第三章人源性生物制品

第三章人源性生物制品第一页，共一百零九页，2022年，8月28日第三章人源性生物制品生化制品技术第二页，共一百零九页，2022年，8月28日一、人源性生物制品特点与种类（一）人源性生物制品特点:1.效价高、疗效可靠（纯化生物制品效价提高）2.安全性好、不易产生副反应（防止感染）3.稳定性好（相对原料）4.资源有限（通过现代生物技术解决）第四章人源性生物制品第三页，共一百零九页，2022年，8月28日（二）人源性生物制品种类:目前可作为生产原料的人体成分限于血液、尿液、胎盘、毛发等。1.血液制品（全血、血蛋白、血细胞）2.尿液制品（尿激酶、尿抑胃素、HCG）3.胎盘制品（人胎盘丙种球蛋白、胎盘白蛋白、HCS）4.人体液体细胞中的活性成分（IFN，细胞因子、白介素）第四页，共一百零九页，2022年，8月28日1.血液制品血液制品：由健康人的血或血浆，特异性免疫人血浆分离、纯化或由基因工程技术制备的血蛋白或血细胞等成分。（1）全血来源：采血后添加抗凝剂（枸橼酸盐-葡萄糖溶液）使用：主要用于补充红细胞和血容量（失血超过40%），作用迅速。缺点：保存时间短，使用受限（裂解残留物），免疫反应，传播疾病第五页，共一百零九页，2022年，8月28日主张成分采血，成分输血：按照“缺什么，补什么”的原则输用，以达到治

疗病人的目的。纯度高，针对性强，提高输血疗效并减少体循环负担减少输血的不良反应和病毒的传播一血多用，充分利用宝贵的血液资源2.血液成分制品第六页，共一百零九页，2022年，8月28日第七页，共一百零九页，2022年，8月28日

表1人血液成份及其制品----------------------------------------------------------------------------------------------- 血液有形成份血浆制品备注----------------------------------------------------------------------------------------------- 红细胞

1、“少浆血”常用

2、浓缩红细胞常用 4、滤过红细胞常用

5、年轻红细胞少用

6、照射红细胞少用

白细胞1、白细胞

2、粒细胞去淋巴细胞

血小板1、单（机）采血小板

2、浓缩血小板---第八页，共一百零九页，2022年，8月28日

表1人血液成份及其制品----------------------------------------------------------------------------------------------- 血液成份（无形）血浆制品备注----------------------------------------------------------------------------------------------- ·血浆

1、普通冷冻血浆

2、新鲜冷冻血浆白蛋白1、白蛋白制品球蛋白1、静注丙种球蛋白多用

2、肌注丙种球蛋白少用凝血因子VIII1、人凝血因子VIII浓缩剂多用

2、重组人因子VIII制剂少用

3、猪凝血因子VIII浓缩剂

---第九页，共一百零九页，2022年，8月28日

表1人血液成份及其制品-----------------------------------------------------------------------------------------------血液无形成份血浆制品备注-----------------------------------------------------------------------------------------------凝血因子II、VII、1、凝血酶原复合物（PCC）

2、人因子IX浓缩剂IX、X3、重组人凝血因子IX4、转基因因子IX制剂纤维蛋白原1、纤维蛋白原制剂

2、冷沉淀（因子I）抗凝血酶1、抗凝血酶制剂其他（特殊免疫相应制剂 球蛋白、转铁蛋白等）

---第十页，共一百零九页，2022年，8月28日①“少浆血”指红细胞比容（Hct）在53%~60%并剩有部分血血浆的血液。适用于血容量丢失在20%~25%（1000~1500ml）的出血。慢性贫血，如再障、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、肾性贫血、消化道失血所致贫血等。②浓缩红细胞（压积红细胞）指Hct在70%~80%和剩有少量血浆的血液。适应证同“少浆血”。（1）红细胞制剂第十一页，共一百零九页，2022年，8月28日②浓缩红细胞（压积红细胞）浓缩红细胞可以在全血有效保存期内任何时间分离出部分血浆制备而成，一般用二联袋采集的全血制备浓缩红细胞。（1）用二联袋采集1单位或2单位全血于主袋内；（2）将全血在4℃±2℃离心，离心力5000×g,离心7分钟，沉淀红细胞；（3）取出离心后全血，将部分血浆分入空的转移袋内（4）用热合机切断塑料袋间的连接管，制备成浓缩红细胞。第十二页，共一百零九页，2022年，8月28日③洗涤红细胞指用生理盐水洗涤三次的红细胞，本品中仅含<1%的血浆蛋白和<20%的白细胞。适用于下列疾病伴贫血免疫性疾病；自身免疫性溶血性疾病；阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）；输血性溶血反应；新生儿溶血病的换血疗法；④照射红细胞、冻红细胞、年轻红细胞第十三页，共一百零九页，2022年，8月28日主要为浓缩白细胞适应证：各种原因所致中性粒细胞低于0.5×109/L，虽然中性粒细胞在0.5×109/L以上，但伴有高烧或感染，特别是单用抗生素不能控制者。

新生儿败血症（2）白细胞制品第十四页，共一百零九页，2022年，8月28日剂量：有效输注量是每天至少1010个中性粒细胞。不良反应：非溶血性输血反应，如寒战、发热、呼吸困难，甚至出现肺水肿和休克等。 注：

粒细胞离体很快失去功能，高效抗生素及细胞集落刺激因子出现、白细胞制品应用减少。

白细胞还用于生产干扰素第十五页，共一百零九页，2022年，8月28日（一）制品的种类1、浓缩血小板悬液（PC）400ml新鲜全血分离制成的PC，规定内含4.8×1010个血小板，容量50~70ml。

2、单采血血小板一般每袋含2~3×1011个血小板。（3）血小板制品第十六页，共一百零九页，2022年，8月28日浓缩血小板：1）全血采集于三联袋或四联袋主袋内；2）采后4-6小时内，于22℃±2℃存放或轻度离心，以离心力1220×g离心5分钟或700×g离心10分钟，使红细胞下沉，大部分血小板保留于血浆中为PRP层；3）将上层PRP分入第二转移袋内；4）把第三袋内的红细胞保存液加入主袋压积红细胞内，用热合机热合切断主袋与第3转移袋之间的连接塑料管。在主袋与第2血袋间塑料管内留取红细胞与血浆为血样品管；第十七页，共一百零九页，2022年，8月28日5）把第2PRP袋协同第三转移袋重度离心，温22℃±2℃，以离心力4650×g，离心6分钟，或3000×g，离心20分钟，使血小板下沉于底部形成沉淀；6）分离上层少血小板血浆进入第3转移袋内，留下20-30ml(1单位全血所分出的血小板）或50-70ml（2单位全血所分血小板）血浆于第二血小板袋内；7）制备的血小板应放入血小板保存箱内。第十八页，共一百零九页，2022年，8月28日血细胞分离机采集血小板

目前各种型号的血细胞分离机已广泛应用采供血机构和医院。严格按照细胞分离机的操作程序进行操作，能获得高浓度和高纯度的血小板。第十九页，共一百零九页，2022年，8月28日血小板制品输注适应证：再障、急性白血病和恶性肿瘤行强烈化疗、放疗后血小板低于20×109/L，或有其他危及生命的严重出血倾向者。心肺旁路手术行体外循环和骨髓移植患者于移植前血小板降至50×109/L以下者。第二十页，共一百零九页，2022年，8月28日急性免疫性血小板减少，在分娩、手术、创伤或有危及生命的严重出血时。原发性或继发性血小板功能异常症，在有自发性出血倾向或在分娩、创伤、手术时。大量输注贮存血液或药物所致血小板减少性出血。第二十一页，共一百零九页，2022年，8月28日（4）血浆制品

血浆：常用的血浆种类包括新鲜液体血浆、新鲜冷冻血浆（FFP）、普通冷冻血浆、冷沉淀这四种。

前种是从采血之日起5天内从全血中制备的血浆，但缺少因VIII、因子V和血小板；后种是采血后6小时之内制备的血浆，但缺乏血小板。第二十二页，共一百零九页，2022年，8月28日1）新鲜液体血浆：制备工艺：①用三联袋采集全血，于采后6小时内经第一次5000×g的离心力离心7分钟，分出上层血浆。再将血浆第二次以5000×g的离心力离心5分钟，分出清除红细胞成分的血浆即为新鲜液体血浆；②制备浓缩血小板后所得到的少血小板血浆和制备血小板、白膜后剩余的少血小板血浆可用作新鲜液体血浆。适用于：扩容、补充凝血因子第二十三页，共一百零九页，2022年，8月28日第二十四页，共一百零九页，2022年，8月28日

2）新鲜冰冻血浆(freshfrozenplasma,FFP)制备工艺：

新鲜液体血浆立即放入-50℃的速冻箱，在最短的时间内迅速冷冻血浆，经完成速冻的血浆再放入-20℃以下的冰箱保存。从采血到冰冻过程应在8-24小时之内完成。第二十五页，共一百零九页，2022年，8月28日2)新鲜冷冻血浆适应证:单纯凝血因子缺乏、口服抗凝剂过量引起的出血肝病患者获得性凝血障碍大量输血伴发的凝血障碍抗凝血酶III（ATIII）缺乏免疫缺陷综合征血栓性血小板减少性紫癜(TTP)

禁忌证:

同普通冰冻血浆第二十六页，共一百零九页，2022年，8月28日3）普通冷冻血浆FP①制备工艺：

普通液体血浆立即放入-20℃以下的冰箱内冷冻保存

新鲜冰冻血浆保存一年后，可改为普通冰冻血浆；

制备冷沉淀后所得的血浆在-20℃以下冰箱冰冻并保存，也可作普通血浆之用。第二十七页，共一百零九页，2022年，8月28日②适应证：严重肝脏疾病、凝血因子缺乏香豆素类药物作用的逆转、心脏直视手术、大

量输血、弥散性血管内凝血（DIC）烧伤，抗凝血酶III（ATIII）缺乏症、血栓性血小板减少性紫癜（TTP）、血浆置换禁忌证：

对血浆蛋白有过敏者，血容量正常的老、幼患者，心功能不全者。第二十八页，共一百零九页，2022年，8月28日3、血浆蛋白制品

血浆蛋白制品：人血浆中分离制备的有明确临床疗效和应用意义的蛋白总称。近年来已知的血浆蛋白质有二百多种，有些蛋白质的功能尚未阐明。将其中主要的血浆蛋白质含量及功能归纳如表10-1。第二十九页，共一百零九页，2022年，8月28日（1）白蛋白白蛋白（又称清蛋白，albumin,Alb）：由肝实质细胞合成，在血浆中的半寿期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40%-60%。第三十页，共一百零九页，2022年，8月28日白蛋白制剂的种类：①人血白蛋白②血浆蛋白成分两者的区别主要在于含白蛋白的纯度不同，前者为96%以上，后者为83%以上。制备工艺：用乙型肝炎疫苗免疫的健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法提取，并经病毒灭活处理制成。用重组DNA技术制备重组血浆蛋白制剂。第三十一页，共一百零九页，2022年，8月28日血浆EOH：8%，PH：7.2，T：-3℃，r/2：0.14，PC：5.1%上清Ⅰ沉淀ⅠEOH：25%，PH：6.9，T：-5℃，r/2：0.09，PC：3.0%上清Ⅱ+Ⅲ沉淀Ⅱ+Ⅲ（供分离Ig用）EOH：18%，PH：5.2，T：-5℃，r/2：0.09，PC：1.6%上清Ⅳ-1沉淀Ⅳ-1Cohn6法工艺流程第三十二页，共一百零九页，2022年，8月28日上清Ⅳ-4沉淀Ⅳ-4EOH：40%，PH：4.8，T：-5℃，r/2：0.11，PC：0.8%上清液Ⅴ沉淀ⅤEOH：40%，PH：4.5，T：-3℃，PC：3%上清液不纯物质EOH：40%，PH：5.0，T：-5℃，r/2：0.09，PC：10%Cohn6法工艺流程第三十三页，共一百零九页，2022年，8月28日EOH：40%，PH：5.2，T：-5℃，r/2：0.01，PC：2.5%上清液白蛋白Cohn6法工艺流程问：低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素？第三十四页，共一百零九页，2022年，8月28日应用：①维持和调节血液渗透压白蛋白产生的渗透压大而粘度低，是最有效的血容扩张剂。②为组织提供营养白蛋白能结合阳离子，也能结合阴离子，故能输送性质不同的物质，如脂肪酸、激素、金属离子、酶和药物③运输和解毒结合有毒物质运送至解毒器官，然后排出体外；第三十五页，共一百零九页，2022年，8月28日A、pH当pH位于等电点时，蛋白质的溶解度最小，所以最易沉淀以根据蛋白质的等电点不同顺序沉淀出不同的血浆蛋白。通常低温乙醇法是在之间进行分离.B、温度温度低，蛋白质的溶解度低。溶液中加入乙醇，因乙醇的水合作用，会产生放热现象，而温度升高可能造成蛋白质的变性，所以在低温乙醇工艺中，整个过程均应控制在0～-8℃。如温度控制不当，轻则会影响蛋白质的得率，重则引起蛋白质变性。第三十六页，共一百零九页，2022年，8月28日C、蛋白质浓度如果溶液的蛋白质浓度较大，容易引起多种蛋白共同沉淀，所以在分离过程中，可将蛋白质溶液作适当的稀释，以减少蛋白质之间的相互作用，避免多种蛋白共同沉淀，但过分稀释，蛋白质易变性，同时增大分离的容量，也不可取。所以应选择适宜的浓度。在低温乙醇工艺中，蛋白质浓度范围为：0.2-6.6%D、离子强度盐类与蛋白质的互相影响随离子强度而变化。在低盐溶液中，盐浓度的很小改变即可引起蛋白质溶解度的极大变化。离子强度用r/2表示。低温乙醇法工艺中离子强度的变化范围在。正常人血清的离子强度接近于0.15。第三十七页，共一百零九页，2022年，8月28日E、乙醇浓度乙醇能降低蛋白质溶液的介电常数，随着乙醇浓度的增加蛋白质溶液的介电常数逐渐降低，而其溶解度急剧下降。在低温乙醇工艺中，乙醇的浓度范围在0-40%。在五变系统中，对蛋白分离最重要的变化因素是PH和乙醇浓度。第三十八页，共一百零九页，2022年，8月28日（2）免疫球蛋白制品免疫球蛋白（immunoglobulin）：指具有抗体活性的动物蛋白。主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。按结构可以分为：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类按功能应用可分为：正常人免疫球蛋白、特异性球蛋白、静脉注射免疫球蛋白第三十九页，共一百零九页，2022年，8月28日1）正常人免疫球蛋白又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白(简称丙球)，仅供肌肉注射用，所以又称肌注免疫球蛋白制剂。是采用低温乙醇法从大量混合血浆（药典要求1000人份以上）中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。有液体剂型和冻干剂型两种。第四十页，共一百零九页，2022年，8月28日主要作用：主要用来预防一些病毒性感染，如甲肝、丙肝、麻疹等疾病的预防以及丙种球蛋白缺乏症的治疗。注:国内滥用正常免疫球蛋白的现象比较严重。一些人认为经常使用丙种球蛋白可以“增强抵抗力”或“有益无害”。事实上滥用丙球不但无益，而且可能产生免疫依赖等副作用。第四十一页，共一百零九页，2022年，8月28日不良反应：正常人免疫球蛋白只能用于肌肉注射，因此，剂量有限且作用慢。对于需要大剂量用药的病例，必须进行静脉注射。而如果将肌注丙球用于静脉注射，多数患者会发生程度不同的类过敏反应，如头痛、恶心、发热、胸闷，甚至血压下降，意识丧失。如果患者有丙球缺乏症，则发生不良反应的危险性更大。第四十二页，共一百零九页，2022年，8月28日特异性免疫球蛋白：

是由对某些病原微生物具有高滴度抗体的血浆制备的特异的高效价免疫球蛋白。与正常免疫球蛋白不同，此类制剂必须具有至少一种高滴度抗体，用于临床上特定疾病的预防和治疗。

2）特异性免疫球蛋白第四十三页，共一百零九页，2022年，8月28日第四十四页，共一百零九页，2022年，8月28日种类

目前用于临床的特异性免疫球蛋白有十余种，较常用的如：乙肝免疫球蛋白甲肝免疫球蛋白破伤风免疫球蛋白、狂犬免疫球蛋白、风疹免疫球蛋白、水痘免疫球蛋白等。

第四十五页，共一百零九页，2022年，8月28日A、乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）

HBIG是先用乙肝疫苗免疫供血浆者，然后采集富含高效价抗-HBs的血浆，低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离方法提纯，并经病毒灭活处理制成，

有液体和冻干两种剂型，主要用于乙肝的预防，尤其在阻断母婴垂直传播中有明显的效果。第四十六页，共一百零九页，2022年，8月28日B、破伤风免疫球蛋白（TIG）TIG系筛选经破伤风类毒素免疫过的供浆员，加强免疫后采集含高效价破伤风抗体的血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离方法提纯，并经病毒灭活处理制成。采用经批准的人用破伤风疫苗和免疫程序第四十七页，共一百零九页，2022年，8月28日C、狂犬免疫球蛋白（RIG）

RIG是采用人用狂犬疫苗免疫供血浆者后，采集含高效价狂犬病抗体的血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离方法提纯，再经病毒灭活处理制成。采用经批准的人狂犬疫苗和免疫程序进行免疫。第四十八页，共一百零九页，2022年，8月28日3、补体系统蛋白制品补体系统（complementsystem）：一组存在于人和脊椎动物正常新鲜血清中的非特异性球蛋白。补体系统是由20多种不同的血清蛋白组成的多成分系统，占血清总蛋白10%。作用：①溶解和杀伤作用②免疫粘附作用③趋化作用④过敏毒素作用⑤促进血凝作用第四十九页，共一百零九页，2022年，8月28日4、凝血系统蛋白制品

正常情况下，当血管破损，血小板聚集，凝血酶生成，交联纤维蛋白在聚集血小板的基础上形成，巩固用于堵住伤口的塞子。继而激活纤溶系统，溶解多余的纤维蛋白，避免形成血栓栓塞，最终修复破损的血管，以维持血管的完整和通畅。第五十页，共一百零九页，2022年，8月28日凝血因子纤维蛋白血小板血管内皮促凝功能血流抗凝蛋白纤溶蛋白血管内皮抗凝功能TheHemostaticBalance出血凝血凝血过程第五十一页，共一百零九页，2022年，8月28日（1）、凝血因子VIII（FVIII）①冷沉淀凝血因子：保存期内的新鲜冰冻血浆，在1～6℃的条件下融化后，分离出沉淀在血浆中的不溶解物质，并冻结而成的制品。注：冷沉淀要在-20～-30℃冰冻保存，输注时还要融化。特别是作为家庭治疗就太麻烦。第五十二页，共一百零九页，2022年，8月28日②凝血因子VIII浓缩剂：大混合血浆（500～5000个献血者血浆）制备此产品,新鲜冰冻血浆内的冷沉淀作为起始原料，进一步用硅胶胶吸附、甘氨酸或聚乙二醇纯化，最后冷淡干燥冻干燥制成。可分为中纯度及高纯度。中纯度一般为毫升含第VIII因子活性15～20单位；高纯度可达25～40单位。第五十三页，共一百零九页，2022年，8月28日

VIII因子浓缩剂与冷沉淀相比有高活性（15～20单位／毫升）、高稳定性和可溶性已知制品瓶中第VIII因子单位数，可准确计算输注剂量并且体积小，便于运输、储存、再配制及使用，可在家庭或工作场所随时自己注射治疗。第五十四页，共一百零九页，2022年，8月28日适应症：冷沉淀含有第VIII因子，还含有纤维蛋白原（浓度相当于血浆内的5倍）及其他血浆蛋白（如第XIII因子和纤维结合蛋白）。甲型血友病，纤维蛋白原、第XIII因子缺乏症和Willebrand病的患者使用。清除非毒性物质、细胞粘连、炎症、创伤愈合中起重要作用。第五十五页，共一百零九页，2022年，8月28日

VIII因子浓缩剂含高纯度的第VIII因子，用于治疗甲型血友病，不能用于治疗血管性假血友病及无纤维蛋白原血症。第五十六页，共一百零九页，2022年，8月28日(2)、凝血酶原复合物浓缩剂（prothrombincomplexconcentrates，PCC)凝血酶原复合物：从健康人混合血浆中分离制备的1种能促进血液凝固的静脉注射血浆蛋白制剂。PCC主要含有依赖于维生素K的凝血酶原（FⅡ）、凝血酶原转化因子（FⅦ）、抗血友病乙型因子（FⅨ）和自身凝血酶原（FⅩ）其理化性质极为相似，商品PCC几乎都含有上述4种因子第五十七页，共一百零九页，2022年，8月28日制备工艺：PCC的制备方法，都是使用无机盐吸附剂（如硫酸钡、磷酸三钙、氢氧化铝）或离子交换吸附剂（如DEAE纤维素和DEAESephadexA50及DEAESepharoseFastFlow）。这些吸附剂的特性允许为治疗目的从人血浆中大规模制备含FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ4种凝血因子的浓缩物。

第五十八页，共一百零九页，2022年，8月28日无机盐吸附剂方法制备PCC是用EDTA抗凝的血浆，再以枸橼酸钠洗脱，随后经乙醇沉淀。磷酸三钙作为吸附剂制备的PCC，再用超滤法或PEG沉淀法获得浓缩物，磷酸三钙吸附的PCC制剂中，FⅦ含量比FⅨ高第五十九页，共一百零九页，2022年，8月28日离子交换吸附剂方法制备PCC血浆、或去冷沉淀血浆（冷上清）作为PCC分离的起始原料PCC中的FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ4种凝血因子都有低的等电点，通常使用离子交换剂吸附。以阴离子交换剂DEAE纤维素和DEAESephadexA50广泛使用。第六十页，共一百零九页，2022年，8月28日第六十一页，共一百零九页，2022年，8月28日适应证：血友病B（hemophiliaB）严重肝脏疾病：如重症肝炎、肝硬化等。血浆凝血酶原时间（prothrombintime,PT)延长患者的手术维生素K缺乏症DIC第六十二页，共一百零九页，2022年，8月28日(3)人血纤维蛋白原

纤维蛋白原（xianweidanbaiyuan）：一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体。分子量340000，半衰期4～6日，血浆中参考值2～4克/升。制备工艺：方法步骤为：（１）冻血浆融浆；（２）乙醇组分Ⅰ沉淀；（３）离心；（4）乙醇组分Ⅱ沉淀；（４）乙醇组分Ⅲ沉淀；（５）原液制取。第六十三页，共一百零九页，2022年，8月28日适应症：先天性低纤维蛋白原血症、原发性和继发性纤溶引起的低纤缩蛋白原血症第六十四页，共一百零九页，2022年，8月28日（三）血液制品安全性1、经血液制品传播的疾病：病毒：目前经输血传播的病毒包括HIV、肝炎病毒（包括乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒等）、微小病毒B19（B19V）、巨细胞病毒（CMV）和EB病毒等。细菌：梅毒螺旋体、耶尔森菌、葡萄球菌、链球菌等。病原虫：输用疟疾流行区的血液或红细胞制品，有可能传染疟疾。第六十五页，共一百零九页，2022年，8月28日第六十六页，共一百零九页，2022年，8月28日第六十七页，共一百零九页，2022年，8月28日2、血液制品安全的综合性保证系统（三重安全网）（1）加强血源管理（2）加强原料血浆的筛检（3）核心生产技术——血浆蛋白分离方法和病毒去除/灭活方法第六十八页，共一百零九页，2022年，8月28日（3）血液制品中病毒去除/灭活方法灭活物理法加热方法（巴斯德消毒法）、紫外照射、美蓝荧光照射。化学法有机溶剂结合/表面活性剂(S/D法)、低PH发法，理化结合法β-丙内脂/紫外照射法第六十九页，共一百零九页，2022年，8月28日②去除病毒色谱法第七十页，共一百零九页，2022年，8月28日2、人尿液制品正常人尿是人代谢排出的无菌的液体，并且已知尿中含有50多种物质，其中95％左右是水，

无机物质：钠、钾、氯、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、钙离子等；

有机物质：尿素、尿激酶、表皮生长因子、生长激素、促红细胞生长素、促性腺激素、血管舒缓素和抗肿瘤肽类物质等，都是对人体有益的物质。

第七十一页，共一百零九页，2022年，8月28日

（1）尿液中的生物活性物质尿激酶激肽释放酶尿抑胃素人尿胰蛋白酶抑制剂人绒毛膜促性腺激素促红细胞生长素第七十二页，共一百零九页，2022年，8月28日①尿激酶

人血液中的尿激酶原在部分降解后从尿液中排出的一种丝氨酸蛋白酶，为血纤蛋白溶酶原激活剂，可将纤溶酶原转化为纤溶酶。

该品主要用于血栓栓塞性疾病的溶栓治疗：急性心肌梗塞、急性脑血栓形成和脑血管栓塞、肢体周围动静脉血栓、中央视网膜动静脉血栓及其他新鲜血栓闭塞性疾病。以及肾移植、整形外科手术等出现的血栓形成，均有较好的疗效。第七十三页，共一百零九页，2022年，8月28日②激肽释放酶一种丝氨酸蛋白酶，能使激肽原释放出一种多肽——激肽，它具有很高的生理活性，在人体组织中起着十分重要的生理作用。发现激肽释放酶－激肽系统（kallikreinkininsystem，KKS）作为一个复杂的内源性多酶系统，参与调控心血管、肾脏、神经系统等的生理功能，与心脏病、肾病、炎症反应、癌症等疾病的发生有着密切关系。第七十四页，共一百零九页，2022年，8月28日③尿抑胃素是从妊娠妇女的尿中提取出HCG(绒毛膜激素)之后所分离到的一种高分子糖蛋白抑制胃分泌盐酸的一种肠胃激素。其结构与人的表皮生长因子相同。还能促进表皮生长。在临床上主要用于治疗十二指胃溃疡第七十五页，共一百零九页，2022年，8月28日④人绒毛膜促性腺激素(HCG)人绒毛膜促性腺激素是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，第七十六页，共一百零九页，2022年，8月28日绒膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素(HCG)由胎盘滋养层合体细胞分泌的一种糖蛋白。第七十七页，共一百零九页，2022年，8月28日适应症：（1）维持月经黄体的寿命，使月经黄体增大成为妊娠黄体；（2）促进雄激素芳香化转化为雌激素，同时刺激孕酮形成；（3）抑制植物凝集素对淋巴细胞的刺激作用，人绒毛膜促性腺激素可吸附于滋养细胞表面，以免胚胎滋养层细胞被母体淋巴细胞攻击；（4）刺激胎儿睾丸分泌睾酮，促进男性性分化；（5）能与母体甲状腺细胞TSH受体结合，刺激甲状腺活性。第七十八页，共一百零九页，2022年，8月28日胎盘为胎儿进行营养、呼吸和排泄的器官，并产生分泌素。

当分娩时，先是子宫收缩，然后子宫口扩张，胎儿突破羊膜产出，结扎并剪断脐带；最后子宫再次收缩，由底蜕膜的海绵层与子宫壁分离，将胎盘及胎膜排出。

3.胎盘制品

第七十九页，共一百零九页，2022年，8月28日第八十页，共一百零九页，2022年，8月28日第八十一页，共一百零九页，2022年，8月28日人胎盘作为补药在我国已有1000多年的历史了.《本草拾遗》中便以“胎胞”和“胞衣”加以记载。《本草纲目》中称胎盘为“紫河车”。“味甘或咸”、“性温”，具有“安心养血、益气、补精、解毒、补血”的作用，对“疲劳、消瘦、衰弱者”有奇效.人胎盘中含有多种维生素和酶，如卵泡激素、黄体激素、催乳素、溶菌酶、激肽酶、蛋白酶等第八十二页，共一百零九页，2022年，8月28日(1)人胎盘血白蛋白健康人胎盘血液经盐析、辛酸钠处理的方法或卫生部批准的其他适宜方法提取，经60℃10小时加温灭活病毒素制成。白蛋白含量96%以上，含适宜的稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注第八十三页，共一百零九页，2022年，8月28日①制造工艺提取：采用硫酸铵盐析、酸沉淀以及辛酸钠保护下的热处理等步骤，自胎盘浸液中提取白蛋白，纯化：并结合适宜的吸附剂吸附，或低温乙醇分段沉淀等处理步骤进一步提纯。（应含适量的稳定剂，每g蛋白质加0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。热处理：每批制品经60±0.5℃加温10小时处理。热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。第八十四页，共一百零九页，2022年，8月28日分批：同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。半成品检定：液体制剂于除菌过滤后应做理化检查及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。冻干：除菌过滤后，制品应及时分装、旋冻，并按《人血白蛋白制造及检定规程》项规定进行冻干。第八十五页，共一百零九页，2022年，8月28日②适应症：失血创伤及烧伤等引起的休克。脑水肿及大脑损伤所致的颅压升高。防治低蛋白血症。肝硬化或肾病引起的水肿或腹水。新生儿高胆红素血症。第八十六页，共一百零九页，2022年，8月28日(2)促性腺激素释放素（GnRH）促性腺激素释放激素是下丘脑分泌产生的神经激素，对脊椎动物生殖的调控起重要作用向雌性动物注射促性腺激素，可以促进其超数排卵。对供体雌性动物和受体动物注射促性腺激素，提高胚胎在受体雌性动物体内的成活几率。第八十七页，共一百零九页，2022年，8月28日(3)人胎盘免疫调节因子(HumanPlacental

ImmunoregulatoryFactorHPIFHPIF具有免疫调节活性,能提高机体的细胞免疫和体液免疫水平。动物试验及临床应用证明:使用安全、无毒副作用、无抗原性。HPIF是一种较为理想的免疫调节剂。第八十八页，共一百零九页，2022年，8月28日制备工艺：健康新鲜胎盘,洗净、剪去脐带、羊膜及大血管,剪碎,称重,加生理盐水,再用匀浆器捣碎,于低温冰箱及室温中反复冻融数次透析(各家不全相同,有的用静置法透析36～48小时;有的用负压透析12小时;有的则用超滤代替透析),取透析液定浓度,除菌过滤后分装安瓿,封口第八十九页，共一百零九页，2022年，8月28日第二节人体来源生物制品制备实例

（Exampleofbio-preparateapplicationtohuman）一、人血浆白蛋白制剂的制备（preparateofhumanbloodplasmaalbumin

）

血（无抗凝剂）→自然凝固→分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝血因子等）血+混合抗凝剂草酸铵草酸钾离心上清血浆总蛋白：6.2-7.9%白蛋白：3.8-4.8%水：90-92%（现常用肝素、柠檬酸钠）第九十页，共一百零九页，2022年，8月28日（1）结构和性质（structureandcharacter）白蛋白（albumin）又称人血浆白蛋白，约占血浆总蛋白的65%。是维持血浆胶体渗透压的主要物质。白蛋白为单链分子pI为4.7，易溶于水，在60%硫酸铵饱和度以上沉淀。对酸较稳定，受热变性。从人体中分离的白蛋白有两种：人血浆白蛋白和胎盘白蛋白。第九十一页，共一百零九页，2022年，8月28日（2）工艺路线（图3-1）

2%利凡诺、NaHCO3pH8.6,离心分离络合物蒸馏水NaCl、HCl弱酸性，65℃，离心离心液浓缩超滤浓缩液灭活病毒

65℃/h，60℃/10h热处理液除菌除菌过滤白蛋白液干燥冷冻干燥白蛋白图3-1白蛋白生产工艺路线去杂蛋白人血浆（%）第九十二页，共一百零九页，2022年，8月28日（3）工艺要点

①络合（利凡诺沉淀，乳酸依沙吖啶）：搅拌血浆用NaHCO3调pH至8.6，加等体积2%利凡诺溶液，搅拌后静置2-4h，分离上清与络合物沉淀。②解离：在沉淀中加灭菌蒸馏水。用0.5mol/LHCI调节pH至弱酸性，加NaCl至0.15%-0.2%，搅拌下进行解离。第九十三页，共一百零九页，2022年，8月28日③去杂蛋白：65℃恒温1h，离心分离出上清液。④热处理（60℃，10h）：灭活病毒。⑤冻干品白色疏松物体。白蛋白含量占95%以上，水分<1%，水溶后pH为，硫酸铵残量<0.01%，细菌学和热原质检测合格。第九十四页，共一百零九页，2022年，8月28日二、尿激酶（urokinase）的制备（1）天然尿激酶是由两条肽链通过二硫键连接而成。是丝氨酸蛋白酶，丝氨酸、组氨酸是活性中心必需的氨基酸。该酶底物专一性很强，血纤维蛋白溶酶原是唯一的天然蛋白质底物，作用于Arg-Val键上，使纤溶酶原转为纤溶酶。（2）尿激酶的pI为8-9。溶液状态不稳定。用于治疗各种新血栓形成或血栓梗塞疾病。第九十五页，共一百零九页，2022年，8月28日（3）工艺流程（图3-2）男性尿

沉淀10℃下,pH8.5上清尿液酸化pH5.0-5.5酸化尿吸附硅藻土，5℃硅藻土吸附物洗涤5℃，水硅藻土柱洗脱0.02%氨水，0.1mol/LNaCl饱和NaH2PO4,调pH8.0洗脱液去热源、色素DEAE-SephadexA50柱，pH8.0,（二乙氨乙基葡聚糖）流出液（活性部分）浓缩羧甲基纤维素（CMC柱，pH4.2)CMC柱洗脱（HAC-NaAC)氨水+NaCl,pH11.5-11.8洗脱液透析H2O,4℃透析液冻干成品图3-2尿激酶生产工艺路线第九十六页，共一百零九页，2022年，8月28日（4）工艺要点①收尿：男性尿，8h内处理。调尿液pH6.5以下。②硅藻土吸附：加入1%的硅藻土，5℃下搅拌吸附1h。③洗脱：硅藻土吸附物用5℃冷水洗涤后装柱，当洗脱液由清变浑时开始收集。④除热原、色素：收集液用饱和NaH2PO4，调pH8.0，加NaCl调电导至22M/Ω，过DEAE-SephadexA50层析柱，收集流出活性部分。第九十七页，共一百零九页，2022年，8月28日⑤CMC浓缩：流出液用1mol/LHAc调至pH4.2，用蒸馏水调电导至16-17M/Ω，通过CM-C层析柱。用10倍体积的pH4.2的HAC-NaAc缓冲液洗涤柱床。洗后用0.1%氨水0.1mol/LNaCl溶液洗脱尿激酶。收集活性组分，杂质被吸附。⑥产品质量：无色澄清液或白色冻干粉末。酶活力>15,000IU/mg蛋白质。第九十八页，共一百零九页，2022年，8月28日三、绒膜促性激素（HCG）的制备（1）HCG的性质（characterofHCG）HCG是一种糖蛋白，由α、β两亚基组成，易溶于水，pI为。HCG由胎盘滋养层合体细胞所分泌。妇女妊娠45-70天，尿中HCG含量可达。治疗女性不育症，神经性皮炎。男性性功能过低症和隐睾症，子宫出血和习惯性流产。第九十九页，共一百零九页，2022年，8月28日

图3-3HCG生产工艺路线孕妇尿尿：苯甲酸-乙醇（饱和液）：乙醇（1：0.075：5）用HCl调pH4-5HCG(粗品）提取NaACpH4.8提取液透析水，5℃以下透析内液吸附（CMSepharoseCI-6B）羧甲基琼脂糖凝胶吸附后交换剂洗涤Ⅰ，Ⅱ峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗涤后交换剂洗脱NaAC,pH8.5洗脱液冷冻干燥

—30℃HCG精品

溶解蒸馏水，10℃以下HCG溶液透析pH6.8,5℃以下透析内液吸附羟基磷灰石，pH6.8吸附物解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS),pH6.8解吸液冷冻干燥—30℃HCG纯品（2）HCG生产工艺路线粗制第一百页，共一百零九页，2022年，8月28日（3）工艺要点①吸附粗品：先用HCl调孕妇尿至pH4-5，加苯甲酸—乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇=1:0.075:5）搅拌1h静置2-3h，过滤，弃滤液，得吸附物。在搅拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生，静置过夜，离心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗制品。第一百零一页，共一百零九页，2022年，8月28日②提取：在4℃下加10倍量0.067mol/L、pH4.8醋酸盐缓冲液，搅拌4h，离心，取上清液。沉淀再提取2h。合并两次提取液，弃去沉淀。③离子交换层析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸盐缓冲液平衡后进行层析上柱。依次用pH4.8、