(5.4.1)-嗜血杆菌及检验

微生物检验其他革兰阴性杆菌及检验第一节嗜血杆菌属

1.知识目标：掌握常见嗜血杆菌的主要生物学性状、微生物学检验法；熟悉常见嗜血杆菌的临床意义。2.能力目标：能进行常见嗜血杆菌的微生物检验。3.素质目标：具有严肃认真、一丝不苟的工作作风。★任务目标

一、分类嗜血杆菌属（Haemophilus）隶属于巴斯德菌科，嗜血杆菌属流感嗜血杆菌（H.influenzae）副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae）溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus)副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus）克雷嗜血杆菌（H.ducreyi）埃及嗜血杆菌（H.aegyptius）嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus）副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus)迟缓嗜血杆菌（H.segnis）二、生物学特性

革兰阴性小杆菌，多形性无鞭毛，有毒株有荚膜生长需要X和V因子（新鲜血液）

巧克力色平板上生长较佳菌落：灰白色，圆形，光滑抵抗力：弱根据荚膜抗原分ABCDEF六型，B型毒力最强血红素辅酶Ⅰ或Ⅱ流感嗜血杆菌ATCC49247副溶血嗜血杆菌痰涂片（白细胞吞噬），流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌临床分离株（光滑型），巧克力琼脂，24h

副流感嗜血杆菌光滑型，巧克力琼脂，48h流感嗜血杆菌-卫星现象

（satellitephenomenon）

当与金黄色葡萄球菌在血平板上共同孵育时，由于后者能合成较多的V因子，在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌的菌落较大，离金黄色葡萄球菌菌落越远的越小。流感嗜血杆菌-卫星现象咽拭纸培养48h，未加万古霉素（生长不良）咽拭纸培养48h，加万古霉素（生长良好）点种金黄色葡萄球菌ATCC25923,48h点种表皮葡萄球菌,48h

继发性（内源性）感染慢性支气管炎，中耳炎，鼻窦炎等三、所致疾病原发性（外源性）感染急性化脓性感染：脑膜炎，鼻咽炎等继发性（内源性）感染

流行性感冒麻疹百日咳结核病菌种常栖部位及所致疾病流感嗜血杆菌

原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。副流感嗜血杆菌口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。溶血嗜血杆菌鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。副溶血嗜血杆菌口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎杜克雷嗜血杆菌软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。埃及嗜血杆菌急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热嗜沫嗜血杆菌咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿副嗜沫嗜血杆菌咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟炎、、脑脓肿、脑膜炎。几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病四、诊断与防治痰液脑脊液鼻咽分泌物血液和脓液等脓汁、脑脊液标本直接涂片结合临床症状初步诊断分离培养镜检诊断可选用广谱抗生素。治疗预防荚膜多糖菌苗DNA探针杂交（快速检测）血液脑脊液脓汁痰

分离培养(巧克力琼脂)

涂片、镜检荚膜肿胀试验（初步报告）标记抗体检测抗原涂片、荚膜肿胀试验（初步报告）菌落形态、卫星现象、血清学现象报告结果

嗜血杆菌的检验程序增菌培养标本痰液、脑脊液、鼻咽分泌物、血液和脓液等标本采集原则在疾病早期采取标本，立即送检。在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。对心内膜炎、患者取血液标本。痰液标本，应洗涤、消化，再接种。

直接涂片脓汁、脑脊液，结合临床症状初步诊断

分离培养需要V、X因子，血琼脂平板、巧克力琼脂平板鉴定培养需要X、V因子；菌落形态；卫星现象治疗可选用广谱抗生素预防荚膜多糖菌苗四、诊断与防治分离培养培养条件：需要X、V因子营养要求高生长温度为35℃血琼脂平板培养基巧克力琼脂培养基分离培养菌落特征：巧克力琼脂培养基小、无色透明菌落流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落鉴定

培养需要X、V因子菌落形态卫星现象卫星现象嗜血杆菌因子β溶血发酵XV葡萄糖蔗糖乳糖甘露醇木糖触酶CO2生长ONPG流感嗜血杆菌++-+---D+--副流感嗜血杆菌-+-++-+-DDD溶血嗜血杆菌++++---D+--副溶血嗜血杆菌-++++---+--注：D为不同结果嗜血杆菌属中种的特征第二节鲍特菌属

百日咳鲍特菌1.知识目标：熟悉鲍特菌属的主要生物学性状、微生物学检验法、临床意义。2.能力目标：能进行常见鲍特菌的微生物检验。3.素质目标：具有严肃认真、一丝不苟的工作作风★任务目标2023-02-2630一、生物学特性革兰阴性小杆菌，无鞭毛，有荚膜，菌毛营养要求很高鲍-金培养基：马铃薯、甘油、血液菌落：细小、光滑、隆起、珠光色泽、溶血环Ⅰ相菌→Ⅱ、Ⅲ相→Ⅳ相2023-02-2631一、生物学特性百日咳鲍特菌，CCBA二、临床意义是百日咳的致病菌一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人传播途径：飞沫传染源：病人潜伏期：1~2周致病因素：百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素(FHA)、腺嘌呤环酶毒素(ACT)、气管细胞毒素、皮肤坏死毒素临床表现：1.卡他期：1~2周，明显卡他症状，传染性强，感染标本培养阳性率高2.痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘稠的痰液或呕吐为止3.恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止二、临床意义三、诊断与防治

分离培养鼻咽拭或咳碟法接种鲍－金培养基预防“白百破”（DPT）三联疫苗主动免疫首选红霉素治疗死疫苗类毒素三、诊断与防治

百日咳鲍特菌微生物学检验分离培养与鉴定在CCBA琼脂平板上形成光滑、有光泽、水银样菌落标本直接检测抗原抗体检测采用ELISA方法，抗体检测IgM及IgA，其中IgA在早期出现，不受接种疫苗干扰，有利于早期检出三、诊断与防治

百日咳鲍特菌药物敏感实验及结果解释本菌的感染以预防接种为主，进行控制临床感染首选红霉素，其次选氨曲南及磺胺增效剂对青霉素不敏感，大多数菌株对四环素耐药第三节军团菌属

嗜肺军团菌1976年在美国费城举行的退伍军人大会上爆发了一场严重的肺炎流行病,此后人们对该病进行了大量的研究,发现该病是由退伍军人病杆菌(Legionnaires’Diseasebacterium,LDB)引起的传染病。根据美国疾病控制中心研究,军团菌分为41种菌型,63个血清型。军团菌病约90%的是由嗜肺军团菌引起1.知识目标：熟悉军团菌的主要生物学性状；了解军团菌的微生物学检验法、临床意义。2.能力目标：能进行常见苛养菌的微生物检验。3.素质目标：具有严肃认真、一丝不苟的工作作风。★任务目标革兰阴性杆菌，常规染色不易着色用Dieterle镀银法染成黑褐色

Giemsa法染色染成红色端生或侧生鞭毛，有微荚膜需氧菌化学消毒剂敏感一、生物学特性一、生物学特性嗜肺军团菌菌落在BCYEα琼脂上，紫外线照射照射下发出黄色荧光二、致病物质微荚膜菌毛毒素多种酶三、所致疾病军团病

主要通过呼吸道吸入带菌飞沫。中央空调冷却塔用水污染军团菌而导致感染。临床类型：

流感样型（轻症型）肺炎型（重症型）肺外感染四、免疫性嗜肺军团菌为胞内寄生菌细胞免疫在抗感染中起主要作用五、诊断与防治标本：可采集下呼吸道分泌物、胸水、活检肺组织及血液等检查：直接法荧光抗体染色镜检活检组织标本

Dieterle镀银法染色分离培养血清学检查预防：加强水源管理治疗：首选红霉素直接法荧光抗体染色第四节

布鲁菌属1.知识目标：熟悉布鲁菌属的主要生物学性状、布鲁菌属的微生物学检验法、临床意义。2.能力目标：能进行常见布鲁菌的微生物检验。3.素质目标：具有严肃认真、一丝不苟的工作作风。★任务目标一、生物学性状形态：本菌呈小球杆状，毒力菌株有菲薄的微荚膜，革兰氏染色阴性。培养：严格需氧菌。牛布氏杆菌在初次分离时，需在5～10%CO2环境中才能生长，最适温度37℃，最适的pH6.6～7.1,营养要求高，实验室常用肝浸液培养基或改良厚氏培养基。此菌生缓慢，培养48小时后才出现透明的小菌落，鸡胚培养也能生长。一、生物学性状马耳他布鲁菌纯培养菌体形态一、生物学性状马耳他布鲁菌纯培养菌体形态SBA，5d一、生物学性状马耳他布鲁菌纯培养菌体形态SBA，10d一、生物学性状马耳他布鲁菌在含树脂血培养瓶的镜下形态（革兰染色）一、生物学性状马耳他布鲁菌在含树脂血培养瓶的镜下形态（瑞士染色）二、致病性和免疫性本菌侵入人体后，经淋巴管至局部淋巴结，待繁殖到一定数量后，突破淋巴结屏障而进入血流，反复出现菌血症。由于内毒素的作用，病人出现发热、无力等中毒症状，以后本菌随血液侵入脾、肝、骨髓等细胞内寄生，血流中细菌逐步消失，体温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时，再次进入血流又出现菌血症，体温再次上升，反复呈波浪热型。本菌多为细胞内寄生，难于彻底治疗。病后可生产免疫力，不同菌种和生物型之间有交叉免疫。布氏杆菌多为细胞内寄生，抗体不易直接发挥作用。二、致病性和免疫性布鲁菌属临床意义传染源：病兽，以牛、羊、猪多见传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的皮肤、呼吸道、消化道进入人体易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加工、屠宰的工人发病率较高潜伏期：5~21日，亦可高达数月布鲁菌属临床表现症状：长期发热，多汗，关节疼痛及全身乏力，疼痛病理：菌在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖，并多次入血引起菌血症及网状内皮系统上

皮样增生，形成肉芽肿二、致病性和免疫性布鲁菌属致病性及免疫性不产生外毒素，有较强的内毒素可产生透明质酸酶和过氧化氢酶侵袭力强迟发型超敏反应本菌多为细胞内寄生，难于彻底治疗。病后可生产免疫力，不同菌种和生物型之间有交叉免疫。

布氏杆菌多为细胞内寄生，抗体不易直接发挥作用。二、微生物学检验分离培养与鉴定标本直接检验：凝集反应、PCR检测、抗体检测皮肤试验：布鲁菌素试验二、微生物学检验布鲁菌属防治原则严格管理病畜，消灭动物感染预防接种家畜易感人群急性期抗生素治疗四环素、青霉素人工培养需要加入X因子、V因子的细菌是

流感嗜血杆菌铜绿假单胞菌布鲁氏菌百日咳鲍特菌ABCD提交单选题关于军团菌错误的是革兰阴性，但不易着色营养要求高触媒和氧化酶阳性脲酶阳性ABCD提交单选题属微需氧菌E培养分离军团菌可用血平板罗氏培养基碱性平板沙保培养基ABCD提交单选题含活性炭、酵母浸膏琼脂（BCYE）E对军团杆菌的描述中，错误的是广泛存在于各种水环境中

可寄生于单核/巨噬细胞内对外界抵抗力差是引起医源性肺炎的常见病原ABCD提交单选题治疗首选红霉素E百日咳鲍特均的分离培养应该使用鲍-金（B-G）培养基巧克力培养基伊红-美兰培养基罗氏培养基ABCD提交单选题亚碲酸钾培养基E百日咳鲍特菌阳性生化反应是乳糖发酵液化明胶H2S试验吲哚试验ABCD提交单选题氧化酶试验E食入未经消毒的羊奶，最有可能感染的疾病是布氏菌病结核病伤寒破伤风ABCD提交单选题肉毒中毒E布氏菌分离阳性率最高的标本是血液粪便尿液痰ABCD提交单选题骨髓E关于布鲁菌属的生物学性状，下列哪项是错误的：革兰阴性球杆菌有鞭毛不形成芽胞可形成荚膜ABCD提交单选题专性需氧E“卫星现象”出现的原因是由于金葡菌能合成：生长因子V因子X因子高铁血红素ABCD提交单选题维生素B1E嗜肺军团菌的特性是：G-杆菌，无鞭毛最适pH7.2～7.6最适生长温度为37℃需氧菌，在2%～5%CO2环境中生长良好ABCD提交单选题营养要求高，需动物血清E关于