探讨微小核糖核酸

探讨微小核糖核酸-455在压力超负荷诱导的心肌肥厚小鼠模型中的作用机制吴春涛;李拥军;刘苏;王智勇【摘要】Objective:ToinvestigatetheroleofmiR-455incardiachypertrophywithitspotentialcellularandmolecularmechanisminmice.Methods:Themicemodelofcardiachypertrophywasestablishedbytransverseaortaconstriction(TAC),and18malekunmingTACmicewererandomlydividedinto3groups:①TAC+miR-455group,②TAC+GFP(greenlfuorescenceprotein) groupand③Shamgroup(shamoperation+GFP).n=6ineachgroupandallanimalsweretreatedfor2weeks.Thehemodynamicandechocardiographicindexeswereexamined,histo-pathologicalchangesofmyocardialtissuewereobservedbyHEandMassonstaining.ThehypertrophicandifbrosisgeneexpressionsweremeasuredbyRT-PCR,theapoptosisproteinlevelwasdetectedbyWesternblotanalysis.TheexpressionsofmiR-455targetinggeneandproteinwerealsodetermined.Results:Upon2weeksmodeling,comparedwithShamgroup,TAC+GFPgrouphadincreasedratioofheartweight/bodyweight(9.78±0.20)mg/gvs(8.25±0.22)mg/g,P<0.01,increasedleftventriculardiastolic(LVD)wallthicknesses(1.782±0.058)mmvs(1.457±0.050)mm,P<0.05,decreasedLVDdiameter(3.027±0.052)mmvs(3.142±0.050)mm,P<0.05,increasedLVEF(84.167±4.167)%vs(77.000±3.347)%,P<0.05;increasedgeneexpressionsofcardiachypertrophyandifbrosis,allP<0.05,decreasedanti-apoptosisproteinandincreasedpromotingapoptosisprotein,allP<0.05.ComparedwithTAC+GFPgroup,TAC+miR-455grouppresentedincreasedratioofheartweight/bodyweight(12.04±0.11)mg/gvs(9.78±0.20)mg/g,P<0.01,increasedLVDwallthicknesses(1.908±0.062)mmvs(1.782±0.058)mm,P<0.01,decreasedLVDdiameter(2.893±0.069)mmvs(3.027±0.052)mm,P<0.01,whileLVEFwassimilarbetween2groups,P>0.05;increasedgeneexpressionofcardiachypertrophy,P<0.05,whilegeneexpressionofcardiacifbrosiswassimilarbetween2groups,P>0.05;theanti-apoptosisproteinandpromotingapoptosisproteinexpressionsweresimilarbetween2groups.ComparedwithShamgroup,TAC+GFPgrouphadincreasedexpressionsofcalreticulin(CALR)andglucose-regulatedprotein78(GRP78),allP<0.01.ComparedwithTAC+GFPgroup,TAC+miR-455grouphaddecreasedmRNAandproteinexpressionsofCALR,bothP<0.01,whileGRP78proteinexpressionwassimilarbetween2groups,P>0.05.Conclusion:miR-455maypromotecardiachypertrophyinducedbyshorttermoverloadpressureviatargetingCALRinexperimentalmice.%目的：通过结扎小鼠主动脉弓导致主动脉缩窄(TAC)两周后建立心肌肥厚的模型，旨在探讨微小核糖核酸-455(miR-455)在心肌肥厚中细胞与分子学机制。方法：选用18只昆明种小鼠，随机分为TAC+miR-455组(n=6,尾静脉注射包被miR-455的腺病毒)、TAC+绿色荧光蛋白(GFP)组(n=6，TAC+GFP组，尾静脉注射包被GFP的腺病毒)和假手术组(n=6，尾静脉注射包被GFP的腺病毒)。术后两周测量小鼠血流动力学及超声心动图指标；对心肌组织进行苏木素-伊红(HE)染色和马松(MASSON)染色观察心肌组织病理学变化；应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测心肌肥厚基因与纤维化基因的表达；免疫蛋白印迹法(Westernblot)分析凋亡蛋白；qRT-PCR与Westernblot分析miR-455的靶基因和蛋白。结果：造模两周时，与假手术组比较，TAC+GFP组小鼠心重/体重值增加［(9.78±0.20)mg/gvs(8.25±0.22)mg/g，P<0.01］，左心室舒张期前壁厚度明显增加［(1.782±0.058)mmvs(1.457±0.050)mm，Pv0.05］，左心室舒张期内径变小［(3.027±0.052)mmvs(3.142±0.050)mm,Pv0.05］，左心室射血分数增加［(84.167±4.167)%vs(77.000±3.347)%,P<0.05］;心肌肥厚基因(心房钠尿因子、骨骼肌肌动蛋白和P肌球蛋白重链)和心肌纤维化基因(转化生长因子P1和结缔组织生长因子)表达的明显增加(P均<0.05)；抗凋亡蛋白有明显降低，促凋亡蛋白明显升高(P均<0.05)。与TAC+GFP组比较，TAC+miR-455组小鼠的心重/体重值增加［(12.04±0.11)mg/gvs(9.78±0.20)mg/g,P<0.01］，左心室舒张期前壁厚度增加［(1.908±0.062)mmvs(1.782±0.058)mm,P<0.01］，左心室舒张期内径变小［(2.893±0.069)mmvs(3.027±0.052)mm,P<0.01］，但两组在左心室射血分数方面差异无统计学意义(P>0.05)；心肌肥厚基因表达增加(P均<0.05),但心肌纤维化基因表达水平两组差异无统计学意义(P>0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2虽降低但差异无统计学意义(P>0.05)，促凋亡蛋白Bax无明显升高。Westernblot分析，TAC+GFP组与假手术组比较，钙网蛋白(CALR)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白水平都有升高(P均<0.01),TAC+miR-455组与TAC+GFP组比较，GRP78水平差异无统计学意义(P>0.05)，而CALR水平却有了明显下降(P<0.01)；qRT-PCR结果显示CALR水平下降同时也有CALRmRNA的下降(P<0.01)。结论：短期压力负荷后小鼠出现了代偿性心肌肥厚的特征，表现为心室壁的增厚，心室腔的缩小，心重/体重比值增加以及心脏收缩功能的增强；病理学出现明显心肌细胞增大，伴随出现心肌肥厚相关的胎儿期基因的重新激活。miR-455通过降解靶mRNA使CALR降低这条途径，使得心肌细胞进一步增大，心肌肥厚更加明显。期刊名称】《中国循环杂志》年(卷),期】2015(000)009【总页数】6页（P889-894）【关键词】微小核糖核酸;心肌肥厚;钙网蛋白【作者】吴春涛;李拥军;刘苏;王智勇【作者单位】050051河北省石家庄市，河北医科大学第三医院重症医学科;河北医科大学第二医院心内科;河北医科大学第二医院心外科;050051河北省石家庄市，河北医科大学第三医院重症医学科【正文语种】中文【中图分类】R54方法：选用18只昆明种小鼠，随机分为TAC+miR-455组（n=6,尾静脉注射包被miR-455的腺病毒）、TAC+绿色荧光蛋白（GFP）组（n=6，TAC+GFP组，尾静脉注射包被GFP的腺病毒）和假手术组（n=6，尾静脉注射包被GFP的腺病毒）。术后两周测量小鼠血流动力学及超声心动图指标；对心肌组织进行苏木素-伊红（HE）染色和马松（MASSON）染色观察心肌组织病理学变化；应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测心肌肥厚基因与纤维化基因的表达；免疫蛋白印迹法（Westernblot）分析凋亡蛋白；qRT-PCR与Westernblot分析miR-455的靶基因和蛋白。结果：造模两周时，与假手术组比较，TAC+GFP组小鼠心重/体重值增加［(9.78±0.20)mg/gvs(8.25±0.22)mg/g,Pv0.01］，左心室舒张期前壁厚度明显增加［(1.782±0.058)mmvs(1.457±0.050)mm，PvO.O5］，左心室舒张期内径变小［(3.027±0.052)mmvs(3.142±0.050)mm,Pv0.05］,左心室射血分数增加［(84.167±4.167)%vs(77.000±3.347)%，Pv0.05］；心肌肥厚基因(心房钠尿因子、骨骼肌肌动蛋白和P肌球蛋白重链)和心肌纤维化基因(转化生长因子P1和结缔组织生长因子)表达的明显增加(P均v0.05);抗凋亡蛋白有明显降低，促凋亡蛋白明显升高(P均v0.05)。与TAC+GFP组比较，TAC+miR-455组小鼠的心重/体重值增加［(12.04±0.11)mg/gvs(9.78±0.20)mg/g,Pv0.01］，左心室舒张期前壁厚度增加［(1.908±0.062)mmvs(1.782±0.058)mm,Pv0.01］，左心室舒张期内径变小［(2.893±0.069)mmvs(3.027±0.052)mm,Pv0.01］，但两组在左心室射血分数方面差异无统计学意义(P>0.05)；心肌肥厚基因表达增加(P均v0.05)，但心肌纤维化基因表达水平两组差异无统计学意义(P>0.05)；抗凋亡蛋白Bcl-2虽降低但差异无统计学意义(P>0.05)，促凋亡蛋白Bax无明显升高。Westernblot分析，TAC+GFP组与假手术组比较，钙网蛋白(CALR)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白水平都有升高(P均v0.01),TAC+miR-455组与TAC+GFP组比较，GRP78水平差异无统计学意义(P>0.05)，而CALR水平却有了明显下降(Pv0.01);qRT-PCR结果显示CALR水平下降同时也有CALRmRNA的下降(PvO.01)。结论：短期压力负荷后小鼠出现了代偿性心肌肥厚的特征，表现为心室壁的增厚，心室腔的缩小，心重/体重比值增加以及心脏收缩功能的增强；病理学出现明显心肌细胞增大，伴随出现心肌肥厚相关的胎儿期基因的重新激活。miR-455通过降解靶mRNA使CALR降低这条途径，使得心肌细胞进一步增大，心肌肥厚更加明显。Methods:Themicemodelofcardiachypertrophywasestablishedbytransverseaortaconstriction(TAC),and18malekunmingTACmicewererandomlydividedinto3groups:①TAC+miR-455group,②TAC+GFP(greenfluorescenceprotein)groupand③Shamgroup(shamoperation+GFP).n=6ineachgroupandallanimalsweretreatedfor2weeks.Thehemodynamicandechocardiographicindexeswereexamined,histo-pathologicalchangesofmyocardialtissuewereobservedbyHEandMassonstaining.ThehypertrophicandfibrosisgeneexpressionsweremeasuredbyRT-PCR,theapoptosisproteinlevelwasdetectedbyWesternblotanalysis.TheexpressionsofmiR-455targetinggeneandproteinwerealsodetermined.Results:Upon2weeksmodeling,comparedwithShamgroup,TAC+GFPgrouphadincreasedratioofheartweight/bodyweight(9.78±0.20)mg/gvs(8.25±0.22)mg/g,Pv0.01,increasedleftventriculardiastolic(LVD)wallthicknesses(1.782±0.058)mmvs(1.457±0.050)mm,Pv0.05,decreasedLVDdiameter(3.027±0.052)mmvs(3.142±0.050)mm,Pv0.05,increasedLVEF(84.167±4.167)%vs(77.000±3.347)%,Pv0.05;increasedgeneexpressionsofcardiachypertrophyandfibrosis,allPv0.05,decreasedanti-apoptosisproteinandincreasedpromotingapoptosisprotein,allPv0.05.ComparedwithTAC+GFPgroup,TAC+miR-455grouppresentedincreasedratioofheartweight/bodyweight(12.04±0.11)mg/gvs(9.78±0.20)mg/g,Pv0.01,increasedLVDwallthicknesses(1.908±0.062)mmvs(1.782±0.058)mm,Pv0.01,decreasedLVDdiameter(2.893±0.069)mmvs(3.027±0.052)mm,Pv0.01,whileLVEFwassimilarbetween2groups,P>0.05;increasedgeneexpressionofcardiachypertrophy,Pv0.05,whilegeneexpressionofcardiacfibrosiswassimilarbetween2groups,P>0.05;theanti-apoptosisproteinandpromotingapoptosisproteinexpressionsweresimilarbetween2groups.ComparedwithShamgroup,TAC+GFPgrouphadincreasedexpressionsofcalreticulin（CALR）andglucose-regulatedprotein78（GRP78）,allPv0.01.ComparedwithTAC+GFPgroup,TAC+miR-455grouphaddecreasedmRNAandproteinexpressionsofCALR,bothPv0.01,whileGRP78proteinexpressionwassimilarbetween2groups,P>0.05.Conclusion:miR-455maypromotecardiachypertrophyinducedbyshorttermoverloadpressureviatargetingCALRinexperimentalmice.近年来在多种生命体内发现了一种新的小分子核糖核酸（RNA）,即微小核糖核酸（miRNA）。miRNA是一类由内源基因编码的15~22bp的非编码单链RNA分子，通过结合靶基因mRNA的3'非编码区而对其表达进行转录后表达调控［1］。最近发现miRNA通过转录后负性调节目的蛋白质参与许多心血管病，例如miRNA-34a、miRNA-21、miRNA-23a、miRNA-24、miRNA-133、miRNA-208/miRNA-195和miRNA-199与心肌肥厚有关［2-5］,miRNA-29和miRNA-21与心肌纤维化有关［6,7］,miRNA-210和miRNA-494与缺血性心脏病有关［8,9］。事实上关于微小核糖核酸-455（miR-455）的研究很少，PubMed上仅有4篇关于miR-455的文章［10-13］，而且其中并没有miR-455与心肌肥厚的研究通过计算机计算miR-455的5'端有6个核苷酸，被称为种子序列（Seedsequence），与钙网蛋白（CALR）匹配完好（图1）,而CALR与心肌肥厚关系密切，因此可以大胆推测miR-455在心肌肥厚中起着重要作用。我们通过小鼠结扌L主动脉弓导致主动脉缩窄（TAC））建立了心肌肥厚的模型，旨在探讨miR-455在心肌肥厚中的细胞与分子学机制。实验动物与分组：选用18只4周龄健康雄性昆明种小鼠（购自河北医科大学），体重约（20±2）g，随机分为主动脉缩窄（TAC）+miR-455组（TAC+miR-455组），TAC+绿色荧光蛋白（GFP）组（TAC+GFP组）和假手术组，每组6只。TAC+miR-455组小鼠于主动脉弓结扎术后第1天，第8天尾静脉注射包被miR-455的腺病毒0.1ml（5.0x109ifu/ml,Invitrogen，中国上海）；TAC+GFP组小鼠于主动脉弓结扎术后第1天，第8天尾静脉注射包被GFP的腺病毒0.1ml（1.0x109ifu/ml,Invitrogen，中国上海）；假手术组小鼠于手术后第1天，第8天尾静脉注射包被GFP的腺病毒0.1ml（1.0x109ifu/ml,Invitrogen，中国上海）。动物模型制作：小鼠麻醉后找到左胸骨边缘约2mm处，沿第二肋间隙打开胸腔，游离主动脉弓，于锁骨下动脉（第一分支）和左颈总动脉（第二分支）间穿0号线备用，平行于主动脉弓放置27-gauge（直径0.4mm）针头，一同结扎后抽出针头，使主动脉狭窄65%~70%。假手术组手术同上，但不结扎主动脉弓。超声心动图检查：应用超声心动图于手术前、术后2周评估心功能。测量左心室舒张期内径（LVIDd）、左心室舒张期前壁厚度（LVAWd）、左心室射血分数（LVEF）。血流动力学检测：术前、术后2周三组小鼠行微导管术进行血流动力学检测，测量并记录动脉收缩压、左心室收缩末压（LVESP）、左心室舒张末压（LVEDP）。病理组织学检测：血流动力学测定之后，迅速取出心脏，放入冰生理盐水后泵出心腔余血，滤纸吸干水分精密天平称重，计算心重/体重值（mg/g）。取心室肌，置于4%多聚甲醛中，梯度乙醇脱水，石蜡切片，进行苏木素-伊红（HE）染色和马松（MASSON）染色，应用Motic6.0分析软件（中国厦门）显微镜下观察。心肌组织miR-455、mRNA的测定：Trizol法提取总RNA，使用AppliedBiosystems7300型PCR基因扩增仪进行荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）。miR-455以U6为内参（All-in-OnemiRNAqPCRDetectionSystem,GeneCopoeia，马里兰州，美国），miR-455引物序列：ATGTGCCTTTGGACTACATCGAA;U6引I物序列：TCGTGAAGCGTTCCATATTTTTAA；通用下游引物：TTACTACGTCATGACTAGTAA。mRNA以p-肌动蛋白（p-actin）为内参（赛百盛，中国北京），采用ACt（ACt目的-ACt内参）法进行相对定量分析，以2-△Ct作为目的基因的相对表达量。引物序列见表1。免疫蛋白印迹法分析：提取心肌细胞总蛋白，用Lowry蛋白定量试剂盒测定蛋白含量［14］，用5X样品Buffer处理后分装-70°C贮存。取上述细胞蛋白样品（含蛋白75pg）进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS,10%分离胶），将电泳分离后的蛋白质电转移至PVDF膜上（MilliporeImmobion-P,Millipore，马塞诸塞州，美国），经封闭、洗脱后分别加入抗CALR:1:500;抗Bax：1:500;抗Bcl-2:1:1000（博士德，中国武汉）4C孵育过夜，洗膜后以相应荧光二抗孵育1h,并以兔抗人甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体（1:5000,BioWorld,中国南京）同上操作，作为内对照。抗原—抗体复合物用双色红外激光扫描仪进行扫膜采用Image-ProPlus（Version4.1,MediaCybernetics,LP，美国）软件分析蛋白条带积分光密度值（IOD）,以靶蛋白IOD与GAPDH的IOD比值反映靶蛋白相对表达水平。统计学处理：采用SPSS19.0统计分析软件进行分析。实验数据用均数士标准差表示，组间及组内比较用方差分析（ANOVA）。以Pv0.05为差异有统计学意义。2.1miR-455在小鼠体内的转染（图2）造模2周后，与假手术组相比，TAC+GFP组小鼠体内miR-455表达明显降低。与TAC+GFP组相比，TAC+miR-455组小鼠体内miR-455表达明显升高（P均V0.01），说明miR-455在小鼠体内转染成功。2.2miR-455对小鼠血流动力学、超声心动图参数、心肌肥厚和心肌纤维化基因及心肌组织病理学的影响（表2）造模2周后，与假手术组相比，右侧颈动脉血压测定显示，TAC+GFP组和TAC+miR-455组小鼠动脉收缩压和LVESP明显升高（P均v0.01），但是LVEDP差异无统计学意义（P均〉0.05），说明小鼠高血压模型成功，正处于高血压后心肌肥厚状态，未进入心力衰竭。与假手术组相比，TAC+GFP组小鼠的心重/体重值增加（PV0.01）,LVAWd明显增加,LVIDd变小,LVEF增加（P均v0.05）。TAC+miR-455组较TAC+GFP组心重/体重值增加（Pv0.01）,LVAWd增加,LVIDd减小（P均v0.01）。TAC+miR-455组较TAC+GFP组LVEF增加，但差异无统计学意义（P>0.05）。miR-455对心肌肥厚基因表达的影响：造模两周时，与假手术组比较，TAC+GFP组小鼠心肌组织中心房钠尿因子、骨骼肌肌动蛋白和P肌球蛋白重链基因表达有明显增加（P均v0.01）。与TAC+GFP组比较，TAC+miR-455组心房钠尿因子、骨骼肌肌动蛋白和P肌球蛋白重链的基因表达有进一步增加（P均V0.05）。miR-455对心肌纤维化基因表达的影响：与假手术组比较，转化生长因子P1（TGF01）和结缔组织生长因子（CTGF）在TAC+GFP组和TAC+miR-455组的表达都有明显上升（P均v0.05），但两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。说明TAC2周时心肌纤维化已开始出现，但miR-455对纤维化的影响未明显显现出来。造模2周时，心室壁HE染色显示，假手术组可见心室壁厚度正常，TAC+GFP组心室壁厚度增厚，TAC+miR-455组较TAC+GFP组心室壁厚度进一步增厚。心肌细胞HE染色显示，假手术组可见心肌细胞呈红色，心肌细胞排列整齐，大小正常，胞浆均匀，胞核染色均匀。TAC+GFP组心肌细胞横截面积增大。TAC+miR-455组较TAC+GFP组心肌细胞进一步增大，心肌细胞排列紊乱，细胞浆浓染，细胞间距增大，细胞核空染增多。心肌纤维MASSON染色显示，假手术组可见少量胶原纤维散在分布于心肌细胞间隙中，呈现蓝色，较之于假手术组，TAC+GFP组和TAC+miR-455组心肌胶原纤维明显增加（图3）。miR-455对心肌细胞凋亡的影响（图4）：Westernblot示造模两周时，与假手术组相比，TAC+GFP组促凋亡蛋白Bax水平有明显上升（P<0.05）,TAC+miR-455组变化不明显（P>0.05）。对于抗凋亡蛋白Bcl-2，与假手术组比较，TAC+GFP组和TAC+miR-455组有所下降（P<0.01），但后两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。miR-455的靶基因分析（图5）:Westernblot分析，TAC+GFP组小鼠心肌CALR和GRP78蛋白水平升高（P均<0.01），但经过了miR-455的干扰，TAC+miR-455组GRP78水平依然升高（P<0.01），而CALR水平却有了明显下降（P<0.01），说明CALR是miR-455的靶蛋白之一。qRT-PCR提示CALR水平下降同时也有小鼠心肌CALRmRNA的表达下降，说明miR-455对CALR的调节是通过降解mRNA来抑制蛋白翻译。在实验中，首先利用TAC成功构建了压力超负荷致小鼠心肌肥厚模型，两周后小鼠出现了明显的代偿性的向心性心肌肥厚，伴随有心室壁的增厚以及心室腔的缩小升主动脉缩窄后，会出现血流动力学上的改变，心脏后负荷增加，改变了一系列神经激素分泌，出现心肌肥厚。在这一过程中，会出现一些与心肌肥厚相关的胎儿期基因的表达升高，例如心房钠尿因子、骨骼肌肌动蛋白和P肌球蛋白重链基因等分子。在这里第一次证明了在压力超负荷诱导的心肌肥厚小鼠体内miR-455是下调的。如果上调miR-455，会加速了小鼠的心肌肥厚，这与miR-455调控的靶mRNA——CALR密切相关。CALR是一种Ca2+结合分子伴侣，在维持细胞Ca2+稳态和协助蛋白质正确折叠上有关键调控，在成熟心脏中保持在低水平，一旦其基因转录再次活化，蛋白水平升高说明出现了心肌肥大等病理状态。Tsutsui等［15］应用腹主动脉狭窄的方法，塑造了压力超负荷型的心肌肥厚大鼠模型，对大鼠进行心功能检查与CALR检测，发现大鼠心肌收缩力降低，肌浆网/内质网Ca2+-ATP酶（SERCA）蛋白水平降低，CALR表达上调；应用免疫组化方法，在对照组大鼠心脏中找到了CALR主要分布在间质成纤维细胞。张振英等［16］发现腹主动脉狭窄可诱导大鼠心肌肥厚，与对照组比较，术后7天模型组大鼠内质网分子伴侣CALRmRNA表达于术后1天即发生显著上调，较对照组增加136%，而蛋白在术后7天开始出现显著变化，较对照组升高69.2%。我们的研究与以往研究相一致，即心肌肥厚会伴随CALR升高。实验中下调CALR导致心肌肥厚的加重，Lee等［17］发现CALR可以抑制去甲肾上腺素诱导心肌细胞肥厚，为我们的发现提供了有力的支持。下调CALR后邛肌球蛋白重链有明显增加，但仍可以看出LVEF有所升高，这种表现似乎与P肌球蛋白重链的作用不吻合。已知P-MHC与肌动蛋白的亲和力低于a肌球蛋白重链，故以P肌球蛋白重链为主的心肌收缩力弱，收缩速度减慢而导致心肌收缩功能减退，而本实验仅仅是TAC后两周，P肌球蛋白重链虽然升高，但并不能保证P肌球蛋白重链在肥厚心肌中的作用已超过a肌球蛋白重链，有可能两者最终的作用仍是a肌球蛋白重链为主，至于miR-455对TAC后长期心功能的影响尚需进一步实验证实。并且本实验进一步得出，CALR受到miR-455的调控，即CALR是miR-455的靶蛋白之一，如果上调miR-455那么CALR表现出下调的趋势，而且这种下调是通过降解靶mRNA实现，而非通过抑制其翻译实现。因此，可以通过下调miR-455使得心肌肥厚得到减轻，从而延缓心力衰竭的进程。通常明显的心肌纤维化和凋亡多发生在慢性心衰的后期，此实验主要探讨短期TAC后miR-455的作用，虽然已出现心肌纤维化和凋亡发生，但miR-455尚未有显著作用，因此miR-455对长期TAC后心肌肥厚的影响还需要进一步实验证实。【相关文献】陆永光.微小核糖核酸与冠心病关系的研究进展.中国循环杂志,2010,25:484-486.杨蕊珂，杨丽红,王淑辉，等•微小核糖核酸-34a对大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链a基因表达的调控.中国循环杂志,2014,29:28-32.CareA,CatalucciD,FelicettiF,eta1.MicroRNA-133controlscardiachypertrophy.NatMed,2007,13:613-618.vanRooijE,SutherlandLB,LiuN,eta1.AsignaturepatternofstressresponsivemicroRNAsthatcanevokecardiachypertrophyandheartfailure.ProcNatlAcadSciUSA,2006,103:18255-18260.vanRooijE,SutherlandLB,QiX,eta1.Controlofstress-dependentcardiacgrowthandgeneexpressionbyamicroRNA.Science,2007,316:575-579.ThumT,GrossC,FiedlerJ,eta1.MicroRNA-21contributestomyocardialdiseasebystimulatingMAPkinasesignallinginfibroblasts.Nature,2008,456:980-984.vanRooijE,SutherlandLB,ThatcherJE,eta1.DysregulationofmicroRNAsaftermyocardialinfarctionrevealsaroleofmiR-29incardiacfibrosis.Proc.NatlAcadSciUSA,2008,105:13027-13032.HuS,HuangM,LiZ,eta1.Mic