实验21外界因素对酶活性的影响基础生物学实验(安徽大学研究生复试用生物 生命科学)

经典word整理文档，仅参考，双击此处可删除页眉页脚。本资料属于网络整理，如有侵权，请联系删除，谢谢！一、实验目的1.了解外界因素对酶活性及酶促反应速度的影响。2.加深对酶特性的认识。二、实验原理酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质，因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、pH值、酶浓度及某些离子浓度等变化很敏感。(一)pH值对酶活性的影响酶的活性受环境pHpH范围内才能表现它的活性。一种酶表现其最高活性时的pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pHpH度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。(二)温度对酶活性的影响只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。(三)酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=k[E]本不变。(四)离子对酶活性的影响就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl可以增加酶活性，高浓度的Cl或者低浓度--的CuNaSO2-2++4对不同的离子具有不同的效应。三、实验用品（一）材料淀粉、唾液淀粉酶。（二）器材冰箱、电炉、恒温水浴锅和铜水浴锅、试管架及试管、移液管架及移液管、锥形瓶。（三）试剂1.0.2mol/L磷酸氢二钠溶液称取35.61g含2个结晶水的磷酸氢二钠，用水定容至1L。2.0.1mol/L柠檬酸溶液称取21.01g含1个结晶水的柠檬酸，用水定容至1L。3.唾液淀粉酶将唾液分别稀释10倍，50倍和100倍，得三种浓度的酶液。4.O.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液0.5g可溶性淀粉和0.5g氯化钠，溶于100ml蒸馏水(需加热)。5.0.1%淀粉液0.1g可溶性淀粉，加到100ml蒸馏水中，加热溶解。6.碘液15g碘化钾和12.7g的碘，加少许水使碘完全溶解后，再用水稀释至200ml。7.1%氯化钠溶液。8.0.1%硫酸铜溶液。四、实验操作(一)pH对酶活性的影响1．缓冲溶液的配制取6只洁净的三角烧瓶，按表21-1编号和加试剂：表21-1磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制8.O0.2mol/L磷酸氢二钠(ml)0.1mol/L柠檬酸(ml)11.1513.2215.4516.4718.1719.458.856.784.553.531.83O.552.取6支洁净试管，分别编号后，按表21-2操作：表21-2pH对酶活性的影响36.8368.O3缓冲液量(ml)37℃保温，1min后，用滴管从3管中吸1滴反应液，放白瓷板用碘液检验#(1滴)。以后每隔1min检验一次。当3管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向#充分摇匀实验结果(二)温度对酶活性的影响取3支洁净试管，按表21-3操作：表21-3温度对酶活性的影响pH6.8磷酸缓冲液(ml)含NaCl的O.5%淀粉液(ml)立即处理温度O℃100℃37℃100℃10min平衡时间将1、2、3试管的稀唾液分别倒人1、2、3管中，，，结果(三)酶浓度对酶活性的影响1．取3支洁净试管，编号，按表21-4加入淀粉液，缓冲液，加毕后放人37℃恒温水浴中保温5min。表21-4酶浓度对酶活性的影响含NaCl的O.5%淀粉液稀释唾液褪色时间1233ml3ml3ml2ml2ml2ml1ml1ml1ml237℃恒温水浴中。计时，并每隔1min从各管中取出1滴，用碘液检验，记录从加进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。(四)离子对酶活性的影响取3支洁净试管，编号后按表21-5操作：表21-5离子对酶活性的影响1%NaCl(ml)O.1%淀粉液(ml)100倍稀释唾液(ml)3l313137℃恒温15min，然后冷却碘液(滴)结果五、实验建议1．因各人的唾液淀粉酶活性有所差异，若某一碘液检验结果为全部变为淡2．配制缓冲液时，吸量要准确。3．检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂。六实验报告及作业1pH值、温度或酶浓度为横坐标，作出反应速度和pH，温度或酶浓度的关系图。2．唾液淀粉酶的最适pH和最适温度是多少？如何进一步确定？3.温度为0℃和100℃两支试管中反应液遇碘呈蓝色，其原因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？4.如何确定氯化钠中氯离子是激活剂，硫酸铜中铜离子是抑制剂？5.什么是酶的最