《地中海贫血筛查与诊断技术规范》（项目编号：2014-0217）征求意见稿等材料

(征求意见稿)广西壮族自治区市场监督管理局发布前言 引言 I1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4缩略语 5地中海贫血筛查技术 6地中海贫血基因诊断技术 7实验室质量控制 8信息管理 附录A(资料性)地中海贫血筛查流程图 附录B(资料性)血细胞分析和血红蛋白组分分析室内质量控制程序 1附录C(资料性)血红蛋白组分分析报告单 附录D(资料性)地中海贫血基因诊断知情同意书 附录E(资料性)地中海贫血基因诊断申请单 附录F(资料性)地中海贫血基因产前诊断知情同意书 附录G(资料性)地中海贫血产前基因诊断申请单 附录H(资料性)地中海贫血基因检测报告单 附录I(规范性)血细胞分析和血红蛋白组分分析室内质量控制程序 我区是地中海贫血高发区。2010年我区率先启动地中海贫血防治计划以来，全区地中海贫血防治体系、设施设备、技术方法、群众地中海贫血知识普及程度、患者接受度和检测依从性等均有了长足进目前我国尚无地中海贫血筛查及基因诊断的国家和地方标准，针对具体操作过程中诸如知情告知的细节、检测技术流程、结果分析与解读、质量控制、报告的撰写及遗传咨询等方面的标准急需制定。鉴于此，遵循《母婴保健法》和《产前诊断技术管理办法》等相关法规和规范，充分参考国际地中海贫血协会推荐方案、国家卫计委《地中海贫血防控试点项目技术服务规范(试行)》2014年版，与国内多家开展地中海贫血检测的产前诊断机构或实验室共同明确数据参考的前提下，结合我区多年检测经验，针对地中海贫血的临床应用细节，重点对地中海贫血筛查及基因诊断的技术流程、质量控制、报告标准等提供技术层面建议，制定本技术标准。以期达到规范全区地中海贫血筛查及诊断技术的目的。本标准适当考虑国际化水平，努力使之能供与广西地中海贫血流行情形相似的东南亚临近国家和地WS/T405血细胞分析参考区间a地中海贫血a-thalassemia2是由3个α珠蛋白基因缺失或缺陷所造成，患者仅能合成少量a链，其多余的HbH同一个位点上的两个等位基因相同的基因型个体，即遗传因子组成相同如AA,aa。杂合子heterozygote同源染色体同一个位点上的两个等位基因不相同的基因型个体，如Aa。是指在出生前利用分子遗传学和医学影像学方法，对胚胎或胎儿的发育状态、是否患有疾病等方面进行诊断。侵入性产前诊断Invasiveprenataldiagnosis利用各种诊断技术，对胎儿做出宫内诊断，主要有绒毛活检术、羊膜腔穿刺术、脐静脉术。室内质量控制Indoorqualitycontrol,IQC是指实验室内部实验室工作人员对所有影响质量的每一个工作环节进行系统控制，以评价本实验室以确定检验结果是否可靠、有效，能否发出报告的一项工作。室间质量评价externalqualityassessment,EQA是由外部独立机构采取一定的方法，连续、客观地评价多间实验室检测结校正结果，使各实验室间的结果具有可比性。下列缩咯语适用于本文件。Hb血红蛋白(Hemoglobin)HbA血红蛋白A(HemoglobinA)HbF血红蛋白F(HemoglobinF)CE毛细管电泳(capillaryelectrophoresis)DNA脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid)PCR聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction)MCV红细胞平均体积(Meancorpuscularvolume)MCH红细胞平均血红蛋白量(Meancorpuscularhemoglobin)SOP标准操作程序(StandardOperationProcedure)STR短串联重复序列(ShortTandemRepeat)IFCC国际临床化学与检验医学联合会(InternationalFederationofClinicalChemistry)Cv变异系数(CoefficientofVariation)MLPA多重连接探针扩增技术(Multiplexligation-dependentprobeamplification)CLSI美国临床和实验室标准协会(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)PT能力验证(proficiencytest)44——精密度：HbA2和HbF室内变异系数(CV)小于5%;5 新生儿脐带血：12%≤HbA≤40%,60%≤HbF≤90%,0%≤HbA2≤1.0%; 6个月≤年龄<2岁：83%≤HbA≤97%,0%≤HbF≤13%,0.8%≤HbA2≤3.0% 年龄≥2岁：91.5%≤HbA≤97.9%,0%≤HbF≤5%,2.4%<HbA2≤3.5% 出现异常血红蛋白 MCV、MCH低于各年龄段参考范围下限： bA2位于参考范围外：岗证6 7 开展地中海贫血基因产前诊断应签署知情同意书(参见附录F),应包括以下内容： 孕8～14周宜行绒毛活检 6.2.3设备、耗材、试剂 普通PCR仪 8 9 .1设备：在.6的基础上，增加基因分析仪(视方法学而选择)。 多重连接探针扩增技术(MLPA); 下一代测序技术(NGS); 第三代测序技术(TGS)等.(资料性)地中海贫血筛查流程图A.1地中海贫血携带者筛查流程见图A.1。血细胞分析+Hb组分分析遗传咨询、诊治图A.1携带者筛查流程图Hb组分分析未见异常可疑结果阳性结果未见异常阳性结果家系喻证33B.2从样品总体中随机抽取21个(制备数量少于500个，可抽取10个)样品，每个样品重复测定3次(不少于2次),重复测定的样品应分别单独取样，测定顺序为：第1次：1-2-3…-19-20-21;第2次：21-20-19…-3-2-1;第3次：1-2-3…-19-20-21。测定结果样表见表B.1。品号测定结果23456789年龄：XX科别:XX科临床诊断：5血红蛋白D/G(HbD/G)未检出%6血红蛋白S(HbS)未检出%7血红蛋白E(HbE)未检出%9血红蛋白C(HbC)未检出%10血红蛋白J(HbJ)未检出%11血红蛋白CS(HbCS)未检出%12血红蛋白快速带未检出%13血红蛋白慢速带未检出%14抗碱血红蛋白0.7%备注；建议进一步地贫基因检测。注：本检测结果仅对该标本负责。5XX医院地中海贫血基因诊断知情同意书【情况介绍和治疗建议】您因，拟定进行地中海贫血(简称地贫)基因诊断，需采集静脉血样本送检。【疾病特点及其风险】地中海贫血是一种遗传性溶血性疾病，因基因类型不同而临床表型不一。(1)静止型和轻型地贫临床表型多不贫血，但如双亲为同型地贫携带者，有生育重型或中间型地贫后代的风险。(2)中间型地中海贫血(血红蛋白H病)部分类型属于输血依赖型，面临定期输血、祛铁治疗等，生存质量较差预后不良。(3)重型α地中海贫血胎儿主要表现为胎儿水肿、巨大胎盘、胎死宫内及出生后无法存活且母体易出现高血压、子痫前期等并发症。(4)重型和中间型β地中海贫血孕期胎儿无明显异常表现出生到一定年纪后发病。目前唯一治愈的方法是造血干细胞移植，但面临无合适供体、排异反应、移植失败等风险，且治疗费用昂贵。大部分患者只能依赖性输血和去铁治疗，长期的治疗费用昂贵，【拟定医疗方案的性质、目的】目前，临床实验室采用的检测试剂盒检测我国常见的XX种β地贫基因点突变，X种常见的α地贫基因缺失型和X种常见的a地贫基因点突变，尚未包含所有突变位点。当可疑存在检测范围之外的突变，如筛查阳性而常规基因检测未见异常的情况时，则需进行罕见型地贫基因检测。本检测的目的是确定所携带的地贫基因，以指导生育计划和疾病治疗。【其他可选方法及其风险6地贫和部分轻型a地贫无法检出，存在漏诊的风险；某些疾病如缺铁性贫血的表型与地贫相似，存在误诊的风险对静止型a地贫和部分轻型α地贫无法检出，存在漏诊的风险；某些疾病如缺铁性贫血的表型与地贫相似，存在误诊的风险。【拒绝拟定医疗方案的风险】可能不会发生以下介绍的检查风险，但可能生育严重类型地贫的患儿。【检查潜在风险和对策】医生告知我如下地中海贫血基因诊断可能发生的风险，有些不常见的风险可能没有在此列出，医生告诉我可与我的医生讨论有关我检查的具体内容，如果我有特殊的问题可与我的医生讨论。1.我理解此检查可能发生的风险及医生采取的可能对策1)本检测范围有局限性，尚未包含所有的突变位点；罕见型地贫基因检测存在检测失败的可能性，2)检测结果未见异常，不能排除存在地贫的可能性，需要结合筛查结果综合判断；未提供筛查结果的，则不能保证基因检测结果的准确性3)由于检测异常、DNA含量低等因素，影响检测结果的判断，应重新采样，否则将终止该项检测4)其他无法预测的外部因素可能导致检测无法正常进行，将终止该项检测：5)受检者为儿童时，需要父母双方提供筛查和基因诊断结果，否则不能保证检测结果的准确性；6)检测结果为新发突变时，需要父母双方采样进行家系验证，否则无法解释新发突变的致病性2.鉴于当今医学技术水平的限制、个体差异、或无法预知的原因，即使在医务人员已认真履行了工作职责和严格执行操作规程的情况下，该项检查仍有局限性，存在漏诊和误诊的风险。尽管存在风险，但仅有必要进行此项检查。受检方需要提供真实有效的病史资料，并理解医务人员将严格按照医疗技术规范进行操作，尽最大努力减少上述风险的发生、我理解根据我个人的情况，除上述风险以外，还可能出现其他特殊并发症或风险。7地中海贫血基因诊断(静脉血)申请单见表E.1。男性信息；申请项目：□α+β地贫基因分析；□α地贫基因分析；□β地贫基因分析筛查结果：Hbg/LMCVfLMCHpgHbA2%HbF%基因诊断结果；检测机构；检测日期：身份证号码：女性信息：申请项目：□α+β地贫基因分析；□α地贫基因分析：□β地贫基因分析筛查结果：Hbg/LMCVfLMCHpgHbA2%HbF%基因诊断结果：检测机构：补助对象：□是□否其他说明：填表说明：如果是男性，就在男方信息栏填写；若为女性，在女方信息栏填写；若为夫妻，则分别填写；若为小孩，则在其他说明行填写其父母的基因诊断结果，若为补助对象，按照指示填写。按照规定，务必提供患者的筛查结果，若没有，请补充相关检测。申请的检测项目，只需要在所选择做的项目前打“√”。8(资料性)地中海贫血基因产前诊断知情同意书地中海贫血基因产前诊断知情同意书见表F.1。表F.1地中海贫血基因产前诊断知情同意书XX医院地中海贫血基因产前诊断知情同意书孕妇姓名年龄：ID号：【情况介绍和治疗建议】您因，拟定进行地中海贫血(简称地贫)基因产前诊断，需采集：绒毛□,羊水□,脐血□样本【疾病妊娠特点及其风险】重型α地贫目前尚无有效的治疗方法，在孕中晚期容易造成流产；重型β地贫整个妊娠期无明显异常临床指征，出生发病后，则需要终身依赖输血和去铁等治疗，给家庭及社会带来沉重负担，【拟定医疗方案的性质、目的】地贫是一种遗传性溶血性的单基因病，因此有生育高风险地贫患儿的夫妻双方携带者，需要对胎儿要检测我国常见的XX种β地贫基因点突变，X种常见的α地贫基因缺失型和X种常见的α地贫基因点突变需进行罕见型地贫基因检测。【可选方法及其风险】1.胎儿超声：非侵入性检查，仅能发现重型α地贫发生水肿胎儿，但不能确诊基因型。2.脐血血红蛋白电泳测定；快速诊断重型α地贫/β地贫，发现可能的中间型α地贫，但均不能确诊基因型，无法对家庭生育计划进行精准指导，而且需要等待到合适的采集孕周，不利于早期干预。【拒绝拟定医疗方案的风险】可能不会发生以下介绍的检查风险，但可能生育严重类型地贫的患儿。【检查潜在风险和对策】医生告知我如下地中海贫血基因产前诊断可能发生的风险，有些不常见的风险可能没有在此列出9医生告诉我可与我的医生讨论有关我检查的具体内容，如果我有特殊的问题可与我的医生讨论。1.我理解此检查可能发生的风险及医生采取的可能对策：1)样本如果存在母源污染，可能对检测结果判断造成影响。因此，标本检测前先进行母源污染分析(培养前标本),如存在大于10%比例的母源污染，需重新采样，否则将终止该项检测。小于或等于10%比例的母源污染无法检出，不排除影响检测结果2)本检测范围有局限性，尚未包含所有的突变位点；进行罕见型地贫基因检测，依然不能保证检出突变类型或位点；3)如果双盲平行试验结果不一致，应重新采样，否则将终止该项检测4)由于细胞培养在体外进行，受孕妇年龄、孕周、标本量、标本本身的质量及是否被污染等多种因素影响，细胞培养有失败的可能；使用抗生素、流产药物、抗肿瘤药物及部分其他药物会对细胞培养产生严重影响，故服药后检查需告知医生及实验室，以确定是否适宜进行细胞培养；细胞培养失败，应重新采样，否则将终止该项检测5)其他无法预测的外部因素可能导致检测无法正常进行，将终止该项检测；2.鉴于当今医学技术水平的限制、个体差异、或无法预知的原因，即使在医务人员已认真履行了工作职责和严格执行操作规程的情况下，该项检查仍有局限性，存在漏诊和误诊的风险。尽管存在风险但仍有必要进行此项检查。受检方需要提供真实有效的病史资料，并理解医务人员将严格按照医疗技术规范进行操作，尽最大努力减少上述风险的发生。我理解根据我个人的妊娠情况，除上述风险以外，还可能出现其他特殊并发症或风险。【孕妇知情选择】我的医生已经告知我将要进行的检测项目的内涵、此次检查可能存在的局限性和风险、以及相关检查的必要性。我已如实向医生告知我的所有妊娠情况，如有隐瞒，一切后果自负我同意□不同意□我的医生为我进行地中海贫血基因产前诊断。我理解我的检查项目，我并未得到检测百分之百成功的许诺。我授权医生对检测涉及的样本进行处置，包括进一步的送检多种检测方法、科学研究等，以帮助医师进一步多平台进行诊断，孕妇签名：日期：年月日如果孕妇无法签署知情同意书，请其授权的亲属或法定监护人在此签名：孕妇授权亲属或法定监护人签名与孕妇关系日期：年月日地址：电话：【医生陈述】我已经告知孕妇将要进行的检查方式、此次检查中及检查后可能发生的并发症和风险、可能存在的其他检查方法并且解答了孕妇关于此次检查的相关问题。(资料性)胎儿信息：母亲信息：基因诊断结果：检测机构：检测日期：联系地址：父亲信息：筛查结果：Hbg/LMCVfLMCHpHbA2%HbF%基因诊断结果：检测机构：联系电话：联系地址：其他说明：补助对象：□是□否送检医师：送检机构：其他说明：三联单编号NO检测日期：送检科室：备注：如曾经在我院做过检测的，请提供就诊卡号。没有复查情况时，一般培养的羊水标本需20个工作日，不培养者需10个工作日可得结果。XX医院XX科报告单β-地中海贫血基因分析(点突变)检测项目检测方法检测结果α-地中海贫血基因分析(缺失型)α-地中海贫血基因分析(点突变)β-地中海贫血基因分析(点突变)检验内容：α-地贫X种缺失型(SEA,-THAl,-α42,-α³7……)和X种点突变位点(HbCS,Hbβ-地贫XX种点突变位点(-32M,-30M,-29M,-28M,CD14-15M,CD17M,CD26M即βEM,CD27CDCDCDCDCAPIVSIVSIVS检测，尚未包括所有缺失型及突变位点。检验建议：报告日期：注；本检测结果仅对该标本负责。(规范性)控制限一般采用标准差(s)的倍数来表达，如果用代表均值，则： 以Y±3s作为失控限——1次出现3s; 车续2次超过2s; 连续7次在均值的一侧。然后才能进行临床样本的检测和结果报告。《地中海贫血筛查与诊断技术规范》(征求意见稿)编制说明一、工作简况(一)任务来源根据《广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2014年第二批定项目计划的通知》(桂市监函〔2014〕2199号)文件精神，批准《地中海贫血筛查与诊断技术规范》地方标准的制定，本标准由广西壮族自治区卫生健康委员会提出，(二)起草单位(三)主要起草人项目负责人：黎君君，男，院长/主任医师，全面负责标准编写，负责标准工作的组织管理和各阶段全文的审定。主要起草人：覃婷，女，主任/主任医师，负责标准编制的协调、组织文稿的整理与审定，完成标准的临床部分。的起草、编写、整理和审定，完成标准的的血红蛋白组分分姓名性别职务/职称工作单位任务分工周向阳男副主任技师广西壮族自治区人民医院完成标准的质量控制部分银联立男副主任技师广西壮族自治区人民医院完成标准的血细胞分析部分梁亮男副主任技师广西壮族自治区人民医院参与起草实验部分李颖女主治医师广西壮族自治区人民医院参与起草临床部分、文稿的整理郑丽红女检验技师广西壮族自治区人民医院参与起草、资料查询与收集、文稿编排与整理、讨论记录(一)国家及地区法律、法规及技术政策相协调的需求《广西壮族自治区地中海贫血筛查实验室建设标准(试行)》、《广西地中海贫血防治三年行动计划(2019—2021年)》等法律和法规性文件，依法指导和规范地中海贫血筛查和基因诊断实验室检测和质量控制等各个环节，需要配套相应的技术规范。因此制定本技术规范是落实国家、地区法律法规和(二)地区出生缺陷防控的急迫性地中海贫血是一组严重威胁人类健康的致死、致残性遗传病，根据文献报道，广西是地中海贫血基因突变携带率最高的地区。重型和部分中间型β地贫患儿需终身接受输血和排铁治疗，是我区因病致贫、因病返贫的重要因素，是影响社会发展和民生福祉改善的重大公共卫生问题。防止严重类型地贫胎儿出生，提高广西出生人口素质，是广西出生缺(三)行业发展带来的问题地中海贫血筛查与基因诊断，是防止严重类型地中海贫血患儿出生的唯一有效措施。但是，广西开展地中海贫血筛查与基因诊断的实验室存在质量控制不严格、技术流程不(一)成立标准编制工作组了标准编制工作组，制定了标准编写方案，明确任务职责，西壮族自治区人民医院相关人员组成的标准编制工作组负收集和整理工作，查阅前人对地中海贫血的研究情科学界对地中海贫血的研究进展，以及国内地中海贫血防控断技术规范》标准发布后，组织相关部门、科研院校、协会学会等，开展标准宣贯培训会，对标准进行研(二)收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内相关文献资料。主要有：《全国临床检验操作规程》第4版北京：人民卫生出《医疗机构临床基因扩增管理办法》(卫办医政发〔2010〕194号)《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》(卫办医政发〔2010〕194号)《地中海贫血防控试点项目技术服务规范》(国卫办妇幼函〔2015〕873号)《广西婚前保健和孕期保健地中海贫血筛查与诊断技术规范(试行)》(桂卫妇幼〔2013〕7号)《广西孕产期保健工作规范》(桂卫妇社〔2011〕29号)《广西严重类型地中海贫血胎儿零出生计划实施方案》(桂政办发〔2018〕76号)《全国临床检验操作规程》第4版北京：人民卫生出CNAS-GL037:2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》中华人民共和国母婴保健法(2017版)(三)研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经研究确定，标准的主体内容确定为术语和定义、缩略语、地中海贫血筛查技术、地中海贫血基因诊断技术、实验室质量控(四)调研，形成草案、征求意见稿本项目依托单位广西壮族自治区人民医院是自治区卫区医疗、科研、教学、预防、保健、康复和健康管理等工作心”;2018年获全国出生缺陷防治人才培训项目培训协同单位；2019年牵头胜利完成了“遗传病防治中国行-广西站”活动；2021年6月成为自治区罕见型地贫检测机构。广西临累了丰富的临床经验。先后世界上首次发现33例基因新突文超过50篇，获得1项广西卫生适宜技术推广奖三等奖。2014年获得立项批准后，项目组积极开展调研工作。后目人员。2021年，标准编制工作组重新启动工作。在2月~2022年6月～2022年8月，标准编制工作小组展开讨扩增管理办法》《广西婚前保健和孕期保健地中海贫血筛查与诊断技术规范(试行)》等政策文件的深入解读，并对区据反馈意见及前期研究成果，标准编制工作组多次组织召开最终形成广西地方标准《地中海贫血筛查与诊断技术规范》(征求意见稿)及其编制说明。四、制定(修订)标准的原则和依据，与现行法律、法规、标准的关系(必要项)(一)实用性原则本标准是在充分收集相关资料和文献，分析广西区内地贫血筛查及诊断技术和有关规定的基础上，结合标准编制单位经验总结起草的。本标准从全面性、简便性等方面综合考(二)协调性原则本标准编写过程中尊重知识产权，同时注意与地中海贫律法规、标准协调不一致情况，有力支撑有关法律法规及标(三)规范性原则本标准严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。(四)前瞻性原则本标准在充分考虑当前广西区内地中海贫血防控情况，兼顾未来广西区内地中海贫血防控水平提升和管理需要，标准条款规定的主要技术内容尽可能避免起点要求过低或过高，在标准中还体现了个别