液相色谱常见问题及其对策

现象：无压力，流动相不流动可能原因

1、保险丝断或电源问题

2、泵头内有空气或流动相不足

3、漏液

4、单向阀损坏

5、柱塞杆折断

6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)液相色谱常见问题及其对策

－压力异常第1页/共50页第一页，共51页。现象：压力持续偏高或不断上升

1、流速设定过高

2、保护柱或柱子筛板堵塞

3、流动相使用不当或有缓冲盐析出

4、色谱柱选择不当

5、进样阀损坏

6、线路过滤器堵塞液相色谱常见问题及其对策

－压力异常第2页/共50页第二页，共51页。现象：压力持续偏低

1、流速设定过低

2、色谱柱选择不当

3、柱温过高

4、系统漏液液相色谱常见问题及其对策

－压力异常第3页/共50页第三页，共51页。现象：压力持续偏低

1、流速设定过低

2、色谱柱选择不当

3、柱温过高

4、系统漏液液相色谱常见问题及其对策

－压力异常第4页/共50页第四页，共51页。现象：压力波动可能原因

1、使用了梯度洗脱

2、脱气不充分

3、系统漏液

4、泵头中有气泡

5、柱塞密封圈损坏

6、单向阀损坏液相色谱常见问题及其对策

－压力异常第5页/共50页第五页，共51页。接头处漏液

1、接头处松动

2、接头磨损

3、接头被污染

4、部件不匹配

液相色谱常见问题及其对策

－漏液第6页/共50页第六页，共51页。泵漏液

1、单向阀松动

2、泵密封损坏

3、放空阀损坏

4、接头松动（不要拧的太紧）液相色谱常见问题及其对策

－漏液第7页/共50页第七页，共51页。泵漏液

1、单向阀松动

2、泵密封损坏

3、放空阀损坏

4、接头松动（不要拧的太紧）液相色谱常见问题及其对策

－漏液第8页/共50页第八页，共51页。进样阀漏液可能原因

1、进样针尺寸不合适

2、定量环堵塞

3、废液管堵塞

4、废液管产生虹吸

5、进样口密封松动

6、转子密封损坏液相色谱常见问题及其对策

－漏液第9页/共50页第九页，共51页。检测器漏液可能原因

1、流通池垫片损坏

2、流通池透镜破碎

3、手紧接头处漏液

4、废液管堵塞

5、流通池堵塞液相色谱常见问题及其对策

－漏液第10页/共50页第十页，共51页。保留时间漂移可能原因

1、柱温变化

2、流动相组分变化

3、色谱柱没有平衡

4、流速变化

5、泵中有气泡

6、流动相选择不当

7、键合相流失

8、缓冲容量不够液相色谱常见问题及其对策

－保留时间漂移第11页/共50页第十一页，共51页。基线漂移可能原因

1、温度波动

2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)3、流通池被污染或有气泡

4、流通池窗口破裂

5、流动相配比不当或流速变化

6、柱子平衡（约30－60min）液相色谱常见问题及其对策

－基线问题第12页/共50页第十二页，共51页。基线漂移可能原因

7、流动相污染，变质或由低品质溶剂配成

8、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出

9、检测器没有设定在最大吸收波长处液相色谱常见问题及其对策

－基线问题第13页/共50页第十三页，共51页。基线噪声（规则的）可能原因

1、流动相、泵、检测器中有气泡

2、有地方漏液

3、流动相混和不均匀

4、温度影响（检测器和柱温差别太大）

5、其他电子设备的影响

液相色谱常见问题及其对策

－基线问题第14页/共50页第十四页，共51页。基线噪声（不规则的）可能原因

1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

2、有地方漏液

3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀

4、流通池污染

5、检测池能量不足

6、系统内有气泡液相色谱常见问题及其对策

－基线问题第15页/共50页第十五页，共51页。前沿峰、拖尾峰可能原因

1、柱塞板堵塞

2、色谱柱塌陷

3、柱外效应

4、干扰峰

5、缓冲不足或不合适

6、化学或次级保留（硅羟基效应）液相色谱常见问题及其对策

－峰形异常第16页/共50页第十六页，共51页。前沿峰、拖尾峰

可能原因

7、重金属污染

8、样品溶剂选择不当

9、样品过载

10、柱温过低液相色谱常见问题及其对策

－峰形异常第17页/共50页第十七页，共51页。分叉峰

可能原因

1、保护柱或分析柱污染

2、样品溶剂不溶于流动相液相色谱常见问题及其对策

－峰形异常第18页/共50页第十八页，共51页。峰展宽进样体积过大流动相粘度过高检测池体积过大保留时间过长柱外体积过大样品过载液相色谱常见问题及其对策

－峰形异常第19页/共50页第十九页，共51页。峰变形

可能原因

1、样品过载

2、样品溶剂选择不当液相色谱常见问题及其对策

－峰形异常第20页/共50页第二十页，共51页。鬼峰1、进样阀残余峰2、样品中未知物3、柱未平衡4、水污染5、三氟乙酸氧化液相色谱常见问题及其对策

－峰形异常第21页/共50页第二十一页，共51页。液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器第22页/共50页第二十二页，共51页。材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断吸滤头液相色谱容易出问题的部件第23页/共50页第二十三页，共51页。LC-10ATvp泵：串联式往复泵LC-10ADvp泵：并联式往复泵液相色谱容易出问题的部件第24页/共50页第二十四页，共51页。液相色谱容易出问题的部件单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头流动相单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头第25页/共50页第二十五页，共51页。液相色谱容易出问题的部件故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开

2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀第26页/共50页第二十六页，共51页。液相色谱容易出问题的部件故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀第27页/共50页第二十七页，共51页。故障：密封圈磨损而导致密封不良现象：系统压力波动大或漏夜措施：更换密封圈注意点：更换密封圈拆卸泵头前，柱塞杆复位（P－SET）柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈液相色谱容易出问题的部件第28页/共50页第二十八页，共51页。故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力偏高措施：5％稀硝酸，超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力>3kgf/cm2，则可能堵塞。线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相液相色谱容易出问题的部件第29页/共50页第二十九页，共51页。手动进样阀故障：转子密封损坏现象：漏液原因：a拧的太紧

b样品太脏

c针头损坏或不使用液相专用针解决措施：更换转子密封，并在使用时注意保养液相色谱容易出问题的部件第30页/共50页第三十页，共51页。液相色谱容易出问题的部件手动进样阀故障：载样困难

原因：a定量环堵塞

b进样器污染

解决措施：清洗或更换定量环、进样器第31页/共50页第三十一页，共51页。柱子故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变

解决措施：清洗正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸液相色谱容易出问题的部件第32页/共50页第三十二页，共51页。分析柱的维护1、在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3ml/min)冲洗30mins，长时间未用的分析柱也要同样处理2、定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品5、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯7、使用预柱8、避免流动相组成及极性的剧烈变化9、避免压力脉冲的剧烈变化液相色谱容易出问题的部件第33页/共50页第三十三页，共51页。液相色谱容易出问题的部件峰产生有肩或分叉的原因1.

柱子劣化（进口处产生不均匀的空隙）2.

样品劣化（生成氧化物、分解物等）判断标准

所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化第34页/共50页第三十四页，共51页。延长柱寿命方法：倒冲柱换过滤片修补柱头

液相色谱容易出问题的部件第35页/共50页第三十五页，共51页。液相色谱容易出问题的部件柱的补修第36页/共50页第三十六页，共51页。填料的取出液相色谱容易出问题的部件第37页/共50页第三十七页，共51页。恢复例液相色谱容易出问题的部件第38页/共50页第三十八页，共51页。更换氘灯（紫外检测器）

判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于800，需更换氘灯。操作注意点：不要用手直接接触氘灯表面液相色谱容易出问题的部件第39页/共50页第三十九页，共51页。液相色谱容易出问题的部件故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPLEN和REFEN，如两者相差较大，则样品池受污。措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。紫外检测器第40页/共50页第四十页，共51页。其他问题溶剂的过滤滤膜类型：

聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。

尼龙66滤膜：

适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。

再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂第41页/共50页第四十一页，共51页。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动其他问题第42页/共50页第四十二页，共51页。脱气的目的

1.防止由气泡的产生引起的故障

2.防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度

1）示差折射率检测器*使折射率变化

2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收

3）荧光检测器*溶解氧气有消光作用其他问题第43页/共50页第四十三页，共51页。其他问题脱气的方法1.

超身波脱气法2.He清除法3.

使用氟树脂膜的减压脱气法第44页/共50页第四十四页，共51页。其他问题He清除法调压阀排气阀往送液泵流动相过滤器第45页/共50页第四十五页，共51页。其他问题氟树脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流动相使用氟树脂膜的减压脱气法第46页/共50页第四十六页，共51页。其他问题梯度洗脱法的注意点1.流动相使用HPLC级有机溶剂。2.查看空白实验的数据。3.遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）第4