光学显微成像

本文格式为Word版，下载可任意编辑——光学显微成像光学显微摄影的用光方法与技巧摄影用光技巧摄影用光技巧大揭秘

光学显微摄影即显微摄影电子显微摄影而用的术语。由物镜(倍率2-100倍)和目镜(5-15倍)的组合，若用35毫米照相机，可在胶片上拍成5-800倍。若为六寸片，能拍出20-3000倍的照片，但光学显微镜倍率限度约为1200倍。若超出此限度举行扩印，无法获得明显的像。光学显微摄影务必要有亮堂、平匀、无反光的照明，同时要留神光源的调理和色温的变化。另外，由于样品的性能差异，还要选用不同的照明方法。下面是我为您整理的关于光学显微摄影的用光方法与技巧，梦想对您有所扶助!

光学显微摄影的用光方法与技巧一、光学显微摄影的用光

光学显微摄影的照明，会对物镜解像力产生明显影响，一般要求光源的输出能够集中到很小面积上，光强高、热量小，几何尺寸不大。

在一般明视场照明显微摄影时，通常采用6伏或者12伏螺口形白炽钨丝灯泡做照明光源，色温为2700～3200K，其亮度的调整由变压器实现，这种照明尽管看上去很亮，色温并不高，所以，应尽量用最高电压，使灯光亮度、色温提高，并使用RAW格式拍摄，以便后期校正色温。

但是，白炽钨丝灯泡长期使用，其钨丝蒸发后所产生的沉物会积聚在玻璃罩内壁，这样会降低亮度与色温。所以，12伏100瓦的卤素钨丝灯光便成了光学显微摄影的优质光源。(这种卤素钨丝灯在灯管内充卤素气体，在灯丝点燃后，蒸发出来的钨会与卤素气体形成卤化钨，附着在灯管内壁，而关闭电源冷却时，卤化钨又会分解，届时钨又回到灯丝上去，这样便延长了灯泡的使用寿命，改善了光源照明，缩小了灯泡的几何尺寸，提高了光源强度)。

用于光学显微摄影的光源还有氙灯、锆灯、电子闪光灯、汞蒸气灯等，可以根据不同的目的，选用适当的光源。如氙灯不仅可以发出连续的可见光，还包含长波紫外线和红外光谱片面;汞蒸气是优质的单色光源，更加适于单色黑白显微摄影。

拍摄显微照片，要求有亮堂、平匀、无反光的照明条件，其照明方法可分为两类，即透射照明和反射照明(落射光照明)

透射光照明是指从光源射出的光线从标本的下面透过标本进入物镜。而落射照明是指光线从正面投射到标本的正面，物镜采纳的光是从标本反射来的光。

落射光照明主要用于拍摄不通明的标本，如皮肤、小生物、植物果实外观等。拍出的像有立体感。落射光与物镜之间的角度越小越好，现代显微摄影装置的落射光大多与物镜合轴。在没有专业设备的处境下可以用斜射照明，在对应面加反光屏，或用另一只灯做辅佐光，也可以使用环形闪光灯。

光学显微摄影的用光方法与技巧二、光学显微摄影的曝光操纵

虽然现在的相机均有自动测光或自动曝光功能，但是假设一个视野中亮处面积超过二分之一，那么易展现曝光缺乏的现象，所以假设标本主体小，又处在亮背景中，就要适当增加曝光时间。

在操纵曝光时，要留神以下因素：

1.光源强度的影响：由于电压的变化，光源亮度可能产生5-10倍的变化。

2.光源的距离及对标本的照射面积。

3.光源的波长及色温。光源的波长长、色温低，色光偏红时，曝光时间要长些。光波短，色温高，色光偏青时，曝光时间要短些。

4.电压的波动会引起曝光量的变更，所以摄制过程中要保持电压的相对稳定。

5.聚光器的位置经过测验固定后不宜改动。

6.使用滤色镜、乳白玻璃、偏振镜等都要按其曝光指数增加曝光时间(手动曝光)。

7.目镜的放大倍率。以5倍的目镜作曝光基准1时，10倍目镜要4倍的曝光量，15倍目镜要增至9倍的曝光。

8.物镜的倍率和NA值：假设把10倍的目镜作为1时，40倍目镜要2.5倍的曝光，100倍的物镜要4倍的曝光。

9.从目镜出射点到感光片的距离

10.标本的染色也会对曝光产生影响

11.标本与目镜间的介质折射率大、曝光时间短，反之，曝光时间长。曝光时间与折射率成反比。

12.聚光镜的光阑孔径变化能使曝光产生2～20倍的变化。

光学显微摄影的用光方法与技巧三、光学显微摄影中滤色镜的应用

滤色片几乎在拍摄什么样的标本都有用场。例如：

1.用滤色片校正反差突出重点光学显微摄影往往要突出重点，这就要使用适当的滤色镜加强反差，强调需要突出的重点布局，而减弱其非重点片面。使用标本染色补色的滤色镜可以巩固标本反差，譬如苏木精染出的色标本中用绿滤色镜，就可巩固反差。

2.两种颜色的布局表达：假设想使标本中两种以上的颜色都领会地呈现在画面上，如红、蓝两种颜色，可以采取两次曝光的方法，先用红滤色镜，再用蓝滤色镜各曝一次光，就可以领会地表达两种颜色的布局。

3.短波光滤色镜可以提高对标本的辨识率。短波光滤色镜(如UV镜)可以辨识出在可见光下肉眼看不见的组织布局。用紫外线滤色片合作