紫杉醇自乳化给药体系的构建研究

乳化给药体系的构建研究紫杉醇自乳化给药体系的构建研究摘要紫杉醇（Paclitaxel，PTX）是壹种天然的抗癌原料药，是从红豆杉属植物感谢阅读短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)的树皮中分离得到的单体双萜类化合物。它对多谢谢阅读种人肿瘤细胞系如卵巢癌、乳癌、黑色素瘤等均有明显的细胞毒作用。由于其作谢谢阅读用机理独特、抗癌活性显著，临床试验表明，紫杉醇可能成为治疗卵巢癌和乳癌谢谢阅读的壹线药物。于临床应用中，紫杉醇较差的水溶性（<0.006mg/ml）导致其口服生物利用感谢阅读度很低，且存于急性过敏反应等问题。为此，我们尝试采用自乳化药物传递系统谢谢阅读（SEDDSO/W型微乳，感谢阅读解决其水溶性差的问题，同时降低毒性，提高药物的生物利用度。精品文档放心下载本研究通过对油相、水、表面活性剂、助表面活性剂的选择和配比优化，成感谢阅读功地将紫杉醇包埋于乳液中，由伪三元相图得到相应的微乳区域，且结合自乳化精品文档放心下载速率及对紫杉醇的溶解性能来筛选处方。最终确立微乳的最优配方为：油酸正丁感谢阅读酯+聚氧乙烯蓖麻油+1，2丙二醇（3:7(2:1)谢谢阅读微乳，粒径于30nm。实验条件为于37℃水浴中，温和搅拌。且于229nm,感谢阅读143650为流动相，流速为1ml/min的条件下，用高效液相色谱法谢谢阅读（HPLC）准确分析紫杉醇含量，为构建紫杉醇自乳化给药体系作了初步探索。感谢阅读关键词：紫杉醇自乳化微乳拟三元相图高效液相色谱StudiesontheSEDDSofpaclitaxel精品文档放心下载ABSTRACTPaclitaxelisakindofnaturalanti-cancerdrugsseparatedfromthecortice感谢阅读sofTaxusbrevifolia.Itisamonomerofdi-terpene.Itisactivetomanyhumancanc精品文档放心下载ercellsystemssuchasovarycancer,breastcancerandsoon.Becauseofitsspecia感谢阅读lanti-cancermechanismanditsobviouseffect,Paclitaxelmaybecometheprefer谢谢阅读reddrugincuringtheovaryandbreastcancerinrecentyears.精品文档放心下载Tosolveallkindsoftroublescausedbytheclinicalusingofpaclitaxel,such精品文档放心下载asthehypersensitivityreactionsandthepoorbioavailability,wetrytoprepar精品文档放心下载eaSelf-emulsifyingDrugDeliverySystem(SEDDS)ofPaclitaxel.Theoil,water,感谢阅读surfactantandco-surfactantwerechosentoestablishasystemwhichcandissolv谢谢阅读ethepaclitaxel.SEDDScanimprovethebio-absorbptionofpaclitaxelmeanwhiler谢谢阅读educeitstoxicity.Wechooseprescriptionbyportrayingthepseudo-ternaryphasediagramandte谢谢阅读stingtheselfemulsifyingrate.WesuccessefullyembedpaclitaxelintheSEDDSm谢谢阅读icroemulsion,andfindthebestprescription:normal-butyloleate+Cremophor-谢谢阅读EL+propane-1，2-diol（3:7(2:1)）.TheHPLCmethodwasestablishedtodeterminetheconcentrationof谢谢阅读paclitaxelinSelf-emulsifyingDrugDeliverySystem.谢谢阅读Keywords:paclitaxelSEDDSmicroemulsionsHPLC谢谢阅读壹．前言癌症是当今威胁人类健康的最凶顽疾之壹，是疾病导致死亡的头号杀手。据感谢阅读世界卫生组织统计，全世界平均每年死于癌症的患者达690多万人，每年新增患精品文档放心下载者约为870万例，而且该数字呈逐年上升的趋势。对于这种全身性、全程性的疾感谢阅读病来说，开发壹种高效低毒的治疗药物具有非常重要的意义。精品文档放心下载植物生物碱和其他天然药物是抗肿瘤药中的领先类别，从临床用药情况见，感谢阅读呈现出逐年上升的趋势，已于抗肿瘤药物中占据了半壁江山。感谢阅读1．紫杉醇1.1理化性质及药理作用紫杉醇（Paclitaxel，PTX）是壹种单体双萜类天然抗癌原料药，从红豆杉谢谢阅读属植物短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)taxane）谢谢阅读衍生的生物碱。其分子式为：C47H51NO14，分子量：853.90，分子结构式为：感谢阅读作为壹种天然抗癌药，紫杉醇具有高效、低毒和广谱的特点。紫杉醇是细胞精品文档放心下载抑制剂类抗肿瘤药物，可干扰癌细胞的微管蛋白合成从而发挥抗癌作用，对正常精品文档放心下载细胞基本无影响。它对大多数实体瘤有强力抑制作用，临床试验表明，它对多种感谢阅读人肿瘤细胞系如卵巢癌、乳癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、结肠癌、黑色精品文档放心下载素瘤、白血病、膀胱癌、肝肿瘤、中枢神经肿瘤等均有明显的细胞毒作用[1]精品文档放心下载其对晚期卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和卡波济氏肉瘤的疗效确切、副作用较谢谢阅读小，故上市10年来壹直保持较高的增长率。同时，它也用于风湿性关节炎、皮感谢阅读肤病症的治疗。紫杉醇的作用机理独特、结构新颖、抗癌活性显著，引起了医药界的极大重谢谢阅读视和学科科研人员的广泛关注。可是紫杉醇较差的水溶性（<0.006mg/ml）使得谢谢阅读其临床应用存于诸多不便，如急性过敏反应、生物利用度低等。由于紫杉醇缺少精品文档放心下载那些于药学范围内能离子化的基团，所以调节PH值不能提高它的水溶性，通常精品文档放心下载所采用的那些提高溶解度的方法，如添加带电荷的复合剂或将药品转化为相应的谢谢阅读盐等，均不适用于紫杉醇[2]。1．2现行制剂和主要问题目前，临床上使用的紫杉醇制剂主要是：美国百时施贵宝公司（BMS）生产谢谢阅读的泰素（Taxol感谢阅读复方红豆杉胶囊（原名：紫杉醇胶囊）。其中口服胶囊的生物利用度较低，于临谢谢阅读床上使用相对较少；注射液则由于价格昂贵和存于过敏反应也未于国内市场上广谢谢阅读泛使用。精品文档放心下载提出了许多可行性方案。其中以胶体分散系统，如微乳、脂质体、胶束、生物可感谢阅读降解纳米粒等倍受关注，这些给药系统能不同程度地提高和癌细胞的亲和力，增谢谢阅读加药物被癌细胞的摄取量，从而降低用药剂量和不良反应，提高疗效。然而这些精品文档放心下载给药系统又分别存于各种问题，如微乳的乳化剂选择，脂质体的稳定性差和易泄谢谢阅读漏，胶束于临界缔合浓度以下的快速释药，纳米粒载体的毒性等等，这些问题使谢谢阅读得这些给药系统距临床用药尚有壹定距离[3,4]。2．自乳化给药体系2．1简介口服自乳化给药系统（Self-EmulsifyingDrugDeliverySystemSEDDS）感谢阅读是近年来发展起来的用于疏水性药物口服给药的新技术，它是由药物、油相、非谢谢阅读离子表面活性剂（S）和潜溶剂（助表面活性剂，Co-S）组成的热力学稳定的均精品文档放心下载壹、透明或半透明、各向同性的、热力学稳定的溶液[5]。口服后于胃液水相中由谢谢阅读于胃蠕动和乳化剂的作用下自发形成性能良好的O/W(水包油)微乳，也被称之为精品文档放心下载自微乳化药物传递系统（Self-MicroemulsifyingDrugDeliverySystem,简称感谢阅读SMEDDS）。药物存于于这些细小的油滴中，可快速分布于整个胃肠道中，从而减谢谢阅读少大块药物和胃肠道壁长时间接触后产生的刺激性。同时大大促进了水不溶性或精品文档放心下载溶解性小的药物的溶出和吸收，提高了药物的生物利用度。精品文档放心下载和普通的乳剂相比，SEDDS是壹种均相体系，因此具有较高的稳定性。和普感谢阅读通的油溶液相比，SEDDS能自动形成的粒径较小的乳剂（常小于5μm）[6,7,8]，具谢谢阅读有较大的表面积，吸收迅速。此外，SEDDS仍具有剂量准确、服用方便、制备简谢谢阅读单、性质稳定、适合于工业化大规模生产等优点，同时为提高水溶性小的药物的感谢阅读口服提供了壹个新的具有广阔前景的剂型，具有极大的发展前景和应用价值。谢谢阅读2．2处方设计研究前几年的研究[9,10,11]主要于SEDDS的（1）油/表面活性剂的特性；（2）表面感谢阅读活性剂的浓度和油和表面活性剂的比例；（3）自乳化的温度。这些研究为更有精品文档放心下载效自乳化给药体系的建立打下基础。2．2．1油相的选择SEDDS的油相设计是壹个关键。油相于SEDDS中质量分数（w/w35%～精品文档放心下载70%，要求其安全、稳定，即使于低温贮藏条件下也不会有药物析出，且能以较感谢阅读少的用量溶解处方量的药物，要于不同的温度等条件下容易被所用的表面活性剂谢谢阅读所乳谢谢阅读溶性药物的能力和自乳化性能不是很强，所以目前使用较少。当下很多研究工作显现，对天谢谢阅读然植物油进行结构改造后，例如用聚乙二醇改造，这些物质具有较好的结果特点和生理学上感谢阅读SEDDS中[19,22,23]目前常采用长链和中链的有不同程度饱感谢阅读和度的甘油三酯油类来设计自乳化剂型。见表1所示。表1几种现用的SEDDS或SMEDDS的组成成分感谢阅读给药系统油相表面活性剂潜溶剂药物药物含量文献感谢阅读SEDDS甘油单油酸和聚乙二醇甘油单酯、双酯、双油酸混合物三酯（HLB=14）—Ontazolast白三烯抑制剂7.5%[11]SEDDS(山地明®)橄榄油聚乙二醇甘油酯（HLB=3/4）乙醇环孢素A10%[12]中链饱和脂肪酸、花生油中链甘油单酯、双酯、Tween80、聚乙二醇-25-甘油三酯—Ro15-0778,壹种萘衍生物SEDDS5%[13]SEDDS中链饱和脂肪酸聚乙二醇-25-甘油三酯—WIN5495435%[9]SMEDDSHLB=1-14）—消炎痛吲哚美辛4%[14]SMEDDS(Neoral®)氢化玉米油聚乙二醇甘油酯,POE-蓖麻油衍生物甘油环孢素A10%[15]SMEDDS(Neoral®)氢化玉米油聚乙二醇甘油酯,POE-蓖麻油衍生物乙醇环孢素A10%[16]正电荷SEDDS油酸乙酯Tween80乙醇环孢素A10%[17]正电荷SEDDS油酸乙酯Tween80乙醇黄体酮2.5%[8]2．2．2表面活性剂的选择具有较高HLB的非离子表面活性剂常被用于SEDDS感谢阅读氧基聚氧乙烯甘油酯和聚氧乙烯油酸酯(Tween80)感谢阅读1所示）常用的非离子表面活性剂仍有F6880PPG）谢谢阅读作表面活性剂制备SEDDS也取得了较好的乳化效果。常用的PGG有：精品文档放心下载LabrafacCM8BM284(HLB8)，LabrafacCM10BM287(HLB10)，精品文档放心下载LabrafilM10BM355(HLB10)，LabrafilNA10BM369(HLB10)，Labrasol(HLB14)[22]。谢谢阅读通过对多种非离子表面活性剂的比较筛选研究，发现其中最有效的是HLB值为10谢谢阅读的含油酰基链的非离子表面活性剂。Tween85或TagatTO比脂肪酸乙基氧化物有更精品文档放心下载好的自乳化性能[13]PPGPEG精品文档放心下载长短、脂肪酸的不饱和程度等因素对自乳化性能均有不同程度的影响[26]。精品文档放心下载2．2．3助表面活性剂的选择加入潜溶剂的作用是降低界面张力；增加界面膜的流动性；调节HLB感谢阅读谢谢阅读Transcutol感谢阅读等可用作口服的SEDDSSEDDS为内容物的胶囊剂中，醇和其他挥谢谢阅读发性的潜溶剂能迁移入明胶胶囊壳，可能导致酯溶性药物的沉淀。无醇的SEDDS感谢阅读处方无此缺点，但对对脂质药物的溶解性有限。2．2．4药物处方中药物的性质对SEDDS的自乳化有壹定的影响。SEDDS通常被设计成胶谢谢阅读,固体形式的SEDDS能够有更大的含药量,但难以确定药物于固谢谢阅读体SEDDS中的状态,所以壹般采用均相液体形式的自乳化系统[27]。药物于某种程谢谢阅读度上会影响自乳化的过程,而且对每壹个SEDDS的影响均可能不同,但能够通过改谢谢阅读变油/表面活性剂的比例对处方进行优化。药物可能提高自乳化的性能,如于苯甲感谢阅读酸中加入中链脂肪酸甘油酯/Tween85时,自乳化性提高[30]精品文档放心下载化性能无影响,如于壹种甲基溶菌酶中加入中链脂肪酸甘油酯/聚氧乙烯甘油三油感谢阅读酸酯(TagatTO)体系时,自乳化性不变[31]感谢阅读中有能够和乙氧基形成氢键的基团，则其对SEDDS的乳化效果将会产生较大的影感谢阅读响。总之,为了设计壹种优良的自乳化药物载体,处方前对其溶解性和相图的研感谢阅读究是非常必要的。2．3质量评价对SEDDS的评价主要从以下几方面进行，乳剂的粒径、乳化的速率、乳剂粒精品文档放心下载子极性等。2．3．1乳剂的粒径SEDDS能自动形成的粒径较小的乳剂（常小于5μm）。其平均粒径可用精品文档放心下载CoulterNanosizer精品文档放心下载到的乳剂的稳定性越好。乳剂粒径的进壹步减小将导致形成热力学稳定、均质、精品文档放心下载透明的水包油自微乳化体系（SMEDDS）[14]。2．3．2乳化的速率乳化速率是测定乳化速度的壹个指标，它的大小能够见出SEDDS精品文档放心下载速率能够通过比浊计对整个乳化过程中散射光的强度变化来进行测定，通过对时谢谢阅读间作图来作为测定乳化速度的量度[26]。2．3．3乳剂粒子极性乳剂粒子的极性和表面活性剂的HLB有关，表面活性剂中的脂肪酸链长和饱谢谢阅读和度、亲水基团的大小均会影响到乳剂粒子极性。乳剂粒子极性可用酯溶性药物感谢阅读于油和水中的分配系数来衡量[26]。[7]感谢阅读其中：Qt为于不同时刻从油滴扩散到水中的药物量；r为油滴的粒径；k为油水分配系数。油滴的粒径r越小，油水分配系数k越小，药物释放的速度越快。精品文档放心下载3．应用和前景谢谢阅读报道也较少。现已上市的产品只有少数几个，如环孢素软胶囊等。目前国内尚没感谢阅读有紫杉醇自乳化给药系统的应用报道，其他药物的自乳化给药的报道也极少见。精品文档放心下载由于自乳化给药体系可用于疏水性药物的口服给药,起到提高生物利用度和治疗精品文档放心下载效果的作用，国内外学者和企业家均壹致认为自乳化给药系统是壹种非常有前景谢谢阅读的新剂型，将为解决大量水溶性差的药物的口服吸收提供壹个新的途径，尤其对谢谢阅读那些于水中不稳定、生物利用度又低的药物意义更大，具有巨大的经济和社会效谢谢阅读益。自乳化给药体系是壹种能提高弱水溶性和脂溶性药物生物利用度的很有前精品文档放心下载途的新剂型，具有巨大的经济和社会效益。然而,处方的多样性对SEDDS性质的精品文档放心下载影响,如微粒结构、粒径、微粒表面电荷、体内行为等仍然不很清楚,需要进壹步感谢阅读SEDDS的形式多样,SEDDS谢谢阅读中各种物质的种类及其性质的进行系统研究，且于此基础上筛选出针对性强的谢谢阅读SEDDS的优化处方，对其体内外的研究，将是壹件十分有意义的事情。精品文档放心下载本研究以紫杉醇为模型药物，微乳为药物载体系统，研究制备了紫杉醇自乳谢谢阅读化制剂，且对其进行质量检测。目的于于，研究壹种应用方便，使用安全，毒性谢谢阅读较低甚至无毒的新型紫杉醇制剂。二．实验部分一．实验仪器、药品及试剂1．仪器（1）UV-2102C型紫外可见分光光度计，尤尼柯（）仪器XX公司谢谢阅读（2）2004型－HH－4数显恒温水浴锅，常州国华电器XX公司精品文档放心下载（3）DF-101B集热式恒温磁力搅拌器，巩义市英峪予华仪器厂感谢阅读（4）78HW-1恒温加热磁力搅拌器，杭州仪表电机XX公司精品文档放心下载（5）KQ－50B型超声波清洗器，昆山市超声仪器XX公司谢谢阅读（6）DDS－11A型电导率仪，第二分析仪器厂（7）DGG－9053AD型电热恒温鼓风干燥箱，森信实验仪器XX公司谢谢阅读（8）OHAUSAdventurerTMAR1140型电子分析天平，奥豪斯国际贸易（）XX公司谢谢阅读（9）KNAUERSY－4000K型高效液相色谱仪，德国KANUERXX公司感谢阅读（10）Zetasizer3000激光粒子测定仪，谢谢阅读2．药品及试剂（1）紫杉醇：西安天诚科技XX公司（2）1,2-丙二醇，分析纯，如皋市金陵试剂厂（3）正丁醇，分析纯，浙江杭州双林化工试剂厂（4）无水乙醇，分析纯，安徽特酒总厂（5）十四酸异丙酯，化学纯，国药集团化学试剂XX公司感谢阅读（6）油酸正丁酯，化学纯，国药集团化学试剂XX公司谢谢阅读（7）聚氧乙烯蓖麻油Cremophor-EL，（8）橄榄油（9）气溶胶AerosolOT，（10）异丙醇，分析纯，浙江杭州双林化工试剂厂（11）蒸馏水，实验室自制（12）苏丹红，亚甲基蓝，三爱思试剂XX公司二．实验内容1．处方的初步筛选1．1油相的选择微乳的形成要求油相分子和界面膜分子应保持适当联系，这意味着油相分子精品文档放心下载的大小对微乳形成较为重要。原则上油相分子体积越小，溶解力越强。为了提高谢谢阅读主药于油相中的溶解度，增大微乳形成区域，应选用短链油相。谢谢阅读感谢阅读为了比较各种油相于形成微乳方面有不同的效果，我们选用橄榄油、十四酸异丙谢谢阅读酯和油酸正丁酯三种油相。橄榄油是壹种能够食用的植物油，于西方国家其用途精品文档放心下载极为广泛，如今于中国也开始普遍使用。我们考虑选择橄榄油，是因为它对人体感谢阅读的高度安全性，而十四酸异丙酯和油酸正丁酯也是比较常见的油相。精品文档放心下载1．2表面活性剂的选择表面活性剂又称乳化剂，其作用主要于于降低界面张力和形成吸附膜，促进谢谢阅读微乳形成。根据不同的油相往往要选择不同表面活性剂。非离子型表面活性剂因谢谢阅读毒性和刺激性均较小，适用于药物载体的制备。其于pH3～10内均可使用，受系感谢阅读统中电解质或离子强度的影响较小，且且能够和多种类型的助表面活性剂合用。感谢阅读根据关联文献，考虑到对紫杉醇的溶解性能，本实验选择的表面活性剂是感谢阅读AerosolOT、Cremophor-EL、吐温80和吐温85。谢谢阅读1．3助表面活性剂的选择助表面活性剂于微乳中主要起三方面的作用：（1）协助表面活性剂降低界谢谢阅读面张力，使(γo/w)a降低，πf升高，从而使γt2）增加界面流动性，感谢阅读减少微乳形成时的界面弯曲能，使微乳自发形成；（3）调节表面活性剂的HLB感谢阅读值，使表面活性剂于油-水界面上有较大的吸附。这些要求决定了助表面活性剂谢谢阅读必须于油相和界面上均达到壹定的浓度，且分子链较短。以往常用短链的醇、氨感谢阅读类作为助表面活性剂制备微乳。我们选择了无水乙醇、1,2-丙二醇和正丁醇作为助表面活性剂。感谢阅读1．4水温的选择形成微乳需要于适宜的温度下才能自发形成，由于药物需于体内代谢，而人感谢阅读体温度约为37℃，所以我们选择水浴温度为37℃。有利于考察微乳于人体环境感谢阅读温度下的各种变化。1．5处方配制及筛选1．5．1预选处方将待选的各种油相、表面活性剂和助表面活性进行配比，拟出36种预选处方，感谢阅读见表2-1。表2-1预选处方编号油相表面活性剂助表面活性1橄榄油AerosolOT乙醇2橄榄油AerosolOT1，2丙二醇3橄榄油AerosolOT正丁醇4橄榄油Cremophor-EL乙醇5橄榄油Cremophor-EL1，2丙二醇谢谢阅读6橄榄油Cremophor-EL正丁醇7橄榄油吐温80乙醇8橄榄油吐温801，2丙二醇9橄榄油吐温85正丁醇10油酸正丁酯AerosolOT乙醇11油酸正丁酯AerosolOT1，2丙二醇感谢阅读12油酸正丁酯AerosolOT正丁醇13油酸正丁酯Cremophor-EL乙醇14油酸正丁酯Cremophor-EL1，2丙二醇谢谢阅读15油酸正丁酯Cremophor-EL正丁醇16油酸正丁酯吐温85乙醇17油酸正丁酯吐温851，2丙二醇18油酸正丁酯吐温85正丁醇19十四酸异丙酯AerosolOT乙醇20十四酸异丙酯AerosolOT1，2丙二醇感谢阅读21十四酸异丙酯AerosolOT正丁醇22十四酸异丙酯Cremophor-EL乙醇23十四酸异丙酯Cremophor-EL1，2丙二醇精品文档放心下载24十四酸异丙酯Cremophor-EL正丁醇感谢阅读25十四酸异丙酯吐温85乙醇26十四酸异丙酯吐温851，2丙二醇27十四酸异丙酯吐温85正丁醇28油酸正丁酯吐温80乙醇29油酸正丁酯吐温801，2丙二醇30油酸正丁酯吐温80正丁醇31十四酸异丙酯吐温80乙醇32十四酸异丙酯吐温801，2丙二醇33十四酸异丙酯吐温80正丁醇34橄榄油吐温80乙醇35橄榄油吐温801，2丙二醇36橄榄油吐温80正丁醇1．5．2配制方法将所选的油相、表面活性剂和助表面活性剂按照1：1：1的质量比（即各谢谢阅读1g）加入到100ml锥形瓶中，于37℃水浴中用磁力搅拌器搅拌30分钟使三种成谢谢阅读分充分混匀。用移液管逐量加入去离子水至500ml，观察过程现象且记录成微乳谢谢阅读所需的水量。1．5．3实验结果于实验中观察到，含水量低时各系统均可形成油包水型微乳或胶束，表现为壹种谢谢阅读透明或略带乳光的油状溶液；有些油包水型微乳加水至壹定量出现浑浊，再加至谢谢阅读壹定量时又澄清，此时认为形成了水包油型微乳。当表面活性剂含量高时会出现谢谢阅读玻璃状的凝胶态，其粘度较大，随着水量的增多会逐渐溶解。有些处方则未能形精品文档放心下载成水包油型微乳，水量直至500ml仍浑浊未达半透明状态或分层。谢谢阅读将稳定后的各体系倒入已编号的试管，加入少量苏丹红染色，可清楚观察到系统感谢阅读的均壹或分层情况。图2-1第1-9号处方图2-2第10-18号处方图2-3第19-27号处方图2-4第28-36号处方1．5．4分析和结论（1AerosolOT感谢阅读但实验中俩者搅拌超过30min30m才能谢谢阅读完全溶掉，溶解性能较差且操作上比较麻烦，故考虑将其淘汰。精品文档放心下载（2）由图壹能够发现油相为橄榄油的系列基本均出现分层现象，油溶性的苏丹精品文档放心下载红染色于最上层表现为较深的橙红色，下层则为无色或较浅色。操作中橄感谢阅读榄油系列成微乳现象不理想，故考虑将其淘汰。（39组配方均以吐温80为表面活性剂，但其分层及浑浊现象明显，且谢谢阅读配制过程中较难形成半透明微乳，体系不够均壹稳定，故考虑将吐温80感谢阅读淘汰。2．处方的进壹步筛选优化和最优处方的确立2．1处方的选择和配比鉴于预选处方所得到的结论以及查阅紫杉醇溶解性能关联资料，现确定待选精品文档放心下载各自乳化辅料成分如下：油相：十四酸异丙酯，油酸正丁酯表面活性剂：Cremophor-EL，吐温85助表面活性剂：1，2丙二醇，正丁醇，异丙醇，乙醇将三种成分组合配比如表2-2进行微乳配制：表2-2编表面活性剂助表面活性用量比

油相（A）用量比A:(B+C)

号（B）剂（C）B:C精品文档放心下载1十四酸异丙酯Cremophor-EL正丁醇①1：1②2：1③4：1④8：1：9，2：8，3：7，4：6，5：5，6：4，7：3，8：2，9：1九个比例2油酸正丁酯Cremophor-EL正丁醇同上同上谢谢阅读3十四酸异丙酯Cremophor-EL1，2丙二醇同上同上精品文档放心下载4油酸正丁酯Cremophor-EL1，2丙二醇同上同上感谢阅读5十四酸异丙酯Cremophor-EL异丙醇同上同上谢谢阅读6油酸正丁酯Cremophor-EL异丙醇同上同上精品文档放心下载7十四酸异丙酯Cremophor-EL乙醇同上同上谢谢阅读8油酸正丁酯Cremophor-EL乙醇同上同上谢谢阅读9十四酸异丙酯吐温851，2丙二醇同上同上谢谢阅读10油酸正丁酯吐温85正丁醇同上同上2．2微乳的配制方法将表二中的各种处方成分按照相应质量比精确称量且加入到100ml锥形瓶中，谢谢阅读用磁力搅拌器于37℃水浴中搅拌20分钟，使油相、表面活性剂和助表面活性剂感谢阅读感谢阅读水量应加至油相质量的500倍为终点，即油相0.5g，水250ml（水的密度视为谢谢阅读1g/ml2．3形成微乳的判断方法及现象分析判断形成0/W型微乳的方法是：体系形成澄清透明、稳定均壹的水溶液，略精品文档放心下载谢谢阅读则应继续加水至半透明；有些处方不够稳定，刚加完水时澄清透明，但放置壹段精品文档放心下载时间后会有油状物质析出，判断为过量的表面活性剂，因此需继续加水直至放置感谢阅读2h感谢阅读色法来判断体系的水/油溶性，以及用电子显微镜观察粒径大小加以判断。感谢阅读壹般较好的处方加水量于10ml内便可形成微乳，因此于加去离子水时务必精品文档放心下载要逐量操作，通常壹次加1-2ml后放置观察，临近终点时可逐次加0.5ml以加强精品文档放心下载数据的精准性。2．4绘制伪三元相图根据各处方形成O/W型微乳的用水量及油相、表面活性剂和助表面活性的用感谢阅读10个编号系列共40谢谢阅读个图，分列如下：(1)十四酸异丙酯+Cremophor-EL+正丁醇感谢阅读图2－5(2)油酸正丁酯+Cremophor-EL+正丁醇图2－6(3)十四酸异丙酯+Cremophor-EL+1,2丙二醇感谢阅读图2－7(4)油酸正丁酯+Cremophor-EL+1,2丙二醇谢谢阅读图2－8(5)十四酸异丙酯+Cremophor-EL+异丙醇谢谢阅读图2－9(6)油酸正丁酯+Cremophor-EL+异丙醇图2－10（7）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+乙醇图2－11（8）油酸正丁酯+Cremophor-EL+乙醇图2－12（9）十四酸异丙酯+Tween85+1，2丙二醇图2－13(10)油酸正丁酯+Tween85+正丁醇图2－142.5相图分析和结论感谢阅读可进壹步筛选处方。由此可选出每组处方中表面活性剂和助表面活性剂的最佳比感谢阅读例；而油相和表面活性剂加助表面活性剂的比值则应选择形成微乳时所需用水量谢谢阅读占总量比例最小的那组。由此筛选得出各组最优配比如表2-3。精品文档放心下载表2-3各处方最优配比组别处方最佳B：C最佳A/(B+C)（1）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+正丁醇1：13：7谢谢阅读（2）油酸正丁酯+Cremophor-EL+正丁醇8：13：7精品文档放心下载（3）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+1,2丙二醇1：13：7精品文档放心下载（4）油酸正丁酯+Cremophor-EL+1,2丙二醇8：13：7感谢阅读（5）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+异丙醇1：12：8精品文档放心下载（6）油酸正丁酯+Cremophor-EL+异丙醇4：11：3谢谢阅读（7）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+乙醇4：13：7感谢阅读（8）油酸正丁酯+Cremophor-EL+乙醇2：13：7感谢阅读注：①表中A代表油相，B代表表面活性剂，C代表助表面活性剂。精品文档放心下载②组别（9）和（10）的伪三元相图中各配比的成微乳区域均非常小，几乎感谢阅读集中于顶点位置，且这些处方于配制微乳过程中很难形成半透明微乳液，谢谢阅读少量水时几乎均浑浊不透明，水量加至100ml甚至200ml才达到半透明状谢谢阅读态，由此可判断吐温85不是理想的表面活性剂，因此将（910）组别感谢阅读淘汰。2.6自乳化速率测定2．6．1方法和结果将表三中选出的8个较好的处方配比分别投入到模拟胃环境中，测定其自乳谢谢阅读化速率。具体方法为：称取相应量的油相、表面活性剂和助表面活性剂于100ml感谢阅读37℃水浴中搅拌201ml针筒抽取0.5ml感谢阅读800ml去离谢谢阅读子水，保持温和搅拌状态，每隔3-5min测壹次大烧杯内混合体系的吸光度，直感谢阅读至系统基本达到稳定。绘制自乳化速率图如下：图2－15十四酸异丙酯系列处方的自乳化速率测定汇总图精品文档放心下载图2－16油酸正丁酯系列处方的自乳化速率测定汇总图谢谢阅读2．6．2分析和结论由图2-15和图2-16能够判断：（1）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+1，2丙二醇3：7（1：1）体系直至170min感谢阅读吸光度仍处于上升趋势，说明此微乳液仍未达到稳定状态，自乳化速率不谢谢阅读佳。（2）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+乙醇3：7（4：1）体系稳定时间于40min左谢谢阅读右，自乳化速率壹般。（3）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+异丙醇2：8（1：1）体系虽然整体见吸光度谢谢阅读20min至80min仍于缓慢地上升，因此其稳定时间应该为感谢阅读80min，自乳化速率也不佳。（4）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+正丁醇37（11）体系直至160min吸光度感谢阅读仍处于上升趋势，说明此微乳液仍未达到稳定状态，自乳化速率不佳。感谢阅读（5）油酸正丁酯+Cremophor-EL+1，2丙二醇37（81）体系于10min左右已精品文档放心下载达到恒定的吸光度值，说明此时已形成稳定的微乳液，自乳化速率较好。感谢阅读（6）油酸正丁酯+Cremophor-EL+异丙醇1：3（4：1）体系稳定时间于30min左精品文档放心下载右，自乳化速率壹般。（7）油酸正丁酯+Cremophor-EL+正丁醇3：7（8：1）体系于40min左右吸光度精品文档放心下载开始维持恒定，说明于40min时已基本形成稳定的微乳液。感谢阅读（8）油酸正丁酯+Cremophor-EL+乙醇37（21）体系吸光度虽整体起伏不大，谢谢阅读但前阶段壹直缓慢上升，稳定时间于50min左右，自乳化速率壹般。精品文档放心下载总结出各处方形成稳定微乳体系的时间如表2-4。表2-4各处方自乳化时间序号处方自乳化时间/min十四酸异丙酯+Cremophor-EL+1，2丙二醇3：7（1：精品文档放心下载（1）>1701）（2）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+乙醇3：7（4：1）40谢谢阅读（3）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+异丙醇2：8（1：1）80感谢阅读（4）十四酸异丙酯+Cremophor-EL+正丁醇3：7（1：1）>160感谢阅读（5）油酸正丁酯+Cremophor-EL+1，2丙二醇3：7（8：1）10谢谢阅读（6）油酸正丁酯+Cremophor-EL+异丙醇1：3（4：1）30谢谢阅读（7）油酸正丁酯+Cremophor-EL+正丁醇3：7（8：1）40精品文档放心下载（8）油酸正丁酯+Cremophor-EL+乙醇3：7（2：1）50谢谢阅读从表2-4能够清楚地见到，处方（5）的自乳化时间远远小于其他几个处方，感谢阅读于1015精品文档放心下载分钟内便达到稳定，因此此处方符合要求，自乳化速率理想。精品文档放心下载2．7最优处方的确立从自乳化速率测定实验中，得到的最优处方配比为：油酸正丁酯谢谢阅读+Cremophor-EL+1,2丙二醇（3：7（8：110min内便达到稳定，感谢阅读自乳化速率比较理想。且此配比的伪三元相图微乳区域很大，于所有相图中是最精品文档放心下载大的壹个，配制过程中很容易形成透明带明显乳光的O/W精品文档放心下载种筛选比较方法结论壹致，因此，确立该配比为最佳自乳化处方。谢谢阅读3．微乳及紫杉醇自微乳体系特性评价3．1紫杉醇的溶解度测定3．1．1紫杉醇检测波长选择将少量的紫杉醇溶于流动相中，于200-400nm波长范围内扫描，确定紫杉醇谢谢阅读的最大吸收波长。图2－13紫杉醇波长扫描图结论：紫杉醇于229nm的波长下有最大吸收3．1．2标准曲线的建立配制浓度为4，8，20，40，80，100μg/ml的6个样品溶液，各取20u1进谢谢阅读样测定，记录各自中的紫杉醇于波长229nm所出的峰面积。以峰面积积分值对紫精品文档放心下载杉醇标准溶液浓度作图，得到体外测定紫杉醇浓度的标准曲线。谢谢阅读图2－14紫杉醇峰面积—浓度标准曲线由图可见，以峰面积和浓度为俩轴建立的标准曲线于4—100μg/ml浓度范感谢阅读围内线形关系良好。3．1．3回收率实验精密称取紫杉醇适量，用高、中、低三种标准工作液浓度按拟定的方法测定，以谢谢阅读考察方法的回收率，结果见表2-4。表2-4回收率表g）稀释后浓度测定的浓度回收率(%)平均回收总回收精品文档放心下载（μg/ml）（μg/ml）率（％）率(%)12.1611.90997.90.015248.6447.63297.997.6感谢阅读85.1282.5789712.0812.05899.80.015148.3247.5398.498.897.9谢谢阅读84.5682.99898.212.3212.04597.80.015449.2847.7919797.4精品文档放心下载86.2683.35396.696谢谢阅读条件进行紫杉醇的定量分析是可行的。3．1．4精密度测定称取5个不同的样品，1小时/次，共测五次，考察方法的精密度，结果见表五。感谢阅读表2-5精密度测定表时间（T）称量(g)稀释后浓度（μg/ml）测定的浓度（μg/ml）感谢阅读13:300.015863.262.9614:300.021184.484.315:300.025110098.1216:300.011244.843.9317:300.013955.652.59由表五得SD=2.1％，RSD=0.021％，说明精密度较高，本方法可用于紫杉醇精品文档放心下载的定量测定。3．1．5紫杉醇微乳液的HPLC测定3.1.5.1实验方法将最佳处方（油酸正丁酯+Cremophor-EL+1，2丙二醇37（81感谢阅读壹稳定后加入过量的紫杉醇样品，使其过饱和，置于37℃恒温震荡槽放置，于感谢阅读24h、48h、72h时分别测定其溶解度。3.1.5.2实验现象和结果=142650229nm谢谢阅读1ml/min；进样：20ml。实验结果见表4-7谢谢阅读表4-7紫杉醇微乳液的HPLC测定取样时间24h48h72h稀释倍数250025002500峰面积629.36715210.389936.719感谢阅读样品浓度（由标准曲线得出）mg/ml15.98422.70523.699精品文档放心下载样品浓度mg/ml39.9656.7659.25感谢阅读由表4-7可见，紫杉醇于微乳中的溶解度比于各个单独组分中的溶解度要高精品文档放心下载出许多，且有文献报道，主药于水包油型微乳中的溶解度和其于单纯油相中的溶精品文档放心下载解度不关联。因此，将紫杉醇做成微乳制剂可行。3．2粒径及分布测定取油酸正丁酯（OCremophor-EL(S)、1,2-丙二醇(Co-S)为自微乳处方以及胶谢谢阅读Zetasizer3000激光粒子测定仪测定稀溶液的粒子大小感谢阅读及分布范围。扫描结果如图十五、十六所示：图十五.粒径图（比例尺=100nm）图十六.粒径图（比例尺=50nm）由图可见该处方的微乳分布均匀，粒径大小大约于30nm左右，符合微乳的精品文档放心下载纳米级，自乳化情况较好。三．结论和展望感谢阅读测定自乳化速率、研究溶解度、以及观察粒径等方法的考察，最终筛选确立出自感谢阅读乳化给药体系的最优处方，即油相为油酸正丁酯、表面活性剂为Cremophor-EL感谢阅读以及1，2丙二醇为助表面活性剂，以此制备出性状美观，稳定性良好，自乳化谢谢阅读速度快，粒径小而均匀的紫杉醇SEDDS微乳，为该体系的进壹步研究提供了提供感谢阅读了参考和依据。可是本实验也存于壹些不足。最优处方中的表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油感谢阅读Cremophor-EL谢谢阅读但其对人体存于严重的过敏反应，有相当的毒副作用，离预期制备出安全低毒的精品文档放心下载制剂要求仍有壹定差距。现行处方虽然能将紫杉醇成功包埋，但其溶解度仍不理精品文档放心下载想，这样于保证正常药物用量的同时，也带来了大量辅料摄入人体的隐患，同时精品文档放心下载需要大剂量服用，给病人用药带来不便。紫杉醇样品变质问题可能于峰面积和浓精品文档放心下载度的对应关系上会存于相当的误差。另外由于时间关系未能做动物实验，没有测谢谢阅读定该处方紫杉醇的生物利用度，对处方的考察面不够完善。谢谢阅读我国是世界上癌症高发国之壹，是抗癌药物的需求大国，紫杉醇将是我国今精品文档放心下载后数十年肿瘤临床主要治疗药物之壹。而自乳化释药系统作为壹种非常有前景的谢谢阅读新剂型，将为解决大量水溶性差的药物的口服吸收提供壹个新的途径，尤其对那感谢阅读精品文档放心下载因此，研究紫杉醇的自乳化给药系统具有广阔的应用前景，本实验只做了初步的精品文档放心下载探索，于很多方面仍要深入研究和完善，希望高效低毒的紫杉醇自乳化制剂能早感谢阅读日问世，成为人类攻克癌症的福音。参考文献：[1][J]199814（5393-396精品文档放心下载[2]顾觉奋，杜昱，抗癌新药紫杉醇的研究概述[J]，国外医药抗生素分册，2000，21（2精品文档放心下载51－53[3][J]1997精品文档放心下载年第18卷第二期：94－100[4]施斌,[J]200413（6389-392感谢阅读[5]Gershanik,T.,S.Benzeno,andS.Benita,Interactionofaself-emulsifyinglipiddrugde感谢阅读liverysystemwiththeevertedratintestinalmucosaasafunctionofdropletsizeandsurf感谢阅读acecharge.PharmRes,1998.15(6):p.863-839.感谢阅读[6]KrishnaG,ShethBB.Anovelselfemulsifyingparenteraldrugdeliverysystem，谢谢阅读JPharmSciTechnol，1999,53(4):168-176谢谢阅读[7]N.H.Shah,M.T.Carvajal,C.I.Patel,M.H.InfeldandA.W.Malick,Self-emulsifyingdrug精品文档放心下载deliverysystems(SEDDS)withpolyglycolyzedglyceridesforimprovinginvitrodissolu谢谢阅读tionandoralabsorptionoflipophilicdrugs,IntJPharm,1994,106(1):15-23精品文档放心下载[8]徐贵霞，王玉丽等,自乳化释药系统的体外评价,解放军药学学报，2003,19(3):195-197谢谢阅读[9]M.G.Wakerly,C.W.Pouton,B.J.Meakin,F.S.Morton,Self-emulsificationofvegetableo感谢阅读il-non-ionicsurfactantmixtures,ACSSymp.Ser,1986,311:242-255谢谢阅读[10]M.G.Wakerly,C.W.Pouton,B.J.Meakin,Evaluationoftheselfemulsifyingperformance谢谢阅读ofanon-ionicsurfactant±vegetableoilmixture,J.Pharm.Pharmacol.1987,39:6P.精品文档放心下载[11]C.W.Pouton,Effectsoftheinclusionofamodeldrugontheperformanceofselfemulsifyi谢谢阅读ngformulations,J.Pharm.Pharmacol,1985,37:1P.感谢阅读[12]Tarr,BD&Yalkowsky,SH，Enhancedintestinalabsorptionofcyclosporineinratsthroughthereductionofemulsio感谢阅读ndropletsize，Pharm.Res.1989,6(1):40-43.感谢阅读[13]CharmanS.A.,CharmanW.N.,RoggeM.C.,etal,Self-emulsifyingdrugdeliverysystems:精品文档放心下载formulationandbiopharmaceuticevalutionofaninvestigationallipophiliccompound,感谢阅读PharmRes,1992,9(1):87-93[14]ConstantinidesP.P.,Lipidmicroemulsionsforimprovingdrugdissolutionandoralabs精品文档放心下载orption:physicalandbiopharmaceuticalaspects,PharmRes,1995,12(11):1561-1572谢谢阅读[15]D.J.Hauss,S.E.Fogal,J.V.Ficorilli,C.A.Price,etal,Lipid-baseddeliverysystems精品文档放心下载forimprovingthebioavailabilityandlymphatictransportofapoorlywater-solubleLTB感谢阅读4inhibitor,J.Pharm.Sci.1998,87:164-169.精品文档放心下载[16]J.Grevel,E.Nuesch,E.Abisch,K.Kutz,PharmacokineticsoforalcyclosporinA(Sandim感谢阅读mun)inhealthysubjects,Eur.J.Clin.Pharmacol.1986,31:211-216.精品文档放心下载[17]N.H.Shah,M.T.Carvajal,C.I.Patel,M.H.,etal,Selfemulsifyingdrugdeliverysystem谢谢阅读s(SEDDS)withpolyglycolyzedglyceridesforimprovinginvitrodissolutionandoralabs精品文档放心下载orptionoflipophilicdrugs,Int.J.Pharm.1994,106:15-23.谢谢阅读[18]N.Farah,J.P.Laforet,J.Denis,Self-microemulsifyingdrugdeliverysystemsforimpr精品文档放心下载ovingdissolutionofdrugs:invitro/invivoevaluation,Pharm.Res.1994,11:S202感谢阅读[19]P.P.Constantinides,Lipidmicro