微生物金黄色葡萄球菌

微生物金黄色葡萄球菌第一页，共二十五页，2022年，8月28日大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌。第二页，共二十五页，2022年，8月28日大多数菌株最适生长温度30-37℃，最适pH为；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。第三页，共二十五页，2022年，8月28日

所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。第四页，共二十五页，2022年，8月28日生物学特性——致病性

金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。d.脱氧核糖核酸酶（DNA酶）

e.肠毒素：引起急性胃肠炎。第五页，共二十五页，2022年，8月28日

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。

第六页，共二十五页，2022年，8月28日葡萄球菌皮肤感染第七页，共二十五页，2022年，8月28日

葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。第八页，共二十五页，2022年，8月28日二、检验程序与操作方法根据中华人民共和国国家标准：《食品卫生微生物学检验》GB4789.10-94

金黄色葡萄球菌检验第九页，共二十五页，2022年，8月28日检样25g(ml)+225ml灭菌生理盐水国标：金黄色葡萄球菌检验程序直接计数方法增菌培养方法Baird-parker（贝尔德-帕克）0.3ml、0.3ml、0.4ml7．5％氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤血平板血平板，Baird-parker涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报告36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

第十页，共二十五页，2022年，8月28日检验程序——增菌培养

利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤或7.5%氯化钠肉汤增菌。置37摄氏度培养箱培养24小时。第十一页，共二十五页，2022年，8月28日检验程序——分离培养血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环。第十二页，共二十五页，2022年，8月28日大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环第十三页，共二十五页，2022年，8月28日血平板制作成分：豆粉琼脂（或营养琼脂）100mL，脱纤维羊血（或兔血）5-10mL。制法：加热融化琼脂，冷至50℃，以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装灭菌试管，摆成斜面。第十四页，共二十五页，2022年，8月28日BP（贝尔德-帕克）平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和矿物元素丙酮酸钠是一种生长促进剂亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。检验程序——分离培养第十五页，共二十五页，2022年，8月28日

在BP平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，边缘常为淡色（米黄色或灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其黑色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地较干燥。第十六页，共二十五页，2022年，8月28日B-P平板第十七页，共二十五页，2022年，8月28日革兰氏阳性，球形，组成葡萄状检验程序——鉴定之革兰氏染色镜检第十八页，共二十五页，2022年，8月28日检验程序——鉴定之凝固酶试验

金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别的主要试验是测定其凝固酶。方法一：试管法吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。第十九页，共二十五页，2022年，8月28日试管法第二十页，共二十五页，2022年，8月28日阳性反应阴性反应不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不流动第二十一页，共二十五页，2022年，8月28日有凝块血浆均匀混浊生理盐水方法二：玻片法在一张洁净玻片中央加1滴生理盐水，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10~20s内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆1环（不用稀释），与菌悬液混合，观察结果。第二十二页，共二十五页，2022年，8月28日

兔血浆制备成分：柠檬酸钠0.106mol/L（31.3gNa3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸馏水中）制法：一份加兔血9份混合后离心2000rpm，10min吸取上清液即为兔血浆。第二十三页，共二十五页，2022年，8月28日葡萄糖肉浸液肉汤的制备成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，与蒸馏水混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH，煮沸并过滤、分装，121℃30min高压灭菌。第二十四页，共二十五页，2022年，8月28日25g样品+225ml生理盐水

5mL样品匀液（1:10