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微丝的显示考马斯亮蓝法第一页，共十二页，2022年，8月28日目的要求基本原理实验用品方法与步骤实验结果实验报告第二页，共十二页，2022年，8月28日目的要求掌握考马斯亮蓝的染色方法；了解细胞内微丝的分布。第三页，共十二页，2022年，8月28日实验原理细胞质中错综复杂的纤维网络结构称为细胞骨架，主要包括微管、微丝和中间纤维。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白染料，它可以使多种蛋白质着色，由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维。张力纤维在体外培养细胞中普遍存在，与细胞的附着、维持扁平铺展的形态有关。第四页，共十二页，2022年，8月28日实验用品1．器材：烘箱、青霉素小瓶、培养细胞飞片、水浴锅、载玻片、盖玻片。2．试剂:0.01mol/LPBS；M-缓冲液；1%TritonX-100/M缓冲液；0.2%考马斯亮蓝染液；3%戊二醛-PBS溶液；3．实验材料：洋葱内表皮，培养细胞飞片第五页，共十二页，2022年，8月28日方法与步骤利用培养细胞为材料进行骨架显示时,先从培养箱中取出培养细胞飞片,弃去培养液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-缓冲液处理15分钟;第六页，共十二页，2022年，8月28日M缓冲液轻轻洗3次,然后加入3%戊二醛-PBS液固定15分钟，PBS冲洗数次，0.2%考马斯亮蓝R250染色30分钟，水洗，镜检。第七页，共十二页，2022年，8月28日以洋葱为材料进行细胞骨架显示时，先撕取一片洋葱内表皮，置于小平皿中进行操作，其余步骤相同。第八页，共十二页，2022年，8月28日注意事项PBS冲洗应适度，否则洋葱表皮细胞吸收大量水分易使液泡过分涨大，影响实验结果的观察。实验操作中，Triton的抽提是最关键的步骤，应注意抽提适度。第九页，共十二页，2022年，8月28日实验结果洋葱内表皮中的微丝第十页，共十二页，2022年，8月28日培养细胞中的微丝第十一页，共十二页，20

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