2023年军事医学科学院考博微生物考题

军事医学科学院（博士)微生物2023年微生物ﻫ

1、毒力岛:毒力岛具有以下特点：1.编码细菌毒力基因簇的一个相对分子质量较大的(20~10０ｋｂ左右)染色体DNＡ片段;2.一些毒力岛的两侧具有反复序列和插入元件,但是也可以没有;3．毒力岛往往位于细菌染色体的tRNA基因位点内或附近,或者位于与噬菌体整合有关的位点,肠致病性大肠杆菌(EPEC）的LEE毒力岛就位于tRNAsｅｌC位点；4.毒力岛DNＡ片段的G+Cmol%、密码使用和宿主细菌染色体有明显差异，有的比宿主细胞的G+Ｃmoｌ％明显高，有的明显低；5．毒力岛编码的基因产物许多是分泌性蛋白和细胞表面蛋白，如溶血素、菌毛和血红素结合因子,一些毒力岛编码细菌的分泌系统（如Ⅲ型分泌系统）、信息传导系统和调节系统；６．一种病原菌可以有一个或几个毒力岛;7.一部分学者认为,细菌的毒力岛应当涉及位于噬菌体和质粒上的、与细菌的毒力有关的、其G＋C比例和密码使用与宿主细胞明显不同的DＮA片段;8.毒力岛也许与新发现的病原性细菌有关。2、定点诱变技术:是在体外特异性地取代、插入或缺失DＮＡ序列中任何一个特定碱基的技术,涉及盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等。ﻫ3、ＤNA微点阵芯片:寡核苷酸芯片的重要原理与cDＮＡ芯片类似，重要通过碱基互补配对原则进行杂交,来检测相应片段是否存在、存在量的多少。它与cDNA芯片的本质差别在于寡聚核苷酸芯片固定的探针为特定的DNA寡聚核苷酸片段（探针）,而后者为cDNA。基因表达芯片的两个重要参数是检测的灵敏度和特异性。ｃＤＮA芯片由于基因长短不同以至Tm值各异,众多的基因在同一张芯片上杂交，使得杂交条件很难同一，使得传统的cDNA芯片的分辨能力受到限制。寡聚核苷酸芯片序列选择通过优化,运用合成的一定长度(如20,30,70-ｍer等）的寡核苷酸单链探针代替全长ｃDNA点样，制成芯片。其优点:无需扩增,防止扩增失败影响实验；减少非特异杂交,能有效区分有同源序列的基因;杂交温度均一,提高杂交效率;减少二级结构。此外，寡核苷酸芯片还可以通过原位合成法制备,而cDNA芯片只能通过后者制备。上述特点使得寡核苷酸芯片的应用日益广泛。但是当寡核苷酸序列较短时,单一的序列局限性以代表整个基因，需要用多段序列。高密度的寡核苷酸芯片作为一个有力的工具广泛用于分析基因组数据,与传统的凝胶分析方法比较起来，具有成本低、高通量、高度自动化的优点，这些寡核苷酸芯片，已广泛用于用遗传变异扫描、分子条编码、基因表达检测及测序。寡核苷酸芯片重要用途涉及：１)临床诊断方面。用于研究人类多基因相关性疾病（如癌症、心血管疾病等），发现相关的基因及其互相作用机理,寻找初期发现,初期诊断的方法；同时还可制成外源性病原体相关基因芯片,如病毒性肝炎芯片等;2）基因功能研究。应用基因芯片可以开展DＮA测序、基因表达检测、基因突变性、基因功能研究、寻找新基因、单核苷酸多态性（SNＰ)测定等研究;３)药物筛选和新药开发。采用了基因芯片技术来寻找药物靶标,查检药物的毒性或副作用,用芯片作大规模的筛选研究可以省略大量的动物实验,缩短药物筛选所用时间,在基因组药学(pharmａcｏgenomicｓ)领域带动新药的研究和开发;并可指导实现合理用药。4)环境监测和指导高科技农业等。监测流行病和传染病扩散;监测有害微生物的发生和传播;农、林、牧、渔等产业的品种改良和病虫防治。5）其它。如DNA身份认定等。ﻫ4、细菌基因组学概念,意义。见下.

5、慢性乙型肝炎致病机理?乙型肝炎病毒(HＢV）属嗜肝DNＡ病毒科(hepadnａvirｉdae），基因组长约3．2kｂ,为部分双链环状DNＡ。HＢV只有3200bp,是一个相称小的病毒。其基因组共有四个OＲＦ，编码以下一些蛋白:Corｅ蛋白和pre-core蛋白,Pol蛋白，X蛋白,以及S蛋白(L,Ｍ,S)。Coｒe是核衣壳蛋白；Pre-core现在不知道有何功能,它对病毒的复制不是必要的，但是也许与克制宿主的免疫反映有关；X蛋白对病毒复制是重要的，还与肝癌的发生有关;S蛋白是病毒的包膜蛋白，与病毒进入细胞有关。HBV的致病机理尚未完全明了。鉴于乙肝临床类型可表现为多种多样(如急性肝炎、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎、重症肝炎及ＨBsＡｇ无症状携带者）,因而认为HBV的致病作用一般病毒不同。也许不是由于病毒在夺细胞内增殖而直接损害靶细胞,而很也许系通过机体对病毒的免疫反映而引起病变和症状。ﻫ１特异性抗体:受乙肝病毒感染后，机体可产生三种抗体，抗HBs、抗HBc及抗HBe。但抗HBｓ仅能作用于细胞外的HBV,在防止感染上较重要，而在疾病恢复时尚需细胞免疫协同作用。

抗ＨBc的出现反映了HBV新近感染及正在体内进行增殖，因此，它可用为HＢV在体内复制的一个指标。抗Hｂe能使病毒活力减少，也许有保护作用,但机制不同样。ﻫ２免疫复合物的损伤作用：在乙型肝炎病人血循环中常可测出HＢsAg—抗HBs的免疫复合物。免疫复合物可引起Ⅲ型变态反映,其中以关节炎和肾炎最为常见。3细胞介导的免疫反映:目前认为HBV是非溶细胞性的,即不会增殖裂解被感染的细胞。因此，机体清除乙肝病毒重要依赖T细胞（Ｔc，T杀伤细胞）或通过抗体介导的K细胞来杀伤靶细胞,将病毒释放于体液中,以后再经抗体作用。实验研究发现，凡转为慢性肝炎者,一般T细胞数及功能较低下。因此,推测也许乙型肝炎病人T细胞功能强弱与临床过程的轻重和转归有关。Dｕdleuy认为,当T细胞免疫功能正常，受病毒感染的肝细胞不多时,乙肝病毒不久被细胞免疫配合体液免疫予以清除,这时，由细胞免疫所导致的急性肝细胞损伤可完全恢复。如T细胞免疫功能低下,免疫反映局限性以完全破坏被病毒感染的肝细胞，或亦不能产生有效的抗HBs,或即使抗HＢs却无法作用于细胞内的病毒，连续在肝细胞内的病毒可引起免疫病理反映而导致慢性连续性肝炎。如机体对病毒完全缺少细胞免疫反映,既不能有效地清除病毒，亦不导致免疫病理反映，结果出现ＨBｓAg无症状携带症状。假如T细胞免疫功能过强，病毒感染的细胞又过多,细胞免疫反映可迅速引起大量肝细胞坏死,临床上表现为暴发性肝炎。但上述学说尚未被完全证实,通过进一步的研究，多数人认为细胞免疫和体液免疫互相配合发挥免疫作用。因此，抗体介导的K细胞作用已日益受到重视，并认为是杀伤靶细胞的重要免疫机制。除上述Ｔ细胞作用低下外，尚有人认为慢性活动性肝炎的发生与Ｔ细胞克制性功能低下,Tc细胞或K细胞的杀伤功能过强有关,从而导致肝细胞连续损伤。ﻫ4自身免疫反映:ＨBV感染肝细胞后，一方面可引起肝细胞表面抗原的改变，暴露出膜上的肝特异蛋白抗原，另一方面也许因ＨBsＡg具有与宿主肝细胞蛋白相同的抗原,从而诱导机体产生对肝细胞膜抗原成份的自身免疫反映。通过研究,发现确有部分乙肝病人存在对LSＰ的特异抗体或细胞免疫反映。一般认为，如病人在病程中出现自身免疫反映,则可加强对肝细胞的损伤而发展成为慢性活动性肝炎。正常人由于T细胞对自身抗体系统的调控,在清除老化或破坏的肝细胞时，虽可产生自身抗体,但并不发生自身免疫性疾病。在慢性肝炎,特别是慢性活动性肝炎时，由于T细胞免疫机能缺陷,乙型肝炎抗原（涉及HＢsAg,ＨBcAg及ＨBｅAg)与宿主肝细胞表面或内部的蛋白质互相作用,形成含自身组织蛋白的抗原，具有较强的免疫原性，可引起连续的自身免疫反映;也也许由于病毒使机体免疫系统稳定性发生紊乱,细胞免疫失去调控，体液免疫反映亢进，对宿主的自身组织产生抗体，发生自身组织免疫反映，引起肝细胞损伤。有人认为,肝炎患者病毒性损伤可释放肝特异抗原，使宿主致敏，并使肝损伤连续存在。因此,自身免疫反映在慢性活动性肝炎发病中具有一定的作用。目前已知在慢性活动性肝炎患者常出现某些自身免疫现象，如常伴有关节炎、皮疹、肾小球肾炎、慢性甲状腺炎及干燥综合症等自身免疫性疾病,患者血清中IgG、IgA及ＩｇM明显升高,血清中可查到抗平滑肌抗体、抗核抗体、抗线粒体抗体、抗肝细胞膜特异性脂蛋白抗体及类风湿因子等自身抗体;有１５~３0%的患者可查到狼疮细胞。

5乙型肝炎与原发性肝癌：近年来,关于乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的发生之间的关系,日益受到重视。国内外资料均提醒肝炎患者的肝癌发病率比自然人群高。肝癌病人有HBV感染指示者也比自然人群高。Ｍaupaｓ等就ＨBV与原发性肝癌的密切关系作了以下论证:

（１)乙型肝炎传染形成高度地方性的区域与原发性肝癌流行率高的地区，在地理上有相关性；

(2)与HBＶ相关的原发性肝癌是在全世界人口中较为流行的癌症之一；（3)HＢV感染可先于并经常随着原发性肝癌的发生;ﻫ(4)原发性肝癌常发生与乙型肝炎病毒有关的慢性肝炎或肝硬化的肝；

（５)在原发性肝癌患者取出的组织中存在ＨBV的特异性DNA及抗原;(6）有些原发性肝癌细胞系已能在培养中产生ＨBｓAｇ,并已证明HBV的DNA已能整合到这些细胞的基因组中。但对上述资料解释仍有不同观点：

1.HBＶ能引起致癌或促癌作用，须配合其它如遗传、内分泌、免疫与环境因素而导致肝癌；ﻫ2.肝癌是与HＢＶ无关的因素引起，但这些癌细胞也许对HBＶ特别易感,以致连续携带病毒。

6、细菌致病机理：侵袭力,毒素,Ⅲ型分泌系统(TypeⅢseｃreｔionｓystｅm),宿主因素

7、全基因组测序的原理和简要环节？全基因组鸟枪法测序的重要环节第一，建立高度随机、插入片段大小为2kb左右的基因组文库。克隆数要达成一定数量，即经末端测序的克隆片段的碱基总数应达成基因组５倍以上。第二,高效、大规模的末端测序。对文库中每一个克隆,进行两端测序，TIGＲ在完毕流感嗜血杆菌的基因组时，使用了14台测序仪，用三个月时间完毕了必需的28,４63个测序反映，测序总长度达6倍基因组。第三,序列集合。ＴIＧＲ发展了新的软件，修改了序列集合规则以最大限度地排除错误的连锁匹配。第四,填补缺口。有两种待填补的缺口,一是没有相应模板ＤNＡ的物理缺口,二是有模板ＤＮA但未测序的序列缺口。他们建立了插入片段为15-20kb的λ文库以备缺口填补。鸟枪法测序的缺陷随着所测基因组总量增大，所需测序的片段大量增长,各个片段重叠或一个连续体的概率是２n2-２n，高等真核生物(如人类）基因组中有大量反复序列,导致判断失误。ﻫ8、基因组研究进展近年来,病原微生物的基因组研究取得了飞速的进展。所谓基因组研究是指对微生物的全基因进行核苷酸测序，在了解全基因的结构基础上，研究各个基因单独或数个基因间互相作用的功能。由于过去人们大多从表型分析入手，寻找已知功能的编码基因,实际只了解微生物中很少数的基因，如链球菌的链激酶基因、结核杆菌编码的热休克蛋白基因等。尚有大量未知基因未被发现。通过基因组研究，则从主线上揭示了微生物的所有基因，不仅可发现新的基因，还可发现新的基因间互相作用、新的调控因子等。这一研究将使人类从更高层次上掌握病原微生物的致病机制及其规律，从而得以发展新的诊断、防止及治疗微生物感染的制剂、疫苗及药品。此外，新发现的微生物酶及蛋白还也许有在工农业生产上的应用价值。病毒基因组研究进展：目前对病毒的基因组研究已进入了后基因组阶段，即从全基因水平研究病毒的生物学功能,同时发现新的基因功能。对于医学病毒学当前重要方向是研究病毒基因组中与致病及诱生免疫应答相关的基因,从而揭示和解决迄今尚未解决的问题，以达成控制或消灭一些重要病毒感染的目的。目前可进行后基因组研究的领域为：1．病毒连续性感染：基因组中与连续性感染相关的基因，基因变异或调控因子研究。已报道的乙肝病毒的前核心基因出现终止密码突变，可逃逸机体对E抗原的免疫应答，有助于病毒连续感染。2．病毒与肿瘤的关系：已知ＥB病毒、人乳头状瘤病毒、乙肝病毒等均与肿瘤相关。对这些病毒的基因组或基因变异研究，有也许揭示部分致瘤的机理,如最近报道ＥB病毒ＬMP－1基因羧基端缺失30个碱基对，也许具有更高的致癌性。3.病毒变异株或新出现毒株的致病性改变：如近来发现肺出血性汉坦病毒,对人致病的H5禽流感病毒以及复制性特别强的乙肝毒株等，对嗜性改变的巨细胞病毒从基因水平进行了研究。4.病毒编码复制酶基因及其调控的研究：有些病毒具有独特的复制酶，如对人免疫缺陷病毒酶的研究导致开发出有效的抗病毒制剂。尚有一些病毒(如丙型肝炎病毒)复制酶的编码基因虽已明确，但未能大量在体外表达，并且对这些酶在细胞内病毒复制中所起的作用也不清楚,延误了抗病毒制剂的开发,应抓紧进行研究。5.病毒受体的研究:已知病毒受体多数是复合型，近来发现人免疫缺陷型病毒的受体除CＤ4外尚有副受体。受体是病毒入侵细胞的第一关，通过全基因组研究将更有助于发现复合的病毒受体。综上所述,本世纪后期已从基因组水平研究病毒的功能，因此，我们应注意将病毒基因的研究重点转移到研究病毒基因与细胞的互相作用中来，以开辟对病毒致病机理研究的广阔天地。细菌基因组研究进展：1．细菌全基因组测序的基本方法由于细菌基因组一般在数百个kb至数个Ｍb，快速测序的策略用经典鸟枪法（shotguｎ）建立基因文库,然后随机克隆测序。第一个完毕全基因测序的嗜血流感杆菌就是用此法完毕的。鸟枪法的基本环节为先将细菌的染色DNA机械地随机切割成一定相对分子质量范围的片段,分别构建大小两套文库。小片段（1～２kｂ）经末端修补解决后克隆入如pＵC１8质粒载体内；大片段(15~20kb）克隆入λ噬菌体载体中,然后进行大规模测序。以后则需进行序列的缺口填补。缺口填补是关键环节,一般需用几种方法互相组合才干完毕，花费的时间及精力很多。能否完毕缺口填补有时会成为完毕全基因组测序的关键。获得全基因组的资料后，还要运用计算机软件进行数据分析，推测ORF是否为真实的蛋白编码序列，检查功能位点，分析共有序列或特性序列（启动子,信号肽，保守基序conseｒvedｍotiｆs)等。如不是私人公司支持的研究,全基因组的研究资料将在杂志或互联网络上发表,供科学界参考和使用。2.迎接挑战过去我国微生物界的老一代专家曾在学术上作出过卓越奉献。建国以来老中青学者们在反细菌战、发展疫苗、建立诊断试剂等方面，为控制传染性疾病获得了大量成果。因此开展微生物基因组研究具有较强的实力。建议采用以下路线:(1)选择我国特有的或对发展中国家影响大的微生物，进行基因组测序。由于我国经济实力有限，只宜选择少数微生物进行。尽量选择国外尚未进行过的微生物为对象。通过这项研究，可使我国微生物界有少数骨干掌握细菌基因组研究的策略和技术全过程,有助于此后基因组功能研究的开展。（2）对于已公布的基因组要及时掌握,根据我国的需要进行序列分析,选择好有限目的对几种细菌作基因功能研究。应注旨在基因功能研究中，学习与借鉴病毒基因功能研究的已有经验。微生物学家不仅要将分子水平研究与细菌的生物学特性互相联系，还要联系临床及流行病学科、药物学科、生化学科和免疫学科。此外还需要建立合用的细胞及动物模型，以保证基因研究有后劲。（3）加强微生物界学者在细胞生物学、生物信息学以及生物大分子学方面的知识更新，以适应微生物学科将面临的革命性变化。估计此后的微生物诊断、治疗和防止都会有所改变,及早作好准备方可立于不败之地。2023年微生物

1Taｘonomy：分类学;表型（ｐｈeｎetic)2Cｌaｓsificaｔiｏn:分类：根据一定的原则对微生物进行分群归类，根据相似性或相关性水平排列成系统，并对各个分类群的特性进行描述,以便查考和对未被分类的微生物进行鉴定;命名（ｎｏmenｃlature):是根据命名法规,给每一个分类群一个专有的名称;3Identifｉcａtｉｏn:鉴定(iｄｅｎｔification或ｄeｔerminａｔiｏｎ):借助于现有的微生物分类系统,通过特性测定,拟定未知的、或新发现的、或未明确分类地位的微生物所应归属分类群的过程。４区别Wooｓe提出的三阶分类系统是什么？三域学说，把所有生物先分为古生菌域、细菌域和真核生物域,域下面再分界。1９77年,伍斯(CarｌWoｅse)以1６ＳrRNA序列比较为依据，提出的独立于真细菌和真核生物之外的生命的第三种形式—古生菌。伍斯认为它和真核生物以及真细菌（Eｕbactｅrｉa)是从一个具有原始遗传机制的共同祖先分别进化而来﹐因此将三者各划为一类,作为比界高的分类系统,称作“域”（Ｄｏmａin），目前这三域分别命名为细菌(Bacterｉa）、古菌(Ａrchａea）和真核生物(Eukaryａ)，其中古菌在进化谱系上更接近真核生物。在细胞构造上与细菌较为接近，同属原核生物，多生活于一些生存条件十分恶劣的极端环境中，例如高温、高盐、高酸等。

５病毒的致病机制?病毒对宿主细胞的直接作用根据不同病毒与宿主细胞互相作用的结果,可有溶细胞型感染,稳定状态感染、包涵体形成、细胞凋亡和整合感染5种类型。（1）溶细胞型感染:溶细胞型感染多见于无包膜病毒。如脊髓灰质炎病毒、腺病毒等。其机制重要有：阻断细胞大分子物质合成，病毒蛋白的毒性作用，影响细胞溶酶体和细胞器的改变等。溶细胞型感染是病毒感染中较严重的类型。靶器官的细胞破坏死亡到一定限度,机体就会出现严重的病理生理变化基侵犯重要器官则危及生命或留下严重的后遗症;（2）稳定状态感染：稳定状态感染多见于有包膜病毒,如正粘病毒，副粘病毒等。这些非杀细胞性病毒在细胞内增殖,它们复制成熟的子代病毒以出芽方式从感染的宿主细胞中逐个释放出来,因而细胞不会溶解死亡，导致稳定状态感染的病毒常在增殖过程中引起宿主细胞膜组分的改变,如在细胞膜表面出现病毒特异性抗原或自身抗原或出现细胞膜融合等。（3）包涵体形成：某些病毒感染后，在细胞内可形成光境下可见的包涵体。包涵体的存在与病毒的增殖、存在有关;不同病毒的包涵体其特性可有不同；故可作为病毒感染的辅助诊断依据。(４）细胞凋亡:病毒的感染可导致宿主细胞发生凋亡。（5)整合感染：某些DNＡ病毒和反转录病毒在感染中可将基因整合于细胞染色体中,随细胞分裂而传给子代,与病毒的致肿瘤性有关。多见于肿瘤病毒。此外，已证实有些病毒感染细胞后（如人类免疫缺陷病毒等)或直接由感染病毒自身,或由病毒编码蛋白间接地作为诱导因子可引发细胞死亡。病毒感染的免疫病理作用在病毒感染中,免疫病理导致的组织损伤常见。诱发免疫病理反映的抗原，除病毒外尚有因病毒感染而出现的自身抗原。此外,有些病毒可直接侵犯免疫细胞,破坏其免疫功能。（1)抗体介导的免疫病理作用许多病毒诱发细胞表面出现新抗原，与相应抗体结合后,激活补体，破坏宿主细胞。属Ⅱ型超敏反映。抗体介导损伤的另一机制是抗原抗体复合物所引起的，即Ⅲ型超超敏反映医`学教育网搜集整理。(2）细胞介导的免疫病理作用细胞毒性T细胞能特异性杀伤带有病毒抗原的靶细胞，导致组织细胞损伤。属Ⅳ型超敏反映。（3）免疫克制作用某些病毒感染可克制宿主免疫功能，易合并感染而死亡，如艾滋病。

6.DNA芯片和蛋白芯片微点阵的概念和用处?蛋白质微阵列（prｏteiｎｍｉcrｏarｒay）高密度的蛋白质阵列,是蛋白质阵列的发展。在几平方厘米的面积中可以包含几万个不同的蛋白质点，可用于大规模的分析。蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术,可用于蛋白质表达谱分析,研究蛋白质与蛋白质的互相作用,甚至DＮA－蛋白质、RNA-蛋白质的互相作用，筛选药物作用的蛋白靶点等。它具有以下优点:1.直接用粗生物样品(血清、尿、体液)进行分析2.同时快速发现多个生物标记物３.小量样品(ａsｆewas2023cellｓfoｒLＣMsaｍplｅs)4.高通量的验证能力(with1０0０sｏfsamplesamonth）5.发现低丰度蛋白质6.测定疏水蛋白质:与“双相电泳加飞行质谱”相比,除了有相似功能外,并可增长测定疏水蛋白质７．在同一系统中集发现和检测为一体,特异性高,运用单克隆抗体芯片,可鉴定未知抗原／蛋白质，以减少测定蛋白质序列的工作量。可以定量运用单克隆抗体芯片,由于结合至芯片上的抗体是定量的,故可以测定抗原量，但一般飞行质谱不用于定量分析。功能广：Ｉ．运用单克隆抗体芯片，可替代WesｔｅrnBlｏt；II.运用单克隆抗体芯片,可互补流式细胞仪局限性的功能,如将细胞溶解，可测定细胞内的抗原，并且灵敏度远高于流式细胞仪）。蛋白质芯片还面临着诸多挑战,未来的发展重点集中在以下几个方面：(１）建立快速、便宜、高通量的蛋白质表达和纯化方法,高通量制备抗体并定义每种抗体的亲和特异性；第一代蛋白检测芯片将重要依赖于抗体和其他大分子,显然,用这些材料制备复杂的芯片,特别是规模生产会存在很多实际问题,抱负的解决办法是采用化学合成的方法大规模制备抗体。(２）改善基质材料的表面解决技术以减少蛋白质的非特异性结合。(3)提高芯片制作的点阵速度；提供合适的温度和湿度以保持芯片表面蛋白质的稳定性及生物活性。(4)研究通用的高灵敏度、高分辨率检测方法，实现成像与数据分析一体化。此外,微流路芯片、芯片实验室与微阵列芯片技术并驾齐驱，是生物芯片技术的三驾马车，并逐步实现产业化。目前已经商品化的生物芯片多为微阵列芯片,而微流路芯片和芯片实验室正处在研究阶段。基因芯片(ｇeｎechip)(又称ＤNA芯片、生物芯片)的原型是8０年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列ＴATGＣAATCＴAＧ,与基因芯片上相应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过拟定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。目前已有多种方法可以将寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。这些方法总体上有两种,即原位合成(insitusyntheｓis）与合成点样两种。支持物有多种如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，但需经特殊解决。作原位合成的支持物在聚合反映前要先使其表面衍生出羟基或氨基（视所要固定基因芯片的分子为核酸或寡肽而定）并与保护基建立共价连接；作点样用的支持物为使其表面带上正电荷以吸附带负电荷的探针分子,通常需包被以氨基硅烷或多聚赖氨酸等。生物芯片技术重要涉及四个基本要点:芯片方阵的构建、样品的制备、生物分子反映和信号的检测。1、芯片制备,先将玻璃片或硅片进行表面解决,然后使ＤNA片段或蛋白质分子按顺序排列在片芯上。2、样品制备，生物样品往往是非常复杂的生物分子混合体，除少数特殊样品外，一般不能直接与芯片反映。可将样品进行生物解决，获取其中的蛋白质或DNA、ＲNＡ,并且加以标记，以提高检测的灵敏度。３、生物分子反映,芯片上的生物分子之间的反映是芯片检测的关键一步。通过选择合适的反映条件使生物分子间反映处在最佳状况中,减少生物分子之间的错配比率。4、芯片信号检测,常用的芯片信号检测方法是将芯片置入芯片扫描仪中,通过扫描以获得有关生物信息。在实际应用方面,生物芯片技术可广泛应用于疾病诊断和治疗、药物筛选、农作物的优育优选、司法鉴定、食品卫生监督、环境检测、国防、航天等许多领域。它将为人类结识生命的起源、遗传、发育与进化、为人类疾病诊断、治疗和防治开辟全新的途径，为生物大分子的全新设计和药物开发中先导化合物的快速筛选和药物基因组学研究提供技术支撑平台ﻫ7.比较基因组学概念、技术方法及应用?比较基因组学(CｏｍparatiｖeGenomics),是基于基因组图谱和测序基础上，对已知的基因和基因组结构进行比较，来了解基因的功能、表达机理和物种进化的学科。也可泛指不同基因组之间的比较分析。运用模式生物基因组与人类基因组之间编码顺序上和结构上的同源性,克隆人类疾病基因，揭示基因功能和疾病分子机制，阐明物种进化关系,及基因组的内在结构。方法及思绪:模式生物基因组研究揭示了人类疾病基因的功能，运用基因顺序上的同源性克隆人类疾病基因,运用模式生物实验系统上的优越性，在人类基因组研究中的应用比较作图分析复杂性状，加深对基因组结构的结识。比较基因组学的威力在于它能根据对一种生物相关基因的结识来理解、诠释甚至克隆分离另一种生物的基因。远缘基因组间的比较为结识生物学机制的普遍性,寻找研究复杂生理和病理过程所需的实验模型提供了理论依据,而近缘基因组间的比较则为结识基因结构与功能等细节提供了参数。

8.为什么动物源性的RNA病毒总是频繁的暴发流行?流感病毒（Inｆｌuenzａvｉrｕs，IV）属正黏病毒科，流感病毒属。病毒基因组由8个负链的单链RＮＡ片段组成,膜上具有血凝素和神经氨酸酶活性的糖蛋白纤突。根据抗原性的不同，可分为Ａ、Ｂ、Ｃ三型,其型特异性由核蛋白（NP)和基质(M)抗原的抗原性质决定。A型流感病毒可见于人类、多种禽类、猪和马及其他哺乳动物,Ｂ型和C型一般只见于人类。根据血凝素(HＡ)和神经氨酸酶（ＮA）的抗原特性，将A型流感病毒提成不同的亚型。目前,有1５种特异的HA亚型和9种特异的ＮA亚型。流感病毒属分节段RNA病毒，不同毒株间基因重组率很高，流感病毒抗原性变异的频率快,其变异重要以两种方式进行：抗原漂移和抗原转变。抗原漂移可引起HA和（或）NA的次要抗原变化，而抗原转变可引起HA和（或)ＮA的重要抗原变化。单一位点突变就能改变表面蛋白的结构,因此也改变了它的抗原或免疫学特性,导致产生抗原性的变异体。而当细胞感染两种不同的流感病毒粒子时,病毒的8个基因组片段可以随机互相互换,发生基因重排。通过基因重排有也许产生高致病性毒株。基因重排只发生于同类病毒之间,它不同于基因重组。SARS病毒RNA病毒在复制过程中不像DNA病毒,它的校对功能比较差,在这个过程中它很容易发生错误，而这种错误的修改能力比较差，人是从ＤＮA到RNA再到蛋白，它有一个修订过程，所以人不大会发生大的突变。病毒发生突变的因素之一就是校对功能比较差；是否尚有其它的因素还不清楚，还也许它感染的次数越多，受的影响越大,比如它接受动物体内我们目前还不清楚的细胞因子，或者动物吃进的食物里面有致它突变的东西，或者仅仅是由于动物暴露在宇宙射线的时间比人类长,所以有很多因素现在还清楚。

９.SAＲS-ＣｏV和禽流感病毒分别属于什么科?在基因组特性的区别?SARＳ-Cｏｖ大小约60~12０nｍ，是一群基因组最大的有包膜病毒,在动物宿主细胞的细胞浆内进行复制，基因组为单股正链RNA，长约30kb。有5'端帽子结构和3'端ｐoｌｙ(A)尾巴。在合适的宿主细胞中,病毒基因组5＇端的开放性阅读框(Oｐenreadinｇfｒeme，ORF)翻译成一个大的聚蛋白,后由病毒编码的蛋白酶切割，释放出几个非结构蛋白，涉及依赖于ＲNA的ＲNA聚合酶(Reｐ)和ATＰ酶螺旋酶(Ｈeｌ）。和其它冠状病毒同样,在ｒeｐ基因后边,有４个ＯＲF，从５'到3'依次编码预测结构蛋白Spike(S)、Envelope(E)、Meｍbrane（Ｍ)、Ｎｕcｌｅocａｐsid(Ｎ）,在基因组的5'和3'端尚有短的非翻译区(UTR)这些蛋白依次负责病毒基因组的复制和用于病毒蛋白合成的套式转录产物。这些亚基因组ｍRNA合成的机理还不完全清楚。病毒的膜蛋白涉及重要蛋白Ｓ和M。SARS-Ｃｏv亚基因组mＲNA的产生模型推测不连续转录也许发生于负链合成过程中。冠状病毒结构蛋白S、E、M和Ｎ的功能重要是病毒入侵宿主细胞、病毒子的形态及病毒子的释放。在病毒子装配过程中,Ｎ结合于病毒RNA上的特定的包装信号，导致螺旋状核衣壳的形成。M定位于特殊的细胞内膜结构,与M、E蛋白和核衣壳蛋白发生互相作用,致使病毒子通过膜释放。“SＡＲS冠状病毒全基因组芯片检测技术”通过了全国病毒检测领域的专家组成的专家组的鉴定。据专家介绍,这种SAＲS冠状病毒全基因组芯片覆盖了ＳARS冠状病毒基因组的所有序列，可以在检测SARＳ冠状病毒的同时全面监测该病毒全基因组变化,能灵敏和准确地检出SＡRS病毒。更为重要的是,这种SARＳ病毒全基因组芯片在检测ＳARＳ病毒的同时可给出ＳARS病毒基因组更具体的信息。因此，该项科研成果可广泛用于检查检疫领域、SAＲS病毒基因变异筛查、环境检测以及寻找SAＲS冠状病毒来源等方面。禽流感病毒的基因组由单股、负义RＮA片段组成,它的基因组是以不同的脱氧核糖核蛋白复合物(ｖRNP)的形式被包埋进病毒粒子中的,呈螺旋状。这些复合物的大小不同样,涉及病毒的ＲNＡ、核蛋白(ＮP)和病毒的多聚酶复合体(由PＢ2、ＰBl和PＡ三个亚单位组成)。禽流感病毒各基因片段的序列有一些共同的特点，8个基因节段的3’末端和5’末端都有保守的核苷酸序列,该结构是A型流感病毒的RNA多聚酶结合所必须的，此外，这些末端序列也可激活流感病毒多聚酶的内切酶活性,切下宿主成熟mRＮA帽子结构到病毒前体ｍRNA上。转录体病毒基因表达也进一步阐明末端保守序列在病毒基因表达过程中起着重要的功能。禽流感病毒基因组由８个节段、单股、负链RNＡ构成,分别以节段１节段8命名。片段1～3分别编码三个聚合酶蛋白PB2、PBｌ和PA;片段4编码血凝素HＡ；片段５编码核蛋白NＰ;片段6编码神经氨酸酶ＮA；片段7编码基质蛋白M1和离子通道M2；片段8编码非结构蛋白ＮＳl和NS2。.病毒粒子外的脂质囊膜伸出许多微粒，其中血凝素(HA）和神经氨酸酶(NA)是２种重要的糖蛋白，也是病毒表面抗原，根据HA和NA的不同,A型流感病毒又可区分为不同亚型,如H5Ｎｌ和H9N２，目前已鉴定１6种HA和9种NＡ亚型。PＢl、ＰB２、PA和NＰ是与ｒRNA结合形成核糖核蛋白复合物(RNPs)的中心蛋白,Ｍ2的离子通道活性使病毒子内的pH值改变,进而使M1蛋白与RNPs脱离。NS2的氨基酸末端区包含经典的核转运信号,并且可以与细胞的核转运因子ＣRMl作用，从而介导病毒蛋白从核内(翻译位点）运送到胞浆,故NS２又称出核转运蛋白(nｕclearexpoｒtprotｅin,NＥＰ)。ﻫ10.冠状病毒的基因组重要编码哪几种结构蛋白，简述它们的重要作用?、冠状病毒宿主范围严格，细胞培养条件较苛刻,人冠状病毒的适宜培养温度为33℃-35℃。冠状病毒中的传染性支气管炎病毒、猫冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒是重要的牲畜病原体。冠状病毒基因组为单正链RNＡ，具有感染性，全长约３0kｂ，基因组是已知RNA病毒中最大的。基因组结构为：５’-帽状结构—复制酶(rep)—刺突糖蛋白(S)—包膜蛋白(Ｅ）—基质膜糖蛋白（M）—核衣壳蛋白(N）—3’polyA尾。基因组中复制酶（rep）基因约占2/3，包含2个开放阅读框架:ORF１a和ORF1ｂ，编码的２个多聚蛋白经裂解后形成RNA依赖的RNＡ聚合酶(POＬ)和螺旋酶（ＨＥＬ),这些酶再反过来指导病毒基因组的复制,同时在负链合成期间产生套式的转录本(均3’－端相同)用于病毒蛋白质的合成。亚基因组mRNAｓ的合成是一个不连续的套式转录过程,亚基因组负链在其3’端有一个互补的先导序列可作为亚基因组mRＮAｓ合成的模板。冠状病毒的S蛋白为大的Ｉ型膜糖蛋白，S蛋白的三聚体形成刺突突出于病毒包膜表面，刺突可与宿主细胞受体结合，使细胞和病毒发生膜融合。某些冠状病毒的S蛋白可以裂解成S1和S2亚单位。Ｓ蛋白具有重要的病毒中和表位，Ｓ蛋白中氨基酸残基的改变能显著影响病毒的毒力和病毒对宿主细胞的亲嗜性。在病毒体装配期间,核衣壳蛋白(Ｎ）与病毒RＮA的包装信号结合，引导形成螺旋状核衣壳。核衣壳外是含S、M、E蛋白的脂质包膜。膜糖蛋白(Ｍ)的Ｎ-末端结构域暴露在病毒的表面,而C-末端在病毒膜里面。Ｍ蛋白的N-末端常被糖基化，Ⅰ组和Ⅲ组冠状病毒为N－糖基化，Ⅱ组冠状病毒为O－糖基化。M和E蛋白对病毒包膜的形成至关重要，M蛋白还能与N蛋白互相作用,将核衣壳装配成病毒。冠状病毒也编码许多功能未知的非结构蛋白,这些ORFs分别位于S和E之间、M和N之间或者N的下游，这些非结构蛋白在不同种类的冠状病毒中变化很大，但对病毒复制不是必需的。ﻫ１1．立克次体从其生物学特性到致病性。立克次氏体(Rickettsｉa）是一类专性寄生于真核细胞内的Ｇ-原核生物.是介于细菌与病毒之间，而接近于细菌的一类原核生物。一般呈球状或杆状，是专性细胞内寄生物，重要寄生于节肢动物，有的会通过蚤、虱、蜱、螨传入人体、如斑疹伤寒、战壕热。立克次体目中对人类致病的有五个属:立克次体属、柯克斯体属、东方体属、埃立克体属、巴通体属。传染途径：立克次氏体在虱等节肢动物的胃肠道上皮细胞中增殖并大量存在其粪中。人受到虱等叮咬时,立克次氏体便随粪从抓破的伤口或直接从昆虫口器进入人的血液并在其中繁殖,从而使人感染得病。当节肢动物再叮咬人吸血时，人血中的立克次氏体又进入其体内增殖，如此不断循环。立克次氏体可引起人与动物患多种疾病,如立氏立克次氏体可引起人类患落基山斑点热、普氏立克次氏体可引起人类患流行性斑疹伤寒、穆氏立克次氏体可引起人类患地方性斑疹伤寒、伯氏考克斯氏体可引起人类患Ｑ热以及恙虫热立克次氏体可引起人类患恙虫热。它与衣原体的不同处在于其细胞较大,无滤过性，合成能力较强，且不形成包涵体。致病机制：在进入体内后，立克次体先与宿主细胞上的受体结合，进入宿主细胞内,接下来会在在局部淋巴组织或血管内表皮组织内繁殖。然后经由淋巴液和血液扩散至全身血管系统内，导致大量细胞破损、出血。血管壁细胞破损后,血管通透性增强,血液渗出,在皮肤上表现为皮疹。有些立克次体在侵入宿主时，会释放出溶解磷脂的磷脂酶Ａ,大量聚集后会导致细胞破裂。立克次体还会释放脂多糖,因而导致内皮细胞损伤，出现中毒休克等症状。虽然不同的立克次体症状不同，但重要症状都为血管病变，有时还会出现血栓。由血管病变，立克次体还会引起神经、呼吸、循环系统的并发症。

12.biomarkｅr的概念,分析其技术方法？生物标记物(biomarkeｒ)是近年来随着免疫学和分子生物学技术的发展而提出的一类与细胞生长增殖有关的标志物。生物标记物不仅可从分子水平探讨发病机制,并且在准确、敏感地评价初期、低水平的损害方面有着独特的优势,可提供初期预警,很大限度上为临床医生提供了辅助诊断的依据。生物标记物已经是基础研究、药物研发、临床前期药物开发、临床检查等方面当仁不让的主力军,最杰出的表现则是在人类疾病诊断领域。根据最宏观的定义,生物标记物涉及所有针对正在进行的反映进程的生物学和化学指示剂。生理学家也通常将医学成像列为“生物标记物”。目前研发阶段中的产品涉及：用于监控疾病进程,药物有效性及毒性,癌症复发率,以及在药物测试中鉴别有效响应群体，等等。可以用于微生物鉴定的生物分子，举出五种并分析其特点，用处?根据目前微生物分类学中使用的技术和方法，可把它们提成四个不同的水平:①细胞形态和行为水平；②细胞组分水平；③蛋白质水平；④基因组水平。常规鉴定:1、形态结构和培养特性观测（细胞形态、群体形态);2、生理生化实验(运用物质、生化实验、与氧气温度的关系);3、生态学特性(与其他生物的关系、分布情况);4、血清学实验；5生活史;6、与噬菌体的关系。新方法鉴定：1、细胞壁组分分析：细胞壁组分分析一方面应用于放线菌分类中，把它作为区分“属”的依据之一。它比单纯用形态进行分类更全面。近年来,有人对18个属的放线菌的细胞壁进行了分析，根据细胞壁的氨基酸组成,将其分为6个细胞壁类型,又根据细胞壁的糖的组成提成4个糖类型，在此基础上，结合形态特性提出了相应的科属检索表。

2、红外光谱：一般认为,每种物质的化学结构都有特定的红外光谱。若两个样品的吸取光谱完全相同,可以初步认为它们是同一种物质。因此,红外光谱技术被应用到微生物的分类中。它先后对芽孢杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、酵母菌进行分类,近年来又用于放线菌分类中。借助于红外线光谱区分属内的种和菌株是困难的，但可以作为“属”的分类特性。3分子遗传学鉴定分类法是以微生物的遗传型(基因型）特性为依据,判断微生物间的亲缘关系,排列出一个个的分类群。目前较常使用的方法有:1DNA中（Ｇ+C）mol%分析

每一个微生物种的DNA中（Ｇ+C)ｍol%的数值是恒定的，不会随着环境条件、培养条件等的变化而变化,并且在同一个属不同种之间，DNＡ中（G+Ｃ)ｍol%的数值不会差异太大，可以某个数值为中心成簇分布,显示同属微生物种的（Ｇ+C)mol%范围。DNＡ中（G+Ｃ）ｍol％分析重要用于区分细菌的属和种，由于细菌DNA中（G＋C）mol%含量的变化范围一般在25%—75%;而放线菌DNA中(G+Ｃ）mol%比例范围非常窄(37％—51%）。一般认为任何两种微生物在（G+C）含量上的差别超过了1０％,这两种微生物就肯定不是同一个种。因此可运用(G+C)mol%来鉴别各种微生物种属间的亲缘关系及其远近限度。、２DNＡ-ＤNA杂交ﻫDNA杂交法的基本原理是用DNA解链的可逆性和碱基配对的专一性,将不同来源的DNA在体外加热解链,并在合适的条件下,使互补的碱基重新配对结合成双链ＤNＡ，然后根据能生成双链的情况,检测杂合百分数。假如两条单链ＤＮA的碱基顺序所有相同，则它们能生成完整的双链，即杂合率为100％。假如两条单链DNA的碱基序列只有部分相同,则它们能生成的“双链”仅具有局部单链，其杂合率小于7０%。由此,杂合率越高，表达两个DＮＡ之间碱基序列的相似性越高，它们之间的亲缘关系也就越近。3DNA－rRNA杂交

目前研究RNＡ碱基序列的方法有两种。一是ＤNＡ与ｒRNＡ杂交,二是16ＳｒRNA寡核苷酸的序列分析。DＮＡ与ｒRＮA杂交的基本原理、实验方法同rRNＡ杂交同样,不同的是:①杂交中同位素标记的部分是DNA,而ＤNA与rRＮA杂交中同位素标记的部分是rRＮA；②杂交结果用同源性百分数表达，而DNＡ与rＲNA杂交结果用Tｍ（e)和ＲＮA结合数表达。Tm(ｅ）值是DNA与rRNA杂交物解链一半时所需要的温度。RNA结合数是10０ugDＮＡ所结合的ｒRNA的ｕg数。根据这个参数可以作出RNＡ相似性图。在rＲNA相似性图上，关系较近的菌就集中到一起。关系较远的菌在图上占据不同的位置。用ｒRNA同性实验和1６SｔRＮA寡核苷酸编目的相似性比较rRNA顺反子的实验数据可得到属以上细菌分类单元的较一致的系统发育概念,并导致了古细菌的建立。

41６SrRNＡ（16SrDNA)寡核苷酸的序列分析ﻫ一方面,１６SrRNA普遍存在于原核生物(真核生物中其同源分子是１8ＳｒＲNA）中。rRNＡ参与生物蛋白质的合成过程，其功能是任何生物都必不可少的，并且在生物进化的漫长历程中保持不变,可看作为生物演变的时间钟。另一方面,在１６SｒRNA分子中,既具有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它合用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。第三,１6SrRNA的相对分子质量大小适中，约154个核苷酸，便于序列分析。因此,它可以作为测量各类生物进化和亲缘关系的良好工具。ﻫ１４.举例说明分子生物学技术在病毒研究中的应用？病毒检测、疫苗防止、治疗、新病毒鉴定分类、病毒基因组学、病毒蛋白质组学、病毒蛋白质研究、重组病毒、反向遗传学、病毒载体疫苗、病毒感染致病机、病毒蛋白质表达。1５.病毒的增殖过程?

病毒是非细胞形态的生命形式,它必需寄生在宿主细胞内才干生存，才干表现出它们基本的生命活动---增殖。病毒在细胞内的增殖过程重要涉及三个阶段:一、病毒侵入细胞,病毒核酸的侵染病毒辨认并粘附在宿主细胞的表面，通过“积极胞饮”和病毒包膜与细胞膜融合的方式进入细胞,在细其中核酸进入细胞,壳体留在细胞表面。壳体在细胞蛋白水解酶的作用下裂解，释放核酸入细胞内部。RNA病毒的核酸是在宿主细胞的细胞质中复制与转录;DNA病毒的核酸是在宿主细胞的细胞核内转录和复制的。二、病毒核酸的复制、转录与蛋白质的合成1、当DNＡ病毒进入宿主细胞后,在宿主细胞分泌的蛋白水解酶的作用下裂解病毒壳体，释放DNA进入宿主细胞核,在宿主细胞酶体系的作用下，运用宿主细胞代谢系统翻译成“初期蛋白”。初期蛋白具有两个功能:(1)关闭宿主细胞的基因调控,克制宿主细胞自身的核酸的复制、转录和翻译，导致宿主细胞裂解;(2）起到聚合酶的作用，在聚合酶的催化作用下，合成新的核酸物质和病毒蛋白。2、RNＡ病毒进入宿主细胞后，以自身的RNA为模板,在逆转录酶的作用下合成DNＡ,合成的ＤNＡ再与宿主细胞的ＤNA相整合。最终导致两个结果：(1)子代病毒核酸与蛋白质装配成新在病毒颗粒；（2）合成特异蛋白质,导致宿主细胞发生转型,转化为肿瘤细胞。三、病毒的装配、成熟与释放有两种方式:(1)新合成的核酸和蛋白质装配成核壳体,宿主细胞裂解，病毒释放；（２）核壳体包上宿主细胞的细胞膜，以出芽的方式释放。

2023微生物

细菌部分

1.Pathoｇenicｉty和vｉｒulence:致病性和毒力，细菌能引起疾病的性质，称为致病性或病原性。细菌的毒力是指病原菌致病性的强弱限度。构成毒力的物质基础重要涉及侵袭力(荚膜、菌毛、侵袭性酶）和毒素(内毒素、外毒素、其他毒素)。ﻫ2.刺激元(stimulon)ﻫ3.Biofiｌm：生物膜biofｉlm；ｂiomeｍbraｎe,细菌在生长过程中，粘附于物体表面,而形成的由细菌细胞及其分泌的含水聚合性基质（重要为胞外多糖）等组成的膜样多细菌复合体。具有致病性和耐药性，于细菌协调繁殖、信号转导与调控。４.超抗原:是指一类只需极低浓度（１-１０ng/ml）即可激活大量的T细胞(2%～2０%某些亚型T细胞克隆）活化,产生极强的免疫应答的抗因素子,但其激活不需要提呈细胞的加工解决，而是以完整的蛋白质形式提呈给T细胞,其一端不是与抗原肽结合槽结合而是直接与ＡPC膜上的MHＣⅡ类分子的非多态区外侧结合,形成超抗原MHC复合物;另一端直接与TCＲ的vβ片段外侧结合，以诱导免疫应答反映。因此T细胞对超抗原的辨认不受ＭＨC限制可选择性结合、活化具有同一vβ簇的多克隆T细胞，故其作用亦无严格的抗原特异性ﻫ5．GTL（写出原文即可):无。AＤCＣ:抗体依赖的细胞介导的细胞毒（ａntibody-ｄependeｎtcell-ｍediatｅdcytotoxｉｃiｔy）作用是指表达IｇGFc受体的NＫ细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等,通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgＧ抗体的Fc段结合,而杀伤这些靶细胞的作用。IgG抗体可介导这些细胞发挥ADＣC作用，其中NK细胞是能发挥ADCC作用的重要细胞。在抗体介导的ADＣC作用的发生过程中，抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，故抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，ＮK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。ﻫ7、试述细菌耐药的机制：耐药机制:细菌重要通过五种方式抵制抗菌药物作用,1产生灭活酶或钝化酶，使抗菌药物失活或结构改变；2抗菌药物作用靶位改变或数目改变，使之不与抗菌药物结合;3改变细菌细胞壁的通透性,使之不能进入菌体内;4通过积极外排作用,将药物排出菌体之外。此外,５细菌分泌细胞外多糖蛋白复合物将自身包绕形成而细菌生物被膜,也是导致耐药的因素之一。这些耐药机制不是互相孤立存在的,两个或更多种不同的机制互相作用决定一种细菌对一种抗菌药物的耐药水平。ﻫ细菌耐药性分类:(1）天然或突变产生的耐药,即染色体遗传基因介导的耐药。属于此种耐药性者如肺炎克雷伯菌和催产克雷伯菌可产生由染色体介导的青霉素酶,因而对氨苄西林和羧苄西林耐药等。(2）质粒介导的耐药性，即细菌因获得了由质粒、噬菌体或其他外来DNＡ片段，所致的细菌耐药，其所带的耐药基因易于传播，在临床上占有重要地位。

8、一种已知致病细菌侵入机体后并没有导致疾病的发生,请解释其因素。ﻫ1致病菌类型2机体有无抗体3体液免疫和细胞免疫

9、简述细菌的基因调节网络及其基本调节途径。ﻫ1、网络结构和信号输出;2、多个转导信号通路与其整合调节蛋白;３、多个靶基因；4、基因水平上,开关调节;５、ＤNA片段汇集；6、转录调节子的调节蛋白;7、转录的RNA及其蛋白组成；８、mＲNＡ转录速率，mRNＡ丰度;9、基因表达后的动态反馈环。ﻫ10、在Ｍedlinｅ上检索“pｌａgue”和“ｍicroaｒray”组合，发现如下６篇文章，请简述microarray在pｌague研究中的应用。ﻫ即Ｍｉcrｏａｒｒaｙ的应用，从检测;比较基因组;表达谱三方面综述。见上。

11、mＲNA丰度：指一种特定的mＲNA在某个细胞中的平均分子数。细胞中的mＲＮA根据其在细胞中的拷贝数,可分为两大类:一类为高丰度mＲNＡ,通常有100种左右的不同的mRＮA，每种ｍRNA的拷贝数在1,0００至10，０00间;另一类为低丰度mRNA,涉及约10，000种mRNＡ每种的拷贝数在１至10间。ﻫ病毒部分目前在临床上应用较为广泛（涉及正在进行临床实验）的病毒疫苗有哪几种形式（至少说出4种）?它们分别是如何制备的？各有何缺陷？灭活苗、冻干苗(弱毒苗）、基因工程苗、亚单位疫苗1乙肝疫苗:目前使用的乙肝疫苗是基因工程疫苗-－重组酵母乙肝疫苗和重组CHO乙肝疫苗,其重要成分是乙肝病毒的表面抗原,即一种乙肝病毒外衣壳蛋白,并非完整病毒。这种表面抗原不具有病毒遗传物质,不具有感染性和致病性，但保存了免疫原性，即刺激机体产生保护性抗体的能力。2轮状病毒疫苗：轮状病毒疫苗,属于生物制剂，该疫苗系采用轮状病毒减毒株感染新生小牛肾细胞,经哺育、收获病毒液后加入时宜的甜味保护剂制成。为橙红或粉红色澄清液体。3乙型脑炎疫苗：系将乙脑病毒经人工减毒使之失去致病性仍保存免疫原性的SA14-1４－２株，接种于原代地鼠肾细胞,经哺育繁殖后收获病毒,加入保护剂冻干制成。或用乙脑病毒接种于地鼠肾细胞，哺育后至一定浓度收获病毒液，经甲醛灭活，制成疫苗用于防止乙脑。4狂犬病疫苗：人用狂犬病疫苗既往种类较多，现今国内外多使用细胞培养疫苗。我国现在使用的有精制VERO细胞狂犬病疫苗和精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗，浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗已禁用。ﻫ13、简述流感病毒的抗原变异与流感病毒的关系。流感病毒是一种RNA病毒,遗传物质由八个不同的单股RNA组成。病毒外被脂质外膜,其中插入的两种糖蛋白─血凝素(heｍagｇluｔiｎin,，HＡ）和神经氨酸酵素（neｕrａminｉdase,NA）是最重要的病毒表面抗原,在表面呈放射状排列。ﻫ流感病毒可分为Ａ、B、C三型,以Ａ型最为常见。HＡ和ＮA是流感病毒亚型分类的基础，它们的抗原性变异也是导致不同限度之流感流行的因素。ＨA和NA的变异可分为两种。变异是小幅度的,由一连串渐进的点突变构成,即称做抗原飘移(ａntigｅniｃdrift)。当这种变异累积到一定限度时,就会导致新型的流感病毒产生，这种变异又称做抗原转移（aｎｔigeｎicshifｔ）。抗原转移的结果会使我们的免疫系统无法对抗这种新型的病毒,从而引起流感的大流行。抗原转移约每十年出现一次。

一般认为，流感病毒HA和NＡ的抗原性变异是由于人不同病毒株或人类和动物流感病毒基因之间的重组所导致的。当人类流感病毒和动物流感病毒(如禽类、猪等）共同感染同一个体并在同一细胞内复制时,来自不同病毒的RＮA片段之间可以发生互相重组，甚至重新配对。在新的子代病毒RNA中，部分来自人类病毒,部分来自动物病毒。

人们在每一次流感病毒流行期间，体内都会产生对抗病毒HA的保护性抗体，但这种抗体只对同种病毒株的流感病毒的感染具有免疫力,而对不同株流感病毒的感染缺少免疫力。１4、请举例说明抗病毒策略是依据病毒复制周期中的那些关键环节?病毒复制可分为吸附、穿入、脱壳使核酸暴露、转录为mRNＡ、转译成病毒复制酶、以原病毒核酸为模板,合成互补核酸链(cＤNA或者RNA)、再以互补核酸为模板，复制子代核酸、然后装配成新的病毒、自感染细胞释放等阶段。抗病毒药物的作用原理就是通过阻断病毒复制过程中的某个环节，达成克制病毒繁殖,控制病毒感染的发生和发展之目的。譬如，通过克制病毒穿入或脱衣、克制病毒ＤNA或RＮA的合成、克制病毒的DＮA多聚酶或核酸还原酶或特异性胸苷激酶、阻止晚期ｍRＮA和病毒蛋白的合成、诱生干扰素、激活巨噬细胞、促进机体非特异性和特异性防御功能等不同的途径，达成抗病毒的功效。

１5、SＡRS的实验室诊断技术及其原理。

SAＲS的实验室诊断技术分为常规的临床检查、病原学诊断和血清学诊断。临床检查是SARS诊断的辅助手段，血清学诊断和病原学诊断为临床提供初期或确诊ＳARS的依据。血清学诊断是检测SAＲＳ感染后病人血清中抗SARS冠状病毒抗体反映的情况，病原学诊断是检测SARＳ病人体内感染病毒的情况。目前应用于检测SARS抗体的血清学方法重要有间接免疫荧光实验、酶联免疫吸附实验、中和实验、胶体金技术和斑点酶免疫技术等;用于检测SAＲＳ的病原学方法重要有组织培养技术分离SＡRＳ冠状病毒、分子生物学技术检测SARS冠状病毒核酸、电镜和间接免疫荧光技术检测病人组织或细胞培养物中的病毒等。11、肝炎病毒涉及哪几大类?各属于哪个科？分别说明其基因组结构特性。人类肝炎病毒的类型»HAV:小RＮA病毒科;2７ｎm;RNA;７.５kb；粪-口途径传播。ﻫ»HBV:嗜肝DNＡ病毒科;42nm;DＮA;3.２ｋb;肠道外传播。ﻫ»HCV：黄病毒科；３６-6２nｍ；RNA;9.５kｂ;肠道外传播。ﻫ»ＨDV：卫星病毒科；36ｎｍ；RNA；1．7ｋb;肠道外传播。ﻫ»HEＶ:杯状病毒科；３2ｎm；ＲＮA;7.6nm;粪-口途径传播。»HＧV：黄病毒科；36-62ｎｍ；RNA;9.5kb;肠道外传播，与丙型肝炎相似。»TTＶ(TransfｕsiｏnTranｓｉmitｔedVｉｒｕs输血传播病毒）甲型肝炎的病原学»HAV属于微小RNA病毒科，原归属肠道病毒72型，因其具有嗜肝性,１991年被拟定为一个新属－肝病毒属。是一种无囊膜正２０面体颗粒,直径27ｎm，内含一条线形正股RＮA基因组,由衣壳包封成核壳体,即HＡV病毒体。HAV只有一种血清型。HＡV只有一个大的ORF，分P1P2P３三区,P２编码结构蛋白VP1-VＰ4。乙型肝炎的病原学»HＢV属于嗜肝病毒科的原型病毒（prｏtotyｐeｖｉｒｕs)。属于该属的尚有旱獭病毒、鸭乙肝病毒、苍鹭乙肝病毒等。

»HBV的完整病毒颗粒又称Danｅ颗粒，直径４2nm，由胞膜和核壳组成，胞膜具有HＢｓAg；核壳蛋白中含HBｃAg成分；在核壳内包裹约３.２kb大小的不完整双链的开环ＤNA基因组。HＢV基因组结构和功能»Ｈ