分子生物学常用仪器介绍2课件

研究生实验技能培训

－－分子生物学实验常用仪器介绍实验中心PH计种类台式（实验室用）PH计便携式（实验室用）PH计工业用PH计多功能（实验室用）PH计pH计的校正生产厂家一般提供两瓶标准溶液一瓶pH值等于6.86（混合磷酸盐的标准缓冲溶液），用于标定仪表零点。一瓶pH等于4（邻苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液），用于标定仪表的信号输出斜率。pH计的使用注意事项测试前，用蒸馏水冲洗电极，洗去保护液。测量电极上的玻璃探头，小心碰撞，避免破碎。完成测试后，用蒸馏水冲洗电极，吸干，套上套管，关闭电源。METTLERTOLEDOAG285天平工作原理

天平是称量物体质量的衡器。常用天平都采用单杠杆结构，运用“杠杆平衡时加在等力臂上的力相等”这一原理制成。电子天平是用电磁力平衡被称物体重力的天平。基本概念全称量天平所能称量的最大质量值（满载值），常以“克”（g）为单位表示。

感量使天平指针从平衡位置转到刻度盘一分度所需的最大质量。因此，感量也叫做“分度值”，常以“毫克”（mg）为单位表示。（e,d)这一数值愈小，天平就愈灵敏。Max:81g/210gd=0.01mg/0.1mg

如何选择天平用一台实际标尺分度值d为1mg，检定标尺分度值e为10mg，最大称量为200g的Mettler电子天平，用来称量7mg的物体，这样是不能得出准确结果的。在《JJG98-90非自动天平试行检定规程》中规定，最大允许误差与检定标尺分度值“e”为同一数量级，此台天平的最大允许误差为1e，显然不能称量7mg的物体。按其观察对象和光路结构可分为正立、倒置和体视显微镜按其光学性质可分为明场和暗场暗场又包含相差、霍夫曼、荧光和偏光显微镜的分类暗视野显微镜在培养细胞活体观察中以倒置暗场为主一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。细胞培养中显微镜的运用细胞数量记录细胞形态观察细胞动力学记录NIKONTE2000-U

倒置荧光显微镜工作原理

荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。基本构造由普通光学显微镜加上一些附件：荧光光源激发滤片双色束分离器阻断滤片等荧光显微镜内部构造1观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构2标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜色的荧光，借以研究该荧光物质在细胞和组织内的分布。3细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光，如溴化乙锭与吖啶橙可与DNA综合，进行细胞内DNA含量测定。4荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究，即以异硫氰酸或罗丹明等荧光素标记抗体（一抗或二抗），用该标记抗体直接或间接地与细胞内的相应抗原结合，以检测该抗原的存在与分布。免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。主要用途荧光的种类自发荧光（固有荧光）二次荧光Fluorescenceimage,DNAinblueandMicrotubulesingreen细胞增殖试剂盒Cy5-连接的抗-BrdU来检测细胞增殖绿荧光目标蛋白测定

---监测细胞内蛋白位移RAC-1AKT-1细胞存活，细胞增殖SMAD-2TGF-b信号传导STAT-3细胞因子传导,leptinsignalingNFAT-C1免疫反应,前列腺素信号传导途径FYVEdomainPI(3)P传感途径Rac-1胞质分裂，迁移，转换Cytokinesis,migration,transformationPLCδ-PHPI(4,5)P2信号传导途径,adrenoreceptorfunctionMAPKAP-k2p38途径

WU

WIBDUAL

BANDWIBAWIGWIBDAPI+FITCFITC+PI双重染色标本的单色和双色观察

1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。2．使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤。3．高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。使用注意事项GenepulserXcell电穿孔系统工作原理电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。系统的组成由一个主单元、2个附属模块（CE与PC模块）及ShockPod电击槽组成CE模块（电容扩增器模块）与主单元配合使用可电转化多数真核细胞（包括哺乳动物细胞和植物原生质体）。PC模块（脉冲增强控制器模块）建议用于细菌和真菌的电转化，或其它需要在小体积和高电阻样品上施加高电压脉冲的应用。系统有3种组合。

电击杯选择指南0.4cm间距电击杯宽间距、低场强、应用于哺乳动物细胞和其它真核细胞0.2cm间距电击杯窄间距、高场强、应用于酵母、细菌和其它真核细胞0.1cm间距电击杯最窄间距、极高的场强，浅底用于小体积样品(40–80µl)应用于酵母和细菌转化主要用途用于哺乳动物细胞、胚胎细胞或植物原生质体的穿孔，可有效转移任何大小或复杂度的DNA、蛋白质，适用于原核细胞和真核细胞的转染，细菌和酵母的转化。超低温冷藏柜生物材料的冻存（1）0—8℃疫苗保存箱可用于储存疫苗、药剂、血液等

2—8℃药品保存箱药品保存箱是医疗行业冷藏药品的专业设备，也可用于储存生物制品

4℃血液保存箱医疗行业冷藏血液（全血）的专业冷藏设备，也可以用于冷藏药物，生物制品

—25℃~—40℃低温保存箱可用于保存血浆，生物材料，疫苗、试剂等

生物材料的冻存（2）—40℃低温保存箱可用于特殊材料的低温实验、冻存血浆、生物材料、疫苗等

—60℃~—70℃超低温保存箱保存生物材料、血浆以及特殊材料的低温试验

—86℃超低温保存箱用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品，远洋制品，特殊材料的低温试验等

—156℃深低温保存箱用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、DNA/RNA、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品临床试验品等。

ELX800酶标仪主要用途用于读取酶联免疫试剂盒的反应结果，可进行单克隆抗体筛分、抗生素灵敏度检验(食品安全药物残留快速检测)以及其它需要进行比色的分析。酶标仪测定原理

在特定波长下，检测被测物的吸光值。在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

主要性能说明

速度：30秒/96孔板

储存：储存55种测试项目，并能储存最近的8个测试结果，可储存25条标准曲线

滤光片：滤光轮可放5块滤光片，仪器配405、450、490、630nm4块滤光片线性：405nm，0-2.000Abs±1%

450nm，0-2.000Abs±1%

外接口：电脑接口（RS232）、打印机接口

波长范围：400-750nm具有单、双波长设定

吸光度范围：0.000-3.000Abs

分辨率：0.001Abs

操作注意事项

A.使用移液器加液，移液枪头不能混用。

B.洗板要干净，避免交叉污染。

C.严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。

D.请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。

E.不要在测量过程中关闭电源。

F.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。

G.使用后盖好防尘罩。

荧光定量PCR仪应用定量检测绝对定量：基因表达研究、转基因食品检测、病原体检测相对定量：基因在不同组织中的表达差异、药物疗效考核点突变检测与疾病相关的等位基因点突变检测SNP检测RealTimePCR原理

在PCR反应体系中加入荧光物质，并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程，最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。RealTimePCR检测方法

荧光染料嵌合法(SYBRGreenI)

荧光探针法

TaqManprobeCyclingprobe

MolecularBeaconprobeHybridizationprobeScorpionsprobe

AmplifluorprobeAgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio荧光染料嵌合法原理SYBRGreenI

SYBRGreenI是具有绿色激发波长的染料，能结合于任意dsDNA双螺旋小沟区域的。AgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio热变性引物退火延伸反应荧光染料嵌合法原理

RayGeneBioAgentofTaKaRaTaqMan探针法原理AgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio

TaqManprobe为一寡核苷酸(20-24bp)5’端标记一个荧光报告基团(Reporter)3’端标记一个荧光淬灭基团(Quencher)热变性引物和探针与模板退火延伸反应探针报告基团淬灭基团探针DNA聚合酶引物RRRRTaqMan探针法原理信号强度与结合探针的DNA分子数成正比生产厂商仪器名称TaKaRa公司TP800AppliedBiosystems公司ABIPRISM7700、7000、7300、7900HT、

7500FastRoche公司LightCycler®2.0、LightCycler®480

Cepheid公司SmartCycler、SmartCyclerII、SmartCycler®TD

Bio-Rad公司iCycleriQ、iQ5Real-TimePCRDetectionSystem

CorbettResearch公司Rotor-gene2000、Rotor-gene3000、Rotor-gene6000

MJResearch公司Opticon、MJMiniCycler、MiniOpticonStratagene公司Mx4000®、Mx3000P®、Mx3005PTM杭州博日LINE-GENEFQD-33A、LINE-GENEFQD-66ARealTimePCR检测系统

瑞真生物

RayGeneBioAgentofTaKaRaLightCycler®480

Rotor-gene6000MiniOpticonMx3005PTM

LINE-GENEFQD-66A

ABIPRISM7500iQ5Real-TimePCRDetectionSystem

TaKaRaTP800开、关机顺序开机：先便宜，后贵的。关机：先贵的，后便宜。选择生物安全柜的理由工作对象具有生物危害原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等-------具有潜在感染性的实验材料属于《人间传染的病原微生物名录》中第一、二、三和四类微生物选择生物安全柜的理由容易产生气溶胶的工作行为

对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时，将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶，采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中，对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡，对感染性液体进行离心，进行动物操作时。