甾体激素类药物课件教案

氢化可的松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠、曲安奈德、甲睾酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、黄体酮、醋酸甲地孕酮、米非司酮、雌二醇、炔雌醇、炔诺酮和炔诺孕酮等甾体激素类药物的基本结构与分类、鉴别试验和含量测定。基本内容第1页/共94页第一页，共95页。掌握甾体激素类药物的基本结构与分类；各类药物的结构特征及其与分析方法的关系。熟悉甾体激素类药物的紫外分光光度法、四氮唑比色法和异烟肼比色法；柯柏反应比色法。了解甾体激素类药物的特殊杂质及其检查方法。基本要求第2页/共94页第二页，共95页。第一节基本结构与分类甾体激素是一类具有甾体结构的激素类药物维持生命调节性功能免疫调节皮肤病治疗生育控制甾第3页/共94页第三页，共95页。一、母核环戊烷骈多氢菲

C10、C13位上基团为角甲基1918甾第4页/共94页第四页，共95页。环上双键的表示方法：

用“”表示,双键的位置写在的右上角。双键位置4

1,4

5

5(10)

第5页/共94页第五页，共95页。甾环构型

β位取代α位取代第6页/共94页第六页，共95页。二、分类按生理作用分为：第7页/共94页第七页，共95页。1．肾上腺皮质激素皮质酮的衍生物4-3-酮结构去氧皮质酮第8页/共94页第八页，共95页。代表药物有：可的松氢化可的松第9页/共94页第九页，共95页。人工合成药物：地塞米松氢化泼尼松(泼尼松龙)第10页/共94页第十页，共95页。结构特点：

ⅰ．含有21个Cⅱ．A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮）

ⅲ．17位：醇酮基，有还原性。第11页/共94页第十一页，共95页。供分析官能团：ⅰ．A环的4-3-酮ⅱ．17位的醇酮基ⅲ．17、21-二羟基-20-酮

11位羟基或羰基受立体效应影响,无利用价值。第12页/共94页第十二页，共95页。2．雄性激素及蛋白同化激素睾丸素的衍生物第13页/共94页第十三页，共95页。代表药物：甲睾酮丙酸睾酮第14页/共94页第十四页，共95页。

蛋白同化激素在睾丸素基础上结构修饰得到，如苯丙酸诺龙第15页/共94页第十五页，共95页。结构特点：

ⅰ．含有19个C

ⅱ．A环的4-3-酮

ⅲ．17位羟基、甲基、酯供分析官能团：

A环4-3-酮第16页/共94页第十六页，共95页。3．孕激素黄体酮醋酸甲地孕酮第17页/共94页第十七页，共95页。安宫黄体酮米非司酮第18页/共94页第十八页，共95页。结构特点：

ⅰ．含有21个Cⅱ．A环的4-3-酮

ⅲ．17位甲酮基供分析官能团：

ⅰ．A环的4-3-酮

ⅱ．17位上的甲酮基。第19页/共94页第十九页，共95页。4．雌激素雌二醇炔雌醇第20页/共94页第二十页，共95页。

结构特点：

ⅰ．含有18个C

ⅱ．A环：苯环，

3位上有酚羟基，10位无甲基

ⅲ．17位：羟基、乙炔基供分析官能团：

A环的酚羟基及17位的羟基乙炔基第21页/共94页第二十一页，共95页。口服避孕药A环有4-3-酮结构；有的第17位有羟基和乙炔基；第10位无甲基。炔诺酮异炔诺酮第22页/共94页第二十二页，共95页。小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素214-3-酮醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OH-OH-C≡CH第23页/共94页第二十三页，共95页。第二节鉴别试验一、呈色反应

1．母核能与H2SO4，H3PO4，HClO4，HCl等呈色和荧光；

机制：母核的质子化。如：第24页/共94页第二十四页，共95页。与硫酸显色反应显色荧光加水稀释泼尼松龙

深红

-------

絮状↓灰泼尼松橙-----黄→蓝绿炔雌醚

橙红

黄绿

↓红色

炔雌醇

橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微带橙-----

褪色并澄清第25页/共94页第二十五页，共95页。Kober反应：

指雌激素与硫酸—乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应）第26页/共94页第二十六页，共95页。2．官能团①

C17-醇酮基:

肾上腺皮质激素类药物特征反应。

机理：C17-醇酮基有强还原性，与氧化剂作用，被氧化成水合醛。第27页/共94页第二十七页，共95页。TTC：氯化三苯四氮唑(红四氮唑－RT）BT：蓝四氮唑生成Formazan，用于皮质激素类药物鉴别和含量测定。+水合醛第28页/共94页第二十八页，共95页。②

羰基3位,20位羰基可与羰基试剂反应羰基试剂:羟胺、2,4-二硝基苯肼、异烟肼、氨基脲、苯肼等第29页/共94页第二十九页，共95页。第30页/共94页第三十页，共95页。③甲酮基--孕激素特征反应第17位的甲酮基和亚硝基铁氰化钠作用,形成蓝紫色的络合物。黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色第31页/共94页第三十一页，共95页。第32页/共94页第三十二页，共95页。④

乙炔基白炔雌醇第33页/共94页第三十三页，共95页。⑤

酚羟基：红色偶氮染料重氮苯磺酸雌激素类药物第34页/共94页第三十四页，共95页。有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ茜素氟蓝

硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈色(蓝紫色)氧瓶燃烧⑥有机卤素丙酸氯倍他索第35页/共94页第三十五页，共95页。香⑦水解产物的反应特臭特臭第36页/共94页第三十六页，共95页。△KOH

二制备衍生物测定m.p.△△第37页/共94页第三十七页，共95页。代表药物有：可的松氢化可的松第38页/共94页第三十八页，共95页。黄体酮第39页/共94页第三十九页，共95页。雌二醇炔雌醇第40页/共94页第四十页，共95页。甲睾酮丙酸睾酮第41页/共94页第四十一页，共95页。三、薄层色谱法TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法

要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。第42页/共94页第四十二页，共95页。3300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-1四、红外光谱法IR法

中国药典上收载的甾体激素类药物均有红外光谱图。3750～3300cm-1第43页/共94页第四十三页，共95页。醋酸可的松结构特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基醋酸酯第44页/共94页第四十四页，共95页。醋酸酯,C20–酮,C11–酮基,△4–3–酮基第45页/共94页第四十五页，共95页。结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇第46页/共94页第四十六页，共95页。第47页/共94页第四十七页，共95页。

一、有关物质

TLC（多采用自身稀释对照法，已经介绍）

HPLC（可与含量测定同时进行）（合成起始物、中间体、副产物、降解产物）第三节杂质检查第48页/共94页第四十八页，共95页。硒二、来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒原理方法第49页/共94页第四十九页，共95页。三、有机溶剂残留量(甲醇和丙酮)气相色谱法。四、游离磷酸原理：第50页/共94页第五十页，共95页。第四节含量测定一、紫外分光光度法1．原理

“C=C-C=C”或“C=C-C=O”共轭体系，有紫外吸收。4-3-酮结构，max在~240nmA环为苯环，max在~280nm第51页/共94页第五十一页，共95页。2．讨论①

前提是原料药中“其它甾体”必须合格，否则，不适用。需进行分离后再测定。如炔孕酮

测定制剂时，赋形剂在240nm附近有吸收需经前处理后测定。如醋酸地塞米松片,氢化可的松片和注射液,醋酸可的松片和注射液,醋酸泼尼松片,甲睾酮片,醋酸甲地孕酮片,炔雌醇片,炔诺酮片。第52页/共94页第五十二页，共95页。习题：醋酸氢化可的松滴眼液的含量测定方法如下：取本品，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置另一100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在241nm波

长

处

测

得

吸

收度A=0.408，求醋酸氢化可的松的标示百分含量。已知：醋酸氢化可的松的吸收系数E1%1cm=395；本品规格为3ml∶15mg.第53页/共94页第五十三页，共95页。(103.3%)

第54页/共94页第五十四页，共95页。二.四氮唑比色法

1．四氮唑盐的种类：（1）红四氮唑：

2,3,5—三苯基氯化四氮唑

2,3,5—triphenyltetrazoliumchloride）缩写TTC

或RT（Redtetrazolium）还原产物为不溶于水的深红色三苯甲第55页/共94页第五十五页，共95页。（2）蓝四氮唑：3,3’—二甲氧苯基—双—4，4’—（3,5—二苯基）氯化四氮唑{3,3-dianisole-bis[4,4’-(3,5-diphenyl)triphenyltetrazoliumchloride]}

缩写BT(Bluetetrazolium)，还原产物为暗兰色的双甲，第56页/共94页第五十六页，共95页。2．原理

17位-醇酮基具有还原性，在碱性条件下能将四氮唑盐定量地为有色的甲，在一定波长下具有最大吸收，可用比色法进行含量测定OH-[还原]第57页/共94页第五十七页，共95页。3、测定法A．TTC法:

BP;Ch.PB．BT法:

USP暗处放置40-45min第58页/共94页第五十八页，共95页。

4、讨论结构溶剂和水分碱种类和加入顺序空气中氧和光线反应温度和时间反应速度呈色强度和稳定性第59页/共94页第五十九页，共95页。4、讨论（1）官能团位置的影响

aC11：

11位酮基反应速度快于11位羟基可的松>氢化可的松第60页/共94页第六十页，共95页。bC21：α-羟基（C21-OH）

①21-OH酯化后，较母体羟基反应速度慢即：游离体>酯类如：可的松>醋酸可的松②简单酯>复杂酯，醋酸酯>磷酸酯>

琥珀酸酯>三甲基醋酸酯第61页/共94页第六十一页，共95页。（2）溶剂和水分的影响：a常用无水乙醇含水量≯5%，对结果无影响含水量为10%，吸收度约降低10%

含水量为30%，反应完全受到抑制b用无醛醇醇中不能含有醛类—醛有还原性，使吸收度↑第62页/共94页第六十二页，共95页。（3）试剂质量及加入顺序

a.灵敏度：BT>TTC；BT：淡黄色，空白值高，稳定性差；TTC：无色，空白值较低，稳定性好.▲USP规定：

BT：极淡黄色，空白A值与乙醇比较≯0.03~0.06

第63页/共94页第六十三页，共95页。b.加入顺序：先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH-原因：醇酮基与(CH3)4N+OH-长时间接触，有部分分解。Ch.P:氢化可的松软膏,醋酸地塞米松注射液,醋酸可的松眼膏,醋酸泼尼松眼膏,醋酸泼尼松龙注射液

第64页/共94页第六十四页，共95页。（4）氧及光线的影响

对光敏感，在暗处显色。

TTC法形成的甲对空气中氧敏感，使颜色强度↓，稳定性↓。＊BP规定：加入试剂后，要往容器中充N2↑，以置换反应容器中的空气。第65页/共94页第六十五页，共95页。（5）液性：必要条件：强碱性以(CH3)4N+OH-结果较满意（6）温度与时间

一般室温或30℃

Ch.P:25℃，暗处反应40-45min第66页/共94页第六十六页，共95页。

三.异烟肼法1．原理:C3—酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量。max420nm第67页/共94页第六十七页，共95页。

2、反应条件（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度常用HClHCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。

HCl浓度：0.0074mol/L

（1000ml醇中含0.625mol浓HCl）异烟肼浓度：0.0365mol/L(0.5mg/ml)第68页/共94页第六十八页，共95页。（3）水分、O2与光线的影响

甾体激素与异烟肼的缩合反应为可逆反应，所以含水量升高可促使反应逆转而水解，使吸收度降低(H2O↑→A↓）含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓具塞玻璃容器中,光线和氧影响不大第69页/共94页第六十九页，共95页。温度(4)t℃↑→ν↑第70页/共94页第七十页，共95页。3、反应的专属性

在该反应条件下,对△4—3—酮具有一定的专属性

C20—酮基反应慢，

C17—酮基反应慢；

C11—酮基不反应△4—3—酮：室温下，30′反应完全。如：醋酸地塞米松软膏第71页/共94页第七十一页，共95页。四.kober反应及铁一酚试剂比色法1、Kober反应：指雌激素与硫酸—乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应）

第72页/共94页第七十二页，共95页。第73页/共94页第七十三页，共95页。改进方法：2．铁酚试剂法

①

铁酚试剂的组成硫酸亚铁铵浓硫酸过氧化氢苯酚第74页/共94页第七十四页，共95页。②

浓硫酸和过氧化氢的作用浓硫酸和过氧化氢将2价铁氧化成3价铁。第75页/共94页第七十五页，共95页。

③三价铁的作用

ⅰ．能够加快黄色生成的速度

ⅱ．能促进黄色向红色的转变

ⅲ．能增加红色的稳定性④

苯酚的作用ⅰ．可消除反应产生的荧光ⅱ．能够促进红色的生成第76页/共94页第七十六页，共95页。白五硝酸银一NaOH滴定法+HNO3+NaOH滴定，同时做空白第77页/共94页第七十七页，共95页。六非水溶液滴定法HClO4滴定，同时做空白米非司酮,C10位为第78页/共94页第七十八页，共95页。七HPLC法

广泛用于此类药物原料和制剂的含量测定

一般为内标法第79页/共94页第七十九页，共95页。掌握甾体激素类药物的基本结构与分类；各类药物的结构特征及其与分析方法的关系。熟悉甾体激素类药物的紫外分光光度法、四氮唑比色法和异烟肼比色法；柯柏反应比色法。了解甾体激素类药物的特殊杂质及其检查方法。基本要求第80页/共94页第八十页，共95页。1．甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团

A.酚羟基

B.活泼次甲基

C.甲酮基

D.C17-醇酮基

E.酮基D第81页/共94页第八十一页，共95页。问题2～5A．维生素B1B．醋酸地塞米松

C．两者皆是D．两者皆不是

2.异烟肼比色法

3.硫色素反应

4.紫外分光光度法

5.绿奎宁（Thaciaquin）反应BACD第82页/共94页第八十二页，共95页。

6.可用于氢化可的松鉴别的试剂有

A．氨制硝酸银

B．异烟肼

C．红四氮唑

D．硫酸

E．重氮苯磺酸ABCD第83页/共94页第八十三页，共95页。7．可用于甾体激体类药物的测定方法有

A．高效液相色谱法

B．四氮唑盐法

C．紫外分光光度法

D．异烟肼比色法

E．Kober反应比色法ABCDE第84页/共94页第八十四页，共95页。8.能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是

A．雌二醇

B．黄体酮

C．醋酸可的松

D．苯丙酸诺龙

E．以上都不对B第85页/共94页第八十五页，共95页。9.各国药典对甾体激素类药物，常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是

A.它们没有特征紫外吸收，不能用紫外分光光度法

B.不能用滴定分析法进行测定

C.由于“其它甾体”的存在，色谱法可消除它们的干扰

D.色谱法比较简单，精密度好

E.色谱法准确度优于滴定分析法C第86页/共94页第八十六页，共95页。10.

四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定

A.可的松

B.睾丸素

C.雌二醇

D.炔雌醇

E.黄体酮A第87页/共94页第八十七页，共95页。11：[116—120]可适用的药物：

A.可的松B.雌二醇

C.两者均可D.两者均不可

116．亚硝酸钠滴定法

117．高效液相色谱法

118．能与羰基试剂缩合

119．可用铁酚试剂比色法测定

120．可用四氮唑比色法测定DCABA第88页/共94页第八十八页，