香菇多糖的提取工艺研究

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材料与方法

1.1材料

1.1.1试验材料崭新香菇菌盖片面，购于盐城市亭湖区菜市场。

1.1.2仪器电子天平、抽滤机、离心机、电热恒温鼓风枯燥箱、粉碎机、水浴锅、旋转蒸发器、可见分光光度计、玻璃棒、棕色瓶、容量瓶、移液管、烧杯、试管、滤纸、抽滤瓶、刻度试管。

1.1.3试剂苯酚、葡萄糖、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水、丙酮等，以上试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1标准曲线的制作吸取葡萄糖标准溶液10mL定容至100mL，分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖稀释溶液于枯燥刻度试管中，各以蒸馏水补至2.0mL，然后参与5%苯酚溶液1mL后，急速参与浓硫酸5mL，振荡5min，沸水浴中加热10min，冷却，以蒸馏水做一致处理作为空白对照，在490nm处测吸光度，以葡萄糖浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线[7]（图1）。用最小二乘法做线性回归，得到葡萄糖浓度C（mg/mL）与吸光度A之间的回归方程为y=13.946x+0.0423，回归系数R2=0.9875。

1.2.2工艺流程香菇多糖的提取主要流程有烘干、粉碎、称样、浸提、抽滤、离心纯化、浓缩、醇提、定容、稀释、苯酚-硫酸法测量、测量吸光度。

葡萄糖得率=葡萄糖浓度×稀释倍数×原液体积/香菇粉末重×100%，而根据多糖和葡萄糖单糖之间的转化关系得到：香菇多糖得率=葡萄糖得率×0.9。

1.2.3单因素试验

1）料液比对香菇多糖提取的影响。称取香菇粉末3g4份，置于250mL锥形瓶中，分别参与蒸馏水60、90、120、150mL，混合平匀后置于85℃的水浴锅中，水浴提取2h，提取2次，测量不同料液比提取结果。

2）提取时间对香菇多糖提取的影响。称取香菇粉末3g4份，置于250mL的锥形瓶中，参与蒸馏水90mL，混合平匀后，置于85℃的水浴锅中，分别水浴加热1、2、3、4h，提取2次。

3）提取温度对香菇多糖提取的影响。称取香菇粉末3g4份，置于250mL的锥形瓶中，参与蒸馏水90mL，混合平匀后分别置于65、75、85、95℃的恒温水浴锅中2h。提取2次。

4）提取次数对多糖提取的影响。称取香菇粉末3g4份，置于250mL锥形瓶中，参与蒸馏水90mL，混合平匀，置于85℃水浴锅中，恒温水浴加热2h，分别提取1、2、3、4次。

1.2.4正交试验在单因素的根基上举行正交试验，对香菇多糖提取工艺举行优化。选择料液比、提取时间、提取温度与提取次数为考察因素，举行4因素3水平正交试验[8-10]，正交试验因素与水平如表1所示。

2结果与分析

2.1单因素试验结果

2.1.1料液比对香菇多糖提取的影响称取香菇粉末3g4份，放于250mL锥形瓶中，分别参与蒸馏水60、90、120、150mL，混合平匀后置于85℃的水浴锅中，水浴提取2h，提取2次，测量不同料液比提取结果如图2所示。

从图2中可以看出，从1∶20到1∶30多糖得率随料液比增大而增大，这可能是由于香菇中的多糖分散存在于有纤维组成的细胞骨架里，溶剂对多糖的提取务必使多糖分散到骨架内部使其溶解，其次料液比大于1∶30时，多糖得率随料液比增大而减小，其理由可能是多余的提取剂会破坏香菇细胞，细胞膜损坏，造成细胞液或其他细胞成分流出，使得测量结果降低，同时加水过多，会使提取液中的多糖浓度降低。香菇多糖提取的最正确料液比为1∶30。

2.1.2提取时间对香菇多糖提取的影响称取香菇粉末3g4份，放于250mL锥形瓶中，参与蒸馏水90mL，混合平匀后，置于85℃的水浴锅中，分别水浴加热1、2、3、4h，提取2次。从图3中可以看出，在3h前多糖得率随提取时间的增大而增加，但提取时间大于3h后，随着时间的增加得率反而下降。这是由于香菇多糖的提取实际上是一个物质分散的过程，随着时间的增加溶液浓度梯度越来越小，分散速度也就相对越来越慢，所以在确定温度范围内，随着时间的增加，有利于多糖的充分浸出。但又由于香菇多糖的恢复性对比强，若提取时间过长反而会与空气中的氧气发生氧化作用，导致多糖的提取率下降。香菇多糖的最正确提取时间为3h。

2.1.3提取温度对香菇多糖提取的影响称取香菇粉末3g4份，放于250mL锥形瓶中，参与蒸馏水90mL，混合平匀后分别置于65、75、85、95℃的恒温水浴锅中2h、提取2次。从图4中可以看出，隨着提取温度的增加，多糖得率增加，其理由是随着温度的升高，多糖在溶剂中的溶解度以及分散系数均会增加，说明糖从香菇中提取出来的速度也将变快，有利于多糖的提取。当温度高于85℃时得率明显降低，这可能是温度过高会使多糖氧化速度高于多糖提取速度，从而多糖得率不升反降。因此最正确提取温度应为85℃。

2.1.4提取次数对多糖提取的影响称取香菇粉末3g4份，放于250mL锥形瓶中，参与蒸馏水90mL，混合平匀，置于85℃水浴锅中，恒温水浴加热2h，分别提取1、2、3、4次，结果如图5所示。从图5中可以看出，提取1～2次，香菇多糖得率随着提取次数增加而明显增加，当提取次数达成3次时，再增加提取次数香菇多糖的得率根本不变还有稍微降低，因此提取3次已经足够充分，此时残渣中的多糖只存在微量，持续增加次数意义不大，又由于提取次数过多，轻易使多糖发生氧化作用，降低多糖得率，多糖提取最正确次数为3次。

2.2正交试验结果

在单因素试验的根基上举行正交试验，对香菇多糖提取工艺举行优化。选择提取时间（A）、料液比（B）、提取次数（C）与提取温度（D）为考察因素，举行4因素3水平正交试验，正交试验结果如表2所示。

4个因素中提取次数极差最大，对香菇多糖提取率的影响最大，提取温度极差也较大，而提取时间与料液比极差相对较小。故从极差分析中可得，影响多糖得率的主次关系为提取次数、提取温度、提取时间、料液比。香菇中多糖热水浸提的最正确条件为料液比1∶30、提取温度85℃、提取时间2h、提取次数1次。按该组合举行试验，并按照绘制标准曲线的方法在490nm处测定吸光度，多糖得率为5.61%。

3小结

通过分析可知单因素试验测得的最正确提取效果为提取时间3h，浸提温度85℃，料液比1∶30，提取次数3次。通过单因素试验和正交试验方法研究热水法浸提香菇多糖的最正确组合为：料液比1∶30、提取温度85℃、提取时间2h、提取次数1次。在最正确工艺条件下香菇多糖的得率为5.61%。4个因素中影响多糖得率的主次关系依次是提取次数、提取温度、提