临床微生物检验：衣原体立克次体

2023/2/13

衣原体

Chlamydia2023/2/13衣原体是一类有独特发育周期，专性细胞内寄生，能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。广泛寄生于人类和动物中，仅少数能致病。基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质和拟核。细胞壁主要由肽聚糖、外膜和脂多糖组成，与革兰阴性菌细胞壁相似。2023/2/13衣原体特点：（1）有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似，革兰染色阴性，光镜可见。（2）同时含DNA和RNA两种核酸。（3）有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢。（4）缺乏供代谢所需的能量来源，专性细胞内寄生,有独特的发育周期，二分裂方式繁殖。（5）对多种抗生素敏感。

2023/2/13伯杰系统分类法：衣原体目衣原体科衣原体属

沙眼衣原体肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体

兽类衣原体2023/2/13按分子生物学特性的分类法：（以16S和23S的rRNA基因序列进行分类基础）衣原体目可分为1～4个科。

第1科（衣原体科):分为2个属9个种。第2科（Simkaniaccae):只有2株一种。第3科（副衣原体科):新种为棘阿米巴副衣原体。第4科（未定名):WSU86-1044株。

2023/2/13主要病原性衣原体沙眼衣原体肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体2023/2/13关键点沙眼衣原体的生物学特性和实验室检查2023/2/13我国学者汤飞凡于1955年首先成功分离鉴定出沙眼衣原体。沙眼衣原体

（Chlamydiatrachomatis）2023/2/132023/2/13临床意义所致疾病沙眼：通过眼-手-眼途径直接或间接密切接触传播，致盲首位原因。包涵体结膜炎：由沙眼生物变种引起，经产道或污物而感染。泌尿生殖道感染：非淋菌性泌尿生殖道感染性病淋巴肉芽肿亚种：侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿。呼吸道感染：婴幼儿肺炎2023/2/13衣原体（血清型）感染部位所致疾病沙眼衣原体（A，B，Ba，C）眼沙眼沙眼衣原体

（B,D,E,F,G,H,I,J,K）眼包涵体结膜炎（成人和新生儿）沙眼衣原体（D~K）生殖道（男）尿道炎、附睾炎、直肠炎

输卵管炎、不育、肝周炎沙眼衣原体（D~K）生殖道（女）尿道炎、宫颈炎、直肠炎、

阑尾周围炎沙眼衣原体（L1~L3）腹股沟淋巴结性病淋巴肉芽肿沙眼衣原体（D~K）呼吸道婴儿肺炎肺炎嗜衣原体呼吸道咽炎、肺炎鹦鹉热嗜衣原体（羊株）生殖道（女）流产、死产鹦鹉热嗜衣原体（鸟株）呼吸道鹦鹉热鹦鹉热嗜衣原体（羊株）呼吸道肺炎常见衣原体血清型及所致疾病2023/2/13沙

眼

衣

原

体

沙眼早期：流泪、有粘液脓性分泌物、结膜充血及滤泡增生;晚期结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫以及角膜血管翳导致视力下降，严重者致盲。2023/2/13腹股沟性病淋巴肉芽肿2023/2/13患者，女，22岁。结婚后2年余始终未孕。医院妇科看病，白带量稍多，色微黄，无明显异味。偶有外阴瘙痒及尿频，尿急，尿痛。体查：宫颈轻度糜烂伴少许脓性分泌物。实验室检查：血常规正常，尿常规：WBC12/HP，中段尿细菌培养无菌生长。临床案例2023/2/13临床意义致病物质促进衣原体吸附易感细胞，侵入机体阻止吞噬体和包涵体融合，使衣原体得以生存类似革兰阴性菌感染的炎症反应和迟发性变态反应使细胞释放IL-1类细胞因子，导致机体损伤蛋白质LPS致病机理入侵机体→吸附易感细胞→细胞内陷形成包涵体→衣原体分裂繁殖→破坏细胞→释放→感染其它细胞2023/2/13

生物学性状

1.发育周期与形态染色

在宿主细胞内生长繁殖，具有独特的发育周期。

原体：小而致密，Giemsa染色呈紫色，呈圆形或椭圆形，有感染性。

始体（网状体）：大而疏松，Giemsa染色呈蓝色，无感染性，二分裂增繁殖，为繁殖型。

2023/2/13宿主细胞破裂，释放出的原体则感染新的细胞具有感染性的原体通过胞饮作用进入宿主细胞发育周期原体始体2023/2/13衣原体的增殖周期2023/2/13

性状原体始体形态球形或椭圆网状大小（μm）0.2－0.4

0.5－1.0细胞壁+

+代谢活性-

+胞外稳定性+

-感染性+

-繁殖能力-

+染色性(Giemsa)

紫色

蓝色2023/2/13细胞内原体和网状体2023/2/13包涵体：衣原体在易感细胞内繁殖后由始体和子代原体所构成的，有膜包绕的形态各异光镜下可见的块状物，可辅助诊断衣原体感染。

Giemsa染色呈深蓝色，碘染色呈黄褐色。原体逐渐增大成为始体。始体无感染性，但能在空泡中以二分裂方式反复繁殖，形成大量新的原体，积聚于细胞质内成为各种形状的包涵体。2023/2/132.培养特点与病毒相似——专性细胞内寄生。鸡胚：6～8日龄鸡胚卵黄囊内接种经3～6d在致死的鸡胚卵黄囊膜中找到包涵体、原体及始体颗粒。动物接种——小白鼠（腹腔、脑内、静脉）。各种传代细胞培养。常用的细胞株为HeLa-299和McCoy。2023/2/133.抵抗力耐冷不耐热;对红霉素、四环素、利福平敏感;对常用消毒剂敏感.

4.抗原结构与分型属特异抗原－脂多糖，位于细胞壁种特异抗原－主要外膜蛋白（MOMP）型特异抗原－MOMP氨基酸可变区，分型依据2023/2/13微生物学检查法标本采集沙眼和包涵体结膜炎病人，用拭子在结膜上穹窿涂擦或取结膜刮片。性病淋巴肉芽肿，抽取淋巴结脓汁，也可取直肠拭子或活检材料送检。检验程序

2023/2/13检验方法1.标本的直接检查①直接镜检——查包涵体眼结膜、尿道及子宫上皮细胞内发现有包涵体有诊断价值。Giemsa染色：原体——染成紫红色网状体——蓝紫色2023/2/13②免疫学检测

a.胶体金法检测衣原体抗原：2023/2/13胶体金标记抗衣原体脂多糖单克隆抗体（小鼠IgG）固相抗衣原体抗体固相抗小鼠IgG抗体2023/2/13b.免疫荧光检查2023/2/132.分离培养接种鸡胚卵黄囊或传代细胞，用直接免疫荧光法或酶联免疫法检测。（1）细胞培养

将标本拭子，用含抗生素处理后接种于McCoy、Hela-229细胞等。置5％CO2下培养。初代分离培养72-96h后传代或盲传。有症状病人90％标本第1代即可见包涵体，而无症状病人需传代后才得到阳性。敏感性为80％-90％，特异性100％，是目前确诊最可靠的方法，而且是评价实验室诊断法的标准。2023/2/13（2）鸡胚培养有细菌污染的临床标本加适当的抗生素(如链霉素、庆大霉素和制霉菌素等)肉汤，在室温中作用lh后，接种3-4只孵育7天的鸡胚卵黄囊，35℃孵育，观察至13天，收获卵黄囊涂片，作Gimenez染色，镜检原体。（3）鉴定将细胞培养盖片用Giemsa或碘染色镜检胞质内包涵体。Giemsa染色比碘染色敏感，可作为鉴别沙眼衣原体的参考。可用型特异性荧光血清鉴定其型别。对于卵黄囊和小鼠分离的材料可用免疫荧光法鉴定原体或补体结合抗原。

2023/2/133.核酸检测

1)核酸杂交：用125I标记的衣原体rDNA探针检测宫颈标本的敏感性和特异性，与培养相比分别为82.8％和99.4％。2)PCR：具有高度敏感性和特异性。一般按沙眼衣原体7.5kb质粒、MOMP

基因序列及16SrRNA基因序列设计引

物。2023/2/13防治原则预防：目前无特异性预防方法，主要应注意个人卫生，避免直接或间接触传染源。预防泌尿生殖道感染应搞好性病知识的宣传教育及时治疗。治疗：可选磺胺类、大环内脂类和喹诺酮类抗生素。2023/2/13肺炎嗜衣原体只有一个血清型TWAR生物学性状与其它种衣原体相差较大，包涵体中无糖原，因此碘染色阴性。经飞沫（呼吸道）传播，主要引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎多见，也可致气管炎、咽炎。肺炎嗜衣原体慢性感染可能与冠心病有关。常用H-292和Hep-2细胞培养2023/2/13肺炎嗜衣原体感染Hep-2细胞（免疫荧光染色）2023/2/13鹦鹉热嗜衣原体首先从鹦鹉中分离出来而命名，存在于动物肠道中，以气溶胶方式传播。包涵体不含糖原，碘染色阴性。鹦鹉热衣原体通过气溶胶经呼吸道传播，主要引起非典型肺炎。鹦鹉热嗜衣原体在猫眼结膜上皮细胞内2023/2/13AreobligateintracellularparasitesHaveacomplexdevelopmentalcycleCellwallsaresimilartothecellwallsofG-bProkaryoticmicrobeBinaryfissionSensitivetoantibioticsIntracellularparasitesContainingbothtwokindsofnucleicacidsIDENTIFICATION2023/2/13立克次体Rickettsia临床微生物学检验教研室临床微生物学检验教研室吴爱武2023/2/13关键点立克次体的共同特征致病立克次体的传播媒介和方式2023/2/13

立克次体(Rickettsia)是一类与节肢动物密切相关，专性活细胞内寄生的革兰阴性原核细胞型微生物，是引起斑疹伤寒、恙虫病、Q热等传染病的病原体。

纪念美国医师

H.T.Ricketts

而命名。2023/2/13分类与命名伯杰分类:

原核生物界薄壁菌门暗细菌纲立克次体目

立克次体科

无形体科全孢菌科

立克次体属—斑疹伤寒群、斑点热群

对人致病东方体属——恙虫病群

埃立克体属

2023/2/13

共同特征①多形态，革兰阴性，大小介于细菌和病毒之间，光镜下可见②专性活细胞内寄生③含有DNA和RNA两类核酸，二分裂增殖④以节肢动物为传播媒介或储存宿主⑤多为人畜共患病的病原体，引起发热出疹性疾病⑥对抗生素敏感CW细胞壁IM中间体CG染色体CM细胞膜2023/2/13

临床意义致病物质：内毒素：引起发热、休克等一系列反应磷脂酶A：引起溶血，细胞损伤等2023/2/13临床意义致病过程:

体虱鼠蚤人体局部淋巴结及小血管内皮细胞恙螨第一次入血

全身小血管内皮细胞高热、皮疹神经系统症状临床症状第二次入血心血管系统症状生长繁殖大量繁殖2023/2/13临床意义致病机制：立克次体

胞膜受体结合被吞入局部血胞内大量繁殖管内皮细胞内破坏红细胞第一次菌血症

溶血全身中毒症全身血管内皮细胞

发热、皮疹、脏器功能紊乱第二次菌血症

磷脂酶A磷脂酶A血管炎内毒素内毒素血管炎2023/2/13属种媒介昆虫传播方式所致疾病立克次体属普氏立克次体莫氏立克次体立氏立克次体人虱鼠蚤蜱虱粪-伤口蚤粪-伤口蜱叮咬流行性斑疹伤寒地方性斑疹伤寒斑点热东方体属恙虫病东方体恙螨螨叮咬恙虫病柯克斯体属贝纳柯克斯体蜱接触，呼吸道Q热巴通体属汉赛巴通体五日热巴通体蜱人虱猫抓/咬伤虱粪-伤口猫抓病战壕热2023/2/13

立克次体主要通过虱、蚤、蜱、螨的叮咬或其粪便经伤口等途径感染人体，产生内毒素与磷脂A等，直接破坏所寄生的血管内皮细胞，使细胞肿胀破裂、血管腔阻塞，造成组织缺血坏死、凝血机制障碍、DIC等病变。1、普氏立克次体流行性斑疹伤寒人虱人虱人人

2、莫氏立克次体地方性斑疹伤寒鼠蚤鼠人3、恙虫病立克次体恙虫病鼠恙螨幼虫人2023/2/13斑疹伤寒病人皮疹2023/2/13地方性斑疹伤寒病人皮疹2023/2/13

斑点热病人全身性红斑，出血甚至肢端坏死

有的立克次氏体酿成严重疾病，如人类的流行性斑疹伤寒、羌虫热、Q热等，并常伴随着灾害、战争和饥饿，曾长期与人类的痛苦、灾难联系在一起。2023/2/132023/2/13生物学性状形态染色

形态多样，球杆状为主，有细胞壁，革兰阴性，不易着色常用Giemsa染色呈紫红色。结构

与革兰阴性菌相似细胞壁脂多糖粘附宿主细胞微荚膜样黏液层抗吞噬2023/2/13鼠腹腔巨噬细胞中养虫病东方体2023/2/13巨噬细胞中养虫病东方体（棕黄色）2023/2/132023/2/13立克次体在胞内大量生长，胞核被压向一侧。不同立克次体的细胞内位置：普氏立克次体：细胞质分散存在；恙虫病东方体：细胞质近核处成堆存在；斑点热立克次体：细胞质内和核内生长；Q热柯克斯体：细胞质空泡（吞噬溶酶体）内生长；五日热巴通体：粘附于细胞外表面生长。2023/2/13生物学性状培养特性细胞培养专性细胞内寄生鸡胚卵黄囊接种接种动物:小鼠、豚鼠

9～12h分裂一代，最适生长温度为32～35℃抗原结构与革兰阴性菌非常相似

群特异性——脂多糖抗原种特异性——外膜蛋白2023/2/13生物学性状抵抗力

较弱，56℃数30min即被灭活，节肢动物粪便中可存活一年以上，对氯霉素、四环素类敏感。流行环节

传播媒介

节肢动物

储存宿主

寄生宿主

啮齿类动物

储存宿主2023/2/13（一）标本采集：

病人血液标本

活检或尸检材料

（二）标本直接检查1．免疫荧光检测2．核酸检测微生物学检查2023/2/13（三）分离培养与鉴定

1．动物接种分离立克次体

豚鼠(为常用初代分离动物)、小鼠2．鉴定

免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵黄囊、细胞培养物中的特异性Ag3.分离株繁殖与保存：鸡胚卵黄囊培养、细胞培养微生物学检查2023/2/13

大部分立克次体与普通变形杆菌某些菌株（X19、Xk、X2）的菌体抗原有共同的抗原成分，故可用这些变形杆菌的菌体抗原代替立克次体抗原与不同稀释度的患者血清做凝集反应，辅助诊断立克次体病。Weil-Felix反应（外斐反应）（四）抗体检测1．外斐反应结果见表。2023/2/13流行性斑疹伤寒4++-地方性斑疹伤寒4++-恙虫病--4+Q热---腺热--2+斑点热4+/++/4+-Weil-Felix实验的结果分析OX19OX2OXK2023/2/132．IFA试验

3．ELISA4．补体结合试验

5．其他：MA、IHA和LA试验等。

2023/2/13立克次体病血清学诊断方法诊断法最低阳性效价(倒数)检出抗体时间特点外斐反应>1602~3周缺乏敏感性及特异性，抗原易得，方法简便IFA16~64，Q热常≥128有现症诊断意义2~3周需用抗原少，群特异性，相当敏感，能区分Ig类别ELISAOD值0.25>对照1周IgM捕捉作早期诊断，适用于大批及微量标本CF8或162~3周不如IFA或ELISA敏感，非常特异，方法繁琐MA≥81~2周抗原纯度要求高，不如IFA敏感，比CF敏感IHA501~2周很敏感，群特异性，只在感染活动期才能检出LA641~2周晚期恢复期血清不敏感，群特异性2023/2/13普氏立克次体(R.prowazekii)流行性斑疹伤寒（epidemictyphus）虱传斑疹伤寒（louse-bornetyphus）典型斑疹伤寒（typicaltyphus）2023/2/13流行环节

传染源：

病人，不属于人畜共患病

储存宿主：

病人

传播媒介：

人虱传播方式：

人人虱

人2023/2/13所致疾病——流行性斑疹伤寒临床表现:

潜伏期（10～14d）高热、头痛、肌肉痛等（4～7d）皮疹神经、心血管和其他器官病变免疫力

病后免疫持久与地方性斑疹伤寒有交叉免疫2023/2/13斑疹伤寒立克次体(R.

typhi)地方性斑疹伤（endemictyphus）鼠型斑疹伤寒（murinetyphus）

莫氏立克次体（R.mooseri）2023/2/13流行环节

传染源：鼠储存宿主：啮齿类动物(主要为老鼠)传播媒介：鼠蚤或鼠虱传播方式：鼠鼠蚤人人虱

鼠虱2023/2/13所致疾病——地方性斑疹伤寒临床表现：

与流行性斑疹伤寒相似，但病情较轻，发病缓慢，持续时间短，很少侵害中枢神经系统免疫力

病后免疫持久与流行性斑疹伤寒有交叉免疫2023/2/13恙虫病东方体(R.tsutsugamushi)

恙虫病（akamushidisease，oryochubio）丛林斑疹伤寒（scrubtyphus）恙虫病立克次体2023/2/13流行环节

传染源：鼠储存宿主：恙螨传播媒介：恙螨

寄生于恙螨体内，可经卵传代。人若进入恙螨的孳生地，可能受感染(亦称“丛林热”)

若虫→成虫→虫卵↑↓鼠等←幼虫