GB乳酸菌检验演示文稿

GB乳酸菌检验(Yan)演示文稿第一页，共二十九页。定(Ding)义

乳酸菌是指一群通过发酵糖类产生大量乳酸的细菌通称。乳杆菌属双歧杆菌属链球菌属的嗜热链球菌第二页，共二十九页。本标准与GB/T4789.35-2008相比，主要变化如下：——修改了乳酸(Suan)菌总数、乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌的计数方法。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB4789.35-1996、GB/T4789.35-2003、GB/T4789.35-2008。第三页，共二十九页。GB/T4789.35－2003乳酸菌饮(Yin)料中乳酸菌检验流程第四页，共二十九页。SN/T1941.1-2007:检验方法(Fa)有三部分：第1部分：分离与计数方法；第2部分：PetrifilmTM测试片法；第3部分：乳杆菌的PCR法第五页，共二十九页。SN标(Biao)准第六页，共二十九页。GB/T4789.35－2008

乳酸菌饮(Yin)料中乳酸菌检验修订本标准与GB/T4789.35－2003相比主要修改如下：——将选择性分离培养基由改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）改为MRS培养基；——增加API50CH诊断试剂条；——乳酸菌计数由倾注法改为涂布法。第七页，共二十九页。

2010版(Ban)第八页，共二十九页。样品(Pin)制备7.1.3固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。7.1.4液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。第九页，共二十九页。乳酸(Suan)菌计数乳酸菌总数根据待检样品活菌总数的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板，使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。第十页，共二十九页。乳酸菌(Jun)计数双歧杆菌计数根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS琼脂平板，使用灭菌L形棒进行表面涂布，每个稀释度作两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。第十一页，共二十九页。乳酸(Suan)菌计数嗜热链球菌计数根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MC琼脂平板，使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃，需氧培养48h±2h后计数。嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的红色菌落，直径2mm±1mm，菌落背面为粉红色。第十二页，共二十九页。乳酸菌计(Ji)数乳杆菌计数乳酸菌总数结果减去

双歧杆菌与

嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。第十三页，共二十九页。报(Bao)告（GB/T4789.35-2008）根据菌落计数结果出具检测报告。最终确定的乳酸菌菌落在30～300之间的平板计数，再乘以相应的稀释倍数，修约保留两位有效数字，之后的数字，采用10的指数表示。参照GB/T4789.2规定。每克（或毫升）食品中所含有的乳酸菌数以CFU/g（mL）表示。

第十四页，共二十九页。报(Bao)告（GB4789.35-2010）7.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。7.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。7.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。第十五页，共二十九页。结果(Guo)的表述7.4.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。7.4.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：第十六页，共二十九页。第十七页，共二十九页。7.4.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.4.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.4.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。7.4.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部(Bu)分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。第十八页，共二十九页。菌落(Luo)数的报告7.5.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7.5.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。7.5.3称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。第十九页，共二十九页。第二十页，共二十九页。第二十一页，共二十九页。第二十二页，共二十九页。3Mpetrifilm第二十三页，共二十九页。乳酸菌(Jun)的鉴定纯培养挑取3个或以上的可疑菌落，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板，乳杆菌属接种于MRS琼脂平板，兼性厌氧，置36℃±1℃恒温箱内培养48h±2h。双歧杆菌属鉴定按照GB/T4789.34。第二十四页，共二十九页。涂片镜(Jing)检乳杆菌属细胞形态多样，从长的杆状和细长杆状到弯曲杆状及短杆状，一般形成链。通常不运动。无芽胞，革兰氏染色阳性。嗜热链球菌形态为球形或球杆状，直径为0.5μm～2.0μm，细胞成对或成链排列，无芽