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文档简介

1）将已配制好的三种不同pH的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液于9支试管中按表1要求，进一步稀释至一定浓度。(每种pH值的缓冲液配置3种浓度,共9管)表1三种不同离子强度的稀释表稀释后的缓冲液浓度（mol/L）0.2mol/L各种pH的缓冲液的加入量（ml）去离子水的加入量（ml）0.21000.105.05.00.157.52.5正交实验表2因素水平表因素水平A温度（℃）BpH值C离子浓度（mol/L）1352.60.102454.60.153556.60.22)将离子交换得到的E3用去离子水稀释蔗糖酶液，使浓度达到50U/ml左右，共计12ml。3）另取9支试管，编号1-9，按表3中2、3列的要求，分别加入上述不同pH不同浓度的缓冲液2ml及蔗糖酶液（浓度50U/ml左右）1ml，混匀。4）按表3中第一列的要求，将1-9号试管分别放入相应温度的恒温水浴中保温10min。5）另取足量的0.2mol/L蔗糖液三份，分别置于35℃、

45℃、55℃水浴中保温5min（试管中保温）。6）向1-9号试管中，依次间隔1min（或2min）加入相同温度下保温过的0.2mol/L蔗糖液1ml，立即记时，摇匀，放回原来温度的水浴中，准确反应3min。7）按上述次序和时间间隔，加入1mol/LNaOH液0.5ml，摇匀。8）空白管：另取一支“0”号试管，加入50U/ml的酶液

1ml，1mol/LNaOH液0.5ml，摇匀，再加入蔗糖液（0.2mol/L）1ml及pH4.60.1M缓冲液2ml。9）分别于各管中吸取反应混合物0.5ml，加入去离子水1.5ml和3mlDNS试剂于血糖管中，放入沸水浴中准确反应5min，急速水冷后，稀释至25ml，摇匀。以空白管为参比，测出A540值。

A：温度B：pHC：浓度

列号123试验结果Yi：A540试号135℃2.60.2mol/L

235℃4.60.10mol/L

335℃6.60.15mol/L

445℃2.60.10mol/L

545℃4.60.15mol/L

645℃6.60.2mol/L

755℃2.60.15mol/L855℃4.60.2mol/L

955℃6.60.10mol/L

K1

T=∑Yi

K2K3k1

k2k3R

表3试验方案、结果及数据处理表四.数据处理1）数据记录：将上述试验的结果（9个数据），填入表

4中的Yi项内。2）数据整理及分析A.按表4要求，计算出各水平下试验结果总和，即第1、

2、3列上的K1、K2、K3并求出k1、k2、k3和k的R值（极差）。B.选出优水平组合：据R值的大小，排出因素显著性的顺序，比较k值选出优水平组合（即好的试验条件）。试验结果的计算方法

A因素列B因素列C因素列

K1y1+y2+y3y1+y４+y７y1+y６+y８

K2

y４+y５+y６y２+y５+y８y２+y４+y９

K3

y７+y８+y９y３+y６+y９y３+y５+y７

k1

K1／3

K1／３K1／３

k2

K２／３K２／３K２／３

k3

K３／３K３／３K３／３

R

kmax.-kmin.

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