TZJATA 0011-2022 土壤有机酸（甲酸、乙酸、丙酸、丙烯酸）的测定 高效液相色谱法

ICS13.080.10CCSZ22 ZJATA浙 江 测 试 团 体 标 准T/ZJATA0011—2022）Soil-Determinationoforganicacids(formicacid,aceticacid,propionicacid,acrylicacid)-Highperformanceliquidchromatography2022-08-08发布 2022-09-08实施浙 江 省 分 析 测 试 协 会 发 布T/ZJATA0011T/ZJATA0011—2022II前   言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》和HJ168-2020《环境监测分析方法标准制订技术导则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：中煤浙江检测技术有限公司（浙江煤炭地质勘查院）。（三河江格临检测股份有限公司。T/ZJATA0011T/ZJATA0011—2022PAGEPAGE7土壤有机酸(甲酸、乙酸、丙酸、丙烯酸)的测定高效液相色谱法范围本文件规定了测定土壤中有机酸（甲酸、乙酸、丙酸、丙烯酸）的高效液相色谱法。本文件适用于土壤中甲酸、乙酸、丙酸和丙烯酸的测定。当取样量为10g，浸提液体积为50mL时，甲酸的方法检出限为20mg/kg为30mg/kg，丙烯酸的方法检出限为0.2mg/kg。规范性引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。HJ613土壤干物质和水分的测定重量法HJ/T166土壤环境监测技术规范原理（仪进行分离检测，以保留时间定性，外标法定量。试剂或材料4.1 甲酸（CH2O2），纯度≥99.5%；4.2 乙酸（C2H4O2），纯度≥99.5%；4.3 丙酸（C3H6O2），纯度≥99.5%；4.4 丙烯酸（C3H4O2），纯度≥99.5%；4.5 磷酸（H3PO4），AR；4.6 磷酸水溶液（v/v=0.04%）；移取0.4mL磷酸（4.5）到1000mL容量瓶中，用水稀释定容至标线。乙腈（CH3CN）:液相色谱纯；甲酸标准贮备液:ρ（CH2O2）=10000mg/L；准确称取溶于少量水后移入100mL乙酸标准贮备液:ρ（C2H4O2）=10000mg/L；准确称取溶于少量水后移入100mL丙酸标准贮备液:ρ（C3H6O2）=10000mg/L；准确称取1.00g（1.01mL）丙酸（4.3），溶于少量水后移入100mL容量瓶中，用水稀释定容至标线，转移至试剂瓶中，4℃以下冷藏，可保存两个月。亦可购买市售有证标准溶液。丙烯酸标准贮备液:ρ（C3H4O2）=1000mg/L；准确称取1.00g（0.950mL）丙烯酸（4.4），溶于少量水后移入1000mL容量瓶中，用水稀释定容至标线，转移至试剂瓶中，4℃以下冷藏，可保存两个月。亦可购买市售有证标准溶液。有机酸混合标准使用液:甲酸、乙酸、丙酸ρ=1000mg/L，丙烯酸ρ=10mg/L；分别移取10.00mL甲酸(4.8)、乙酸(4.9)和丙酸(4.10)标准贮备液以及1.00mL丙烯酸(4.11)标准贮备液至100mL容量瓶中，用水稀释定容至标线。4.13 石英砂：20目~100目；置于马弗炉中400℃烘烤4h，冷却后装入具塞磨口玻璃瓶中密封保存。仪器设备高效液相色谱仪：具备紫外检测器；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（C18）5.0μm250mm4.6mmC18反相色谱柱或其他等效色谱柱；0.01g；150~250次/min；0.45μm；提取瓶：250mL，具聚四氟乙烯-硅胶衬垫螺旋盖的棕色玻璃瓶；一般实验室常用仪器和设备。样品按照HJ/T166的相关规定进行土壤样品的采集和保存。样品应于洁净的具塞磨口棕色玻璃瓶中保存。运输过程中应密封、避光、4℃以下冷藏。运至实验室后，若不能及时分析，应于4℃以下冷藏、避光、密封保存，6d内完成提取。提取液4℃以下冷藏、避光、密封保存，20d内完成分析。样品的制备（10g（精确到0.01g）613测定土壤样品的干物质含量。在装有样品的提取瓶中，根据样品的干物质含量，按固液比1:5（kg/L）加入纯水，密封，置于水平振荡器中，以200次/min的频率振荡提取30min，静置约30min自然沉降，用带有水系微孔滤膜针筒过滤器的一次性注射器将上清液过滤至进样瓶内，待测。测定步骤参考色谱条件流动相：5%乙腈+95%磷酸水溶液(v/v=0.04%)，等度洗脱，保持15min。检测波长：205nm。流动相流速：1.0mL/min。柱温：40℃。进样量：10μL。标准曲线的建立分别准确移取0mL、2.00mL、5.00mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL和25.0mL混合标准使用液（4.12）于一组100mL容量瓶中，用水稀释定容至标线，混匀。标准系列参考质量浓度见表1。按照参考色谱条件（7.1），由低浓度到高浓度依次测定。以目标化合物的质量浓度（mg/L）为横坐标，对应化合物的峰高或者峰面积为纵坐标，建立标准曲线。可根据被测样品中目标离子的浓度水平选择合适的标准系列浓度范围。表1标准系列参考质量浓度单位为毫克每升目标化合物名称1234567甲酸020.050.0100150200250乙酸020.050.0100150200250丙酸020.050.0100150200250丙烯酸00.200.501.001.502.002.50参考色谱图图1为本文件规定的色谱条件下，四种有机酸的标准参考色谱图。图1有机酸（甲酸、乙酸、丙烯酸、丙酸）的标准参考色谱图按照与标准曲线的建立（7.2）10μl待测样品注入高效液相色谱仪中进行（或峰面积稀释后测定，同时记录稀释倍数D。用石英砂（4.13）代替实际样品，按照与样品制备（6.2）相同的条件和步骤制备空白试样。结果计算与表示根据目标化合物的保留时间定性，必要时采用标准加入法等方法辅助定性。土壤中目标化合物含量W，按照公式（1）进行计算。𝜌×𝑉×𝐷W=𝑚×𝑊𝑑𝑚

………（1）式中：W——土壤中有机酸的质量浓度，单位为毫克每公斤（mg/kg）；ρ——由标准曲线计算所得试样中目标化合物质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V——提取剂总体积，单位为毫升（mL）；D——稀释倍数；m——土壤样品称样量，单位为克（g）；Wdm——土壤样品干物质含量，%。100mg/kg100mg/kg时，保留三位有效数字。当丙烯酸测定结果小于10mg/kg等于10mg/kg时，保留三位有效数字。精密度和准确度精密度7家实验室分别对含甲酸（100mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg）、乙酸（100mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg）（100mg/kg500mg/kg和1000mg/kg）和丙烯酸（1.0mg/kg5.0mg/kg和10.0mg/kg）的有机酸类化合物土壤加标样品进行了6次重复测定。甲酸实验室内相对标准偏差分别为0.6%~5.2%、1.2%~6.0%、1.4%~9.9%，实验室间相对标准偏差分别为2.%2.2%5.1%7g/kg40/kg19m/g9g/kg46/kg、185mg/kg。0.5%~6.5%0.9%~7.9%别为5.%3.%2.%1m/g52m/g15m/g17/k70/kg、151mg/kg。丙酸实验室内相对标准偏差分别为0.6%~7.3%、0.7%~6.6%、0.5%~9.6%，实验室间相对标准偏差分别为1.9%、0.9%、1.2%，重复性限分别为13mg/kg、40mg/kg、108mg/kg，再现性限分别为13mg/kg、39mg/kg、104mg/kg。0.7%~5.2%1.0%~7.7%分别为3.%1.308%0.08/k0.45m/g1.21/kg0.11/kg、0.45mg/kg、1.13mg/kg。准确度7家实验室分别对甲酸（加标量为1000μg、5000μg和10000μg）、乙酸（加标量为1000μg、5000μg和10000μg）、丙酸（加标量为1000μg、5000μg和10000μg）和丙烯酸（加标量为10μg、50μg和100μg）的有机酸类化合物土壤加标样品进行了6次重复测定。甲酸的加标回收率分别为88.2%~95.3%、88.9%~94.7%、91.2%~104%，加标回收率最终值分别为91.3%±5.0%、91.4%±4.4%、94.7%±10.2%。乙酸的加标回收率分别为92.7%~107%、96.0%~108%、97.5%~104%，加标回收率最终值分别为102%±10.2%、101%±7.4%、101%±4.2%。丙酸的加标回收率分别为92.7%~98.0%、99.3%~102%、99.2%~103%，加标回收率最终值分别为95.1%±3.8%、101%±1.8%、101%±2.4%。丙烯酸的加标回收率分别为88.1%~96.8%、94.7%~98.4、96.8%~99.4%，加标回收率最终值分别为92.9%±6.0%、96.9%±2.6%、98.2%±1.6%。质量保证与控制空白分析每批样品至少分析一个实验室空白，其目标物的测定结果应低于方法检出限。曲线要求标准曲线相关系数应≥0.999，否则应重新绘制标准曲线。每20个样品或每批次（少于20个样/批）至少分析1个标准曲线中间浓度点，其测定值与标准值相对误差应为±5%，否则应重新绘制标准曲线。平行样测定每20（少于20个样/批至少测定1≤100mg/kg时，平行测定结果的相对偏差不大于20%，土壤中甲酸、乙酸和丙酸的含量>100mg/kg时,平行测定结果的相对偏差不大于10%;土壤中丙烯酸的含量≤1.0mg/kg时，平行测定结果的相对偏差不大于土壤中丙烯酸的含量>1.0mg/kg时,10%。加标回收率控制每20个样品或每批次（少于20个样/批）至少测定1个基体加标样，回收率应为80~120%之间。废物处理实验中产生的废物应集中分类收集保管，粘贴明显标识，委托具有资质的单位统一处置。附录A（资料性附录）方法的精密度和准确度汇总表7家实验室分别对三种不同浓度的加标样品进行了测定。精密度和准确度汇总数据见附表A.1和附表A.2。A.1名称CAS号有机酸化合物浓度mg/kg实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限mg/kg再现性限mg/kg甲酸64-18-61000.6~5.22.5795001.2~6.02.2404610001.4~9.95.1139185乙酸64-19-71000.5~6.55.110175000.9~7.93.7527010000.5~132.1152151丙烯酸79-10-71.00.7~5.23.00.080.115.01.0~7.71.30.450.4510.00.7~110.81.211.13丙酸79-09-41000.6~7.31.913135000.7~6.60.9403910000.5~9.61.2108104A.2名称CAS号标准物质加标量μg有机酸化合物浓度mg/kg加标回收率范围%加标回收率最终值%P2SP甲酸64-18-6100010088.2~95.391.3±5.0500050088.9~94.791.4±4.410000100091