中药和其制剂的含量测定方法

中药和其制剂的含量测定方法按君、臣、佐、使关系考虑药品之间七情、十八反、十九畏、药对、禁忌、有毒无毒等配伍组方。我国最早中医学著作《黄帝内经》及中药学著作《神农本草经》为代表。以阴、阳、表、里、寒、热、虚、实八纲表示机体功效状态；以望、闻、问、切四诊作为了解机体表观状态伎俩。中药和其制剂的含量测定方法2/34ChP从1963年版开始，分为两版，其中第一版收载中药材和中药制剂。一部收载中药品种992种，其中中药材532种，中药制剂460种，增修订品种比1995年版ChP有了发展。ChP中：当代分析技术有：显微判定技术、化学判别方法、色谱法等对制剂所含药材进行判别；检验杂质方面：杂物、砷盐、重金属、农药残留量等，并对药品中明确有效成份品种建立了含量测定方法等方面。中药和其制剂的含量测定方法3/34中药制剂质量影响原因：轻易吸潮、染菌、有效成份也可能因为不稳定而损失。原药材质量受各种原因影响：生长环境、采收时间、贮藏条件不一样，有效成份含量可能有很大差异，可直接影响制剂质量。总结：应按照GMP要求，从药品生产各个步骤以及销售、使用等加以全方面控制，才能确保药品质量。中药制剂分析样品普通需要经过提取、纯化等预处理过程，以排除干扰组分干扰。GAP中药材生产质量管理规范，由国家药品监督管理局公布，6月1日起执行。中药和其制剂的含量测定方法4/34二、中药及其制剂分类与质量分析关键点。传统剂型有：丸、散、膏、丹、酒、汤、茶、锭等；现在剂型有：口服液、颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、气雾剂、注射剂等。按制剂物态进行分类：中药材及其炮制品、液体制剂、固体制剂、半固体制剂。中药和其制剂的含量测定方法5/34（一）中药材及其炮制品（二）液体制剂1．合剂与口服液：煎煮法、渗漉法、蒸馏法等；2．酒剂和酊剂：酒剂用浸渍法、渗漉法或其它制备方法，酊剂可用溶解法、稀释法、浸渍法或渗漉法。检验项目：乙醇量测定法，采取气相色谱法。进行甲醇限量、微生物程度和最低装量检验。中药和其制剂的含量测定方法6/343．注射剂：中药注射剂系指从药材中提取有效物质制成可供注入体内灭菌溶液或乳状液，以及供临用前配制成溶液无菌粉末或浓溶液。中药指纹图谱包含：色谱指纹图谱（HPLC、GC、TLC等），光谱指纹图谱和脱氧核糖核酸指纹图谱等。中药和其制剂的含量测定方法7/34（三）半固体制剂1．煎膏剂：是指药材煎煮、去渣浓缩后，加炼蜜或糖制成半流体制剂，有煎膏剂还可加入药材细粉，搅拌混匀后制，又称膏滋。2．浸膏剂和流浸膏剂：流浸膏剂是指用适宜溶剂剂出药材中有效成份，蒸去部分溶剂，调整浓度至要求标准而制成制剂，普通加20%~50%浓度乙醇作为防腐剂。浸膏剂：是指用适宜溶剂浸出药材中有效成份后，蒸去全部溶剂，浓缩成稠膏状或块、粉状，每1g浸膏普通相当于原药材2g~5g中药和其制剂的含量测定方法8/34（四）固体制剂1．丸剂：是指药材细粉或药材提取物加适意粘合剂或辅料制成球形或类球形制剂。分蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、浓缩丸、微丸等。检验项目：水分、重（装）量差异、溶散时限、无菌检验等。水分检验：甲苯法、烘干法、减压干燥法检验。2．散剂：是指一个或各种药材混合制成粉末状制剂，分为内服散剂和外用散剂两种。检验项目：均匀度、水分和装量差异等。中药和其制剂的含量测定方法9/343．颗粒剂：是指适宜辅料与药材提取物或与药材细粉制成颗粒状制剂。分为可溶性、混悬性和泡腾性颗粒剂。检验项目：粒度、水分、溶化性、装量差异等。4．片剂：是指药材细粉或浸膏加辅料压制而成片状制剂。检验项目：重量差异和崩解时限。5．胶囊剂：分硬胶囊剂、软胶囊剂和肠溶胶囊剂。检验项目：水分、装量差异、崩解时限，水分含量程度。中药和其制剂的含量测定方法10/34三、中药及其制剂分析中待测成份提取分离与纯化方法（一）提取方法：1．萃取法；2．冷浸法；3．回流提取法；用于固体制剂提取。4．连续回流提取法：；5．水蒸汽蒸馏；6．超声提取法；7．超临界流体萃取（SFE）。见图14-1中药和其制剂的含量测定方法11/34（二）纯化方法纯化是指组分被提出后，还需深入处理，以除去干扰组分干扰。测定方法：容量法、紫外分光光度法等。萃取二次可分别除去中性、酸性脂溶性杂质及水溶性杂质，到达纯化目标。柱色谱法也是惯用纯化方法，惯用纯化方法，惯用固定相有硅胶、氧化铝、大孔吸附树脂等。中药和其制剂的含量测定方法12/34第二节中药及其制剂分析普通程序基本程序：供试品抽取、检验依据和分析方法准备、样品真伪判别试验、样品质量检验、样品中主药含量测定和检验统计等。一、取样与样品保留注意事项：（1）供试品要含有一定代表性、科学性、真实性和代表性；（2）必须严格按照要求取样方法进行取样：均匀、合理。中药和其制剂的含量测定方法13/34（一）中药材取样法：1．取样前应注意品名、产地、规格等，检验包装完整性，有没有水迹、霉变等异常现象；2．从同批药材包件中抽取样品标准；3．对破碎、粉末状或大小在1cm以下药材，可采取样器取样；4．将取得样品混合均匀，即为总样品，可采取四等分法（又称“四分法”）重复数次直至最终到余量足够供检验用。

中药和其制剂的含量测定方法14/34（二）中药制剂取样法1．粉状中药制剂（散或颗粒剂）；2．液体中药制剂（口服液、酊剂、酒剂、糖浆）；3．固体种成药（丸剂、片剂）；4．注射剂；5．其它剂型中中药制剂。

中药和其制剂的含量测定方法15/34二、判别性状判别、显微判别、理化判别等。三、检验普通理化检验项目、重金属检验。四、含量测定有效成份测定、有效部位含量测定。五、检验统计真实、详细、整齐。中药和其制剂的含量测定方法16/34第三节

中药及其制剂定性判别方法一、性状判别；二、显微判别；三、理化法判别；（一）显微化学反应法（二）微量升华法（三）荧光分光光度法（四）颜色反应及沉淀反应法四、色谱法判别。中药和其制剂的含量测定方法17/34第四节中药及其制剂杂质检验与普通质量控制方法杂质检验项目：水分、灰分、酸不溶性灰分、砷盐和重金属限量、有机磷和有机氯农药残留量。普通质量控制项目还有浸出物、挥发油、总氮测定、辅料质量检验与剂型相关检验等内容。中药和其制剂的含量测定方法18/34一、水分检验法检验目标：水分含量过高，可引发制剂结块、霉变或有效成份分解；药典附录收载水分测定法共有四种；第一法为烘干法；第二法：甲苯法；第三法为减压干燥法；第四法：气相色谱法测定水分。中药和其制剂的含量测定方法19/34二、总灰分和酸不溶性成份总灰分是指药材或制剂经加热炽灼灰化遗留无机物。测定主要目标：控制泥土、砂土量，同时还反应药材生理灰分量；测定方法：炽灼使完全灰化至恒重，依据残渣重量计算总灰分含量百分率；检验标准：如以合格药材为原料，标准上能够不再检验该项目；酸不溶性成份测定：灰分加入稀HCl后过滤，再炽灼至恒重，即得酸不溶性灰分量。中药和其制剂的含量测定方法20/34三、重金属：以铅、汞、镉、铜等对人体都有严重毒害物质。当前现行标准控制在百万分之二十以下。世界卫生组织对铅应控制在百万分之十以下，镉应控制在百万分之0.3以下。有机破坏方法：干法和湿法两类。比如：制剂中铅测定可选取二硫腙比色法和原子分光光度法。

中药和其制剂的含量测定方法21/34四、砷盐起源：中药原药材受除草剂、杀虫剂和化学肥料等影响。ChP（年版一部）中收载砷盐有：（1）古蔡氏法（2）二乙基二硫代氨基甲酸银法。破坏方法：采取碱融法。JP中还收载了加硝酸镁乙醇溶液破坏方法，适合用于中药制剂。中药和其制剂的含量测定方法22/34五、残留农药种类：有机氯类如艾氏剂、六六六、氯丹等；有机磷类如三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷等；氨基甲酯类如西维因；二硫代氨基酸酯类如福美铁、代森锰等；无机农药如磷化铝、砷酸钙等；苯氧羧酸类除草剂如2，4-D、2，4，5-T等。检验内容确实定：接触农药不明样品普通可测定总有机氯量和总有机磷量；注：ChP（200年版一部）新增加有机氯农药残留量“检验”项目。

中药和其制剂的含量测定方法23/341．总氯量测定：照氧瓶燃烧法破坏；2．总磷量测定：供试品萃取后，过硅土柱，洗脱液浓缩后，用氧瓶燃烧法处理，磷钼酸比色法测定；3．气相色谱法：分离效能高，含有高灵敏度专属检测器，是对残留农药进行定性和定量分析最惯用方法；固定液：硅氧烷类，如OV-17，OV-21，SE-30等；载气：N2；测定有机氯检测器；电子捕捉检测器（ECD）；测定有机磷或硫使用火焰光度检测器（FPD）。中药和其制剂的含量测定方法24/34示例：中药中有机磷农药敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷等测定方法：气相色谱条件：柱长2m，内径3mm，担体为ChromosorbW/AW-DWCS，涂布2.5%SE-30和3%QF-1混合固定液，火焰光度检测器检测，进样口温度220℃，柱温180℃，载气为N2。对照品溶液：加苯或氯仿定量稀释成1mg/ml，用前加二氯甲烷稀释成1μg/ml。供试品溶液：中药细粉10g，加中性Al2O30.5g，精密加入CH2Cl220ml，振摇30min，滤过，取续滤液。本方法快速、简便、准确、含有良好通用性。中药和其制剂的含量测定方法25/34第五节中药及其制剂含量测定方法惯用含量测定方法：化学分析法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法。一、化学分析法：包含容量法和重量法。示例：昆明山海棠片含量测定方法采取提取后称定生物碱重量法。容量法应用还有酸碱滴定法测定制剂中总生物碱含量等。中药和其制剂的含量测定方法26/34二、分光光度法：简便，灵敏。ChP中UV法主要用于几个最大吸收波长较高，吸收较强组分含量测定，如小檗碱、芦丁、黄芩苷、丹皮酚等。示例：左金丸中小檗碱含量测定：黄连为君药，小檗碱为其主要有效成份，故测定其含量。用吸收系数法测定。比色法在中药制剂分析中应用：普通用于一类成份含量含量测定，如总黄酮、人参总皂苷含量测定。中药和其制剂的含量测定方法27/34三、薄层扫描法：是用一定波长光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光和可见光斑点或激发后能发射除荧光斑点进行扫描，将扫描得到图谱及积分数据用于药品判别、检验和含量测定方法。优点：含有分离效能高、快速、简便等。中药和其制剂的含量测定方法28/341．试验条件选择：A、薄层色谱条件：组分应能完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾，是先决条件；B、检测方法：吸收测定法和荧光测定法；C、测定方法：有反射法和透射法两种；D、扫描方式：单波长和双波长（见图14-3）；线性扫描和锯齿扫描。E、散射参数SX：见图14-4

中药和其制剂的含量测定方法29/342．测定方法选择：（1）外标法；（2）内标法；3、注意事项：A、薄层厚度应均匀，表面平整，最好使用预制板；B、点样准确，原点大小应一致；C、喷洒显色剂应均匀，量应适中；D、一些斑点颜色易挥发或对空气不稳定，可用一洁净玻璃板盖在薄层板上，并用胶布加以固定；E、本法线性范围较窄，应在其线性范围内测定。中药和其制剂的含量测定方法30/34示例：ChP（年版）一部中脑得生丸中人参皂苷含量测定：供试品除去脂溶性杂质，取出人参皂苷，作为供试品溶液；另取对照品人参皂苷。固定相：硅胶G薄层板；展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）。显色剂：10%硫酸乙醇液，110℃加热至斑点显色清楚，取出。扫描波长：λS=525nmλR=700nm，测定供试品和对照品吸收度积分值，计算，即得。本法使用两点校正法，标准曲线可作线性回归处理。中药和其制剂的含量测定方法31/34四、HPLC法优点：分离效能高，分析速度快，应用范围光，其重现性和准确度均优于薄层扫描法，是中药制剂含量测定首选方法。1．色谱条件选择：多使用反相高效液相色谱法（RP-HPLC），即使用非极性固定相，其中ODS应用最多；使用甲醇-水或乙腈-水混合溶剂作为流动相；普通使用紫外检测器检测，紫外检测器灵敏、稳定。中药和其制剂的含量测定方法32/342．含量测定法：（1）外标法；（2）内标法。3．供试品溶液制备：普通经提取制得，不再需要纯化处理。但组成复杂制剂，仍需采取萃取、柱色谱等预处理方法进行纯化处理。注：中药制剂中多含有糖，制备时宜使用高浓度醇或其它有机溶剂提取测定组分，最好不使用水为溶剂，以免提取糖污染色谱柱，提取方