生物学指标的测定

生物学指标的测定第一页，共十五页，2022年，8月28日细菌总数的测定指1ml水（或1g样品），在普通琼脂培养基中经37℃、24h培养后所生长的细菌菌群总数。评定水体污染程度指标之一。生活饮用水卫生标准（GB5749-2006）规定每毫升水的细菌总数不得超过100个。水中通常存在的细菌大致可分为三类：①天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌，一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。荧光假单胞杆菌第二页，共十五页，2022年，8月28日细菌分类②肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌（伤寒和副伤寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。③土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。大肠杆菌铁细菌第三页，共十五页，2022年，8月28日平板计数法国标规定的方法为平板计数法检验方法：在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。精度高，耗时长。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、SimplateTM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法。第四页，共十五页，2022年，8月28日平板计数法第五页，共十五页，2022年，8月28日总大肠菌群的测定总大肠菌群：需氧及兼性厌氧的在35℃、48h之内生长时能使乳糖发酵、产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌，以每升水样中所含有的大肠菌群的数目表示。总大肠菌群既包括存在于人及动物粪便的大肠菌群，也包括存在于其他环境中的大肠菌群。包括:大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌生活饮用水卫生标准（GB5749-2006）规定每100mL水不得检出总大肠菌群。第六页，共十五页，2022年，8月28日革兰氏染色法细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。革兰氏染色法能够把细菌分为两大类，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。染色的差异主要由阴性与阳性细菌细胞壁的差异引起。第七页，共十五页，2022年，8月28日革兰氏染色法先用龙胆紫（亦称结晶紫）来染细菌，所有细菌都染成了紫色涂以革兰氏碘液，来加强染料与菌体的结合用95%的酒精来脱色20～30秒钟，有些细菌不被脱色，仍保留紫色，有些细菌被脱色变成无色用番红或沙黄复染1分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌仍然保持紫色，不再着色凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌（G+菌）；染成红色的称为革兰氏阴性菌（G-菌）。常见的革兰氏阳性菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；常见的革兰氏阴性菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。第八页，共十五页，2022年，8月28日多管发酵法配制培养基在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。初步发酵试验水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。第九页，共十五页，2022年，8月28日多管发酵法复发酵试验微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面）。接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。培养后立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。第十页，共十五页，2022年，8月28日多管发酵法结果计算第十一页，共十五页，2022年，8月28日滤膜法滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上，37℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有大肠菌群数。第十二页，共十五页，2022年，8月28日滤膜法将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。也可用121℃灭菌10min，10min一到，迅速将蒸汽放出，这样可以尽量减少滤膜上凝集的水分。滤器、接液瓶和垫圈分别用纸包好，在使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30min。滤器灭菌也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。以无菌操作把滤器装置装好。过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器。将适量的水样注入滤器中，加盖，开动真空泵即可抽滤除菌。第十三页，共十五页，2022年，8月28日滤膜法由滤膜上生长的大肠菌群菌落综述和所取过滤水样量，按下式计算1L水中总大肠菌群数：

第十四页，共十五页，2022年，8月28日其他细菌的测定生活饮用水卫生标准（GB5749-2006）规定每100mL水不得检出总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌。粪大肠菌群多