挂在固定构件或人体上。h.进入高空或其它作业面时应排除作业面不安全因素方可作业。i.高空作业人员均应配备防滑鞋、工具袋、安全带、安全帽并应正确使用。(9)脚手架a.脚手架搭设前要有设计方案和安全技术交底，搭好应验收。b.严格按规定选择杆件、零配件，按规定与构筑物连接，铺设脚手板，支设安全网和设置防护栏杆及马道。c.拆除时要清理脚手架上的杂物，设置警戒范围，自上而下地拆除不许上下同时拆除作业。(10)防雷击措施a.主体结构施工过程中，利用主体结构钢筋作为避雷网，引下线、地基基础作为接地体，以防对大楼的雷击。b.主体结构完工后，应及时完善大楼的防雷接地施工。c.施工用塔吊顶端安装避雷设施，根据实际情况决定是否加设引下线，就近利用已施工的基础作为接地体。10.6.现场文明施工管理10.6.1文明施工保证体系成立以项目经理为首的安全与文明生产领导小组，根据该工程的特点设专职安全员多名，各施工班组设兼职安全员，建立一套完整有效的文明施工管理体系。10.6.2文明施工管理措施(1)贯彻执行国家、重庆市关于建筑安装工程文明施工管理办法、规定办理。(2)成立以项目经理为首的文明施工领导小组，对施工人员进行文明施工教育，加强文明施工意识。项目部根据有关规定，结合施工现场实际情况，制定《安全文明生产奖惩条例》。每周进行两次现场文明施工检查，进行考核。(3)对施工现场实行分片包干制度，划分管理区域，建立责任区，规定职责范围，确认负责人，并落实文明施工责任制。(4)严格按建设单位批准后的施工平面布置图进行大临布设，合理使用场地，认真听取和尊重建设单位、监理方意见，大临搭建整齐规范化，搞好环境卫生，环境保护制度化。(5)施工现场采取规范化管理，在现场醒目处设置施工标牌。各种设备、材料按计划进场后，必须按施工平面图布置分类堆放，并设置标牌。(6)做好成品保护工作，保护上工序已完工程的成果。如确实施工需要，需在已完工程上作业时，应事先报告，经批准同意后才能实施。(7)加强施工项目“旁站管理”和“日清制度”，建立定期检查、评比制度，把文明施工作为考核作业队的考核指标并坚决落实。(8)施工区域实行封闭施工，在施工现场施工现场周围砌筑240mm厚、2200mm高砖围墙，并做压顶。设置一个出入口，并修筑门卫房，派专人值班，并维护场内的交通。(9)在施工现场主要出入口处，设置现场施工标志牌，标明工程概况、工程负责人、建筑面积、开竣工日期、总平面布置图以及场容分片包干和负责人管理图及有关安全标志等，标志要鲜明、醒目、周全。(10)进场前与建设单位和当地居民管理单位取得联系，在公安和环保部门指导下，订立协议，明确各方权利和义务。(11)贴出“安民告示”，设立群众来访接待组，主动邀请居民代表开会，介绍开、竣工日期和各项环保措施。建立起互相理解信任、相互支持配合的良好关系。(12)由文明施工领导小组对施工场内文明施工负责监督、管理。为减少对周围环境的污染，出入施工现场的车辆必须清扫干净，现场的建筑垃圾及废料必须及时清理到指定地点堆放，以保证施工现场的清洁和施工道路的通畅，无积水。(13)组织场容清洁队，专门负责生产区、生活区的清洁卫生工作。生活、生产的垃圾及时运出场外；装运物应预先浇水湿润，进行湿式作业，垃圾出场采用封闭式灰斗或用毡布覆盖。场内道路指定专人适量洒水，减少扬尘，保持良好的现场环境。生活区的工人宿舍、食堂等场所要经常打扫，定期消毒，栽花种草，美化生活环境。(14)加强劳动保护，合理安排作息时间，配备施工补充预备力量，保证作业人员有充分的休息时间。(15)施工管理人员在和建设单位、监理单位、设计单位及其他有关管理单位交往中，做到礼貌待人；遇有分歧意见，应保持平心静气地协商解决。10.7.环保与环卫管理10.7.1环境管理资源配置（资金和设备）详下表：

**储物流有限公司技改项目（一期）工程环境管理资源配置10.7.2施工废水的排放严格按施工现场的总平面规划，布置各种临时设施、机械设备和材料堆场。施工前修好现场内的临时道路进行硬化处理，并沿建筑四周修筑排水沟，修建沉淀池。生活污水、施工废水先引入沉淀池内经处理后才排入市政污水井内，施工期间各工种、各专业班组各自做到工完料尽，及时清理保证物内道路畅通，无积余污水。10.7.3噪声污染的控制(1)目的控制施工噪音，防止噪音对人身、特别是对员工的听力伤害和对施工区域周边的影响。(2)噪声管理措施a.施工场界噪声限值，不同施工阶段作业噪声限值如下表。不同施工阶段作业噪声限值等效声级Leq[dV（A）]施工阶段主要噪声源噪声限值昼夜夜间土石方推土机、挖土机、装载机、冲气钻等7555基础振捣棒、混凝土罐车等85禁止施工结构混凝土搅拌机、混凝土罐车、地泵、汽车泵、振捣棒、电锯、支拆模板、模板修理、搭板修理、搭拆脚手架、外用电梯等7055装修吊车、升降机、外用电梯、拆脚手架、石材切割、电锯等6555备注06：00—22：00为昼夜22：00—6：00为夜间如有几个施工阶段同时进行，以高噪声阶段的限值为准，当由于施工工艺要求或其他原因，必须连续作业或进行夜间施工时，要向当地行政主管部门申报，并得到社区的认可和谅解。(3)噪声控制措施a.土石方阶段噪声控制措施：——土石方施工前，施工场界围墙应全部建设完毕．——所选施工机械应符合环保标准，操作人员需经过环境教育。——加强施工机械的维修保养，缩短维修保养周期。b.结构阶段噪声控制措施：——机械噪声排放控制在正常使用下，易产生噪声超限的加工机械，如搅拌机、电锯、电刨等，采取亏封闭的原则控制噪声的扩散。封闭材料应选择隔声效果好的材料，其几何尺寸视现场实际情况决定，选择低噪声设备，最大限度降低噪声。在有噪声的封闭作业环境下，要为操作工人配备相应的劳动保护用品，如对讲机、耳麦等。——运输车辆噪声排放控制车辆噪声采取减低速度的方法进行控制——人为噪声的控制措施模板、脚手架搭设、拆除、搬运、修理，塔吊指挥哨音、剔凿等，这些噪声的产生多数为人为因素．施工现场提倡文明施工，通过对全体有关人员进行培训、教育，培养环境观念。树立正确的环境意识，减少环境噪声污染，使作业人员在工作中予以控制。模板、脚手架支设、拆除、搬运时必须轻拿轻放，上下左右有人传递；钢模板、钢管修理时，禁止用大锤敲打；使用电锯锯模板、切割钢管时，应及时在锯片上刷油，且模板、锯片送速不能过快。——振捣棒噪声排放控制在噪声敏感区域均需选用代频振捣棒。振捣棒使用完毕后，及时清理干净，保养好；振捣砼时，禁止振钢筋或钢模板，并做到快插慢拔；振捣砼时，配备相应人员控制电源线及电源开关，防水振捣棒空转。——砼泵、砼罐车噪声排放控制因施工场地狭小、砼泵必须设在场界外时，应做封闭处理，将固定泵围起来；要求混凝土供应单位加强对砼泵的维修保养；加强对砼泵、砼罐车操作人员的培训及责任心教育，