实验一 细菌形态学检查

实验一细菌形态学检查第一页，共二十一页，2022年，8月28日生物安全1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口罩。2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在指定的操作区。3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师及时适当处理。6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后，关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。第二页，共二十一页，2022年，8月28日【实验目的】1．

掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注意事项。2．

掌握显微镜油镜的使用和保护。3．

熟悉显微镜的结构和各部分的功能。4．

不染色和各种染色标本的显微镜观察。5．

细菌特殊结构的染色与观察。

第三页，共二十一页，2022年，8月28日【实验内容】光学显微镜的使用不染色标本的检查革兰氏染色和细菌基本形态观察细菌特殊结构染色和观察第四页，共二十一页，2022年，8月28日形态学检查的意义细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群是决定采用何种生化反应的重要提示初步诊断结核涂片淋球菌涂片第五页，共二十一页，2022年，8月28日显微镜的使用先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜粗调+微调香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物像清晰镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）第六页，共二十一页，2022年，8月28日形态学检查的方法不染色标本检查法染色标本检查法特殊染色检查法第七页，共二十一页，2022年，8月28日不染色标本检查法1压片法（压滴法）

1.用接种环分别取细菌2~3环，置于洁净载玻片中央

2.轻轻覆上盖玻片

3.油镜下观察第八页，共二十一页，2022年，8月28日不染色标本检查法2悬滴法第九页，共二十一页，2022年，8月28日染色标本检查法染色基本步骤：涂片：干燥：室温自然干燥固定：杀死细菌;使菌体与玻片粘附;菌体蛋白变性易着色染色：革兰染色镜检第十页，共二十一页，2022年，8月28日革兰染色-基本步骤

a)初染：结晶紫

1min；b)媒染：碘液

1min；c)脱色：95%乙醇

至无紫色脱落为止；d)复染：石碳酸复红

30s，自然干燥后镜检第十一页，共二十一页，2022年，8月28日革兰染色-结果与注意事项结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌注意事项：涂片不宜过厚固定不宜过热脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌革兰阳性菌脱色过度：革兰阳性菌革兰阴性菌18~24h菌龄最佳已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照第十二页，共二十一页，2022年，8月28日特殊染色（示教）鞭毛染色芽胞染色荚膜染色第十三页，共二十一页，2022年，8月28日鞭毛染色-套组内容及规格内容规格主要成分复红酒精溶液(A液)20ml品红鞣酸水溶液(B液)20ml鞣酸钾明矾溶液(C液)20ml钾明矾工作液过滤瓶第十四页，共二十一页，2022年，8月28日鞭毛染色-工作液配制根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工作液过滤瓶内，混合均匀静置2h后方可使用工作液2~8℃

约可保存2~3天第十五页，共二十一页，2022年，8月28日鞭毛染色-玻片的处理鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关系取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使用第十六页，共二十一页，2022年，8月28日鞭毛染色-涂片的制备将菌种接种在肉汤管中，经24h37℃孵育后离心，倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端，室温下自然干燥第十七页，共二十一页，2022年，8月28日鞭毛染色-操作方法滴加工作液于玻片上，染色10~15min将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检结果：菌体及鞭毛均为红色第十八页，共二十一页，2022年，8月28日芽胞染色-染液规格石碳酸复红液20ml碱性品红脱色液20ml乙醇碱性美蓝液20ml亚甲蓝第十九页，共二十一页，2022年，8月28日芽胞染色-染色步骤与方法将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒蒸气约5min，冷后水洗，并用脱色液脱色2min，水洗碱性美蓝复染30s，水洗，干后用油镜镜检结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色第二十