实验四食品中大肠菌群的测定

实验四食品中大肠菌群的测定第一页，共十六页，2022年，8月28日一、实验目的掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判别食品的卫生质量了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义第二页，共十六页，2022年，8月28日二、实验原理大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。第三页，共十六页，2022年，8月28日最近似数测定法（MPN）是指对未知样品做连续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数。食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。第四页，共十六页，2022年，8月28日三、实验器材（一）培养基月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基（二）实验材料市售饮料（三）其他三角瓶，试管，培养皿，移液管（四）仪器超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅第五页，共十六页，2022年，8月28日四、实验准备（一）配制培养基和试剂（以中央台为单位）

1、配制生理盐水：1000mL

NaCl8.5g水1000mL

分装：3个三角瓶（含玻珠）中，225mL/个9支试管，3支/组，9mL/支

灭菌：121~126℃灭菌20min第六页，共十六页，2022年，8月28日2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基：300mL分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个包扎（3支一捆），112~115℃灭菌30min胰蛋白胨

6g

NaCl

1.5g乳糖

1.5gK2HPO40.825gKH2PO40.825g

十二烷基硫酸钠

0.03g水

300mLpH6.8第七页，共十六页，2022年，8月28日3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基：150mL分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个包扎，112~115℃灭菌30min蛋白胨

1.5g乳糖

1.5g牛胆粉溶液30mL

0.1%煌绿水溶液

2mL

水

150mLpH7.2牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆粉溶液30mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补足到150ml，用纱布过滤后，再分装到试管中。第八页，共十六页，2022年，8月28日（二）其它器具（每个组准备）移液管10mL1支/组1mL

10支/组第九页，共十六页，2022年，8月28日五、实验步骤1、样品处理：

以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4第十页，共十六页，2022年，8月28日3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到LST发酵液试管中，每个稀释度做3个平行（共9管）。4、37℃培养48h5、观察LST管中小倒管里是否有气泡。如有气泡，则继续按照下述要求实验；如无气泡，则是大肠阴性管（-）第十一页，共十六页，2022年，8月28日6、如LST小倒管中有气泡，则按照无菌操作要求，用接种环将产气LST发酵液接种到BGLB试管中，一只产气LST发酵液对应一只BGLB试管。7、37℃培养48h8、观察BGLB小倒管中是否有气泡，如有气泡，则记为大肠阳性管（+）；如无气泡，则记为大肠阴性管（-）。第十二页，共十六页，2022年，8月28日大肠菌群计数检验流程0将产气的试管内样品接种到BGLB肉汤LST不产气（-）小导管里无气泡LST产气（+）第十三页，共十六页，2022年，8月28日9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表，报告样品中大肠菌群MPN值。阳性管数MPN95%可信限0.100.010.001下限上限000<3.0-9.50013.00.159.61003.60.1718333>1100420-第十四页，共十六页，2022年，8月28日五、实验结果与分析经查MPN表，样品中大肠菌群数为

MPN/g（mL）阳性管数0.010.0010.0001LST发酵管BGLB证实管分析第十五页，共十六页，202