铁皮石斛组培

铁皮石斛的组织培养班级：农学121学号：1251506104姓名：陈旺有铁皮石斛铁皮石斛简介铁皮石斛的用途铁皮石斛市场现状及经济效益分析铁皮石斛的组织培养部位培养基质的选择与配置材料的灭菌与接种组培苗的炼苗与移栽工厂化培养铁皮石斛(Dendrobium

officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。铁皮石斛的用途：

铁皮石斛（Dendrobium

officinaleKimuraetMigo），为兰科石斛属多年生草本植物，分布于气候温润的南方山区，附生在半山腰阴湿岩缝、老树表皮，生存温度为–5℃～36℃，生长温度为15～30℃。其茎枝富含石斛多糖、甘露糖、氨基酸、微量元素、菲类化合物等成分，具有提高免疫、增强记忆、延缓衰老、防治眼病、保护嗓子、降压降糖、防癌抗癌、抑制血栓形成等作用。铁皮石斛口感清香、淡甜、细滑，耐人寻味，人们往往直接嚼食、泡茶饮用、烹调美味滋补药膳。现阶段被制成口服液、颗粒剂、软胶囊等服食。铁皮石斛枝叶奇特、花型秀美，极具观赏价值。道家经典《道藏》把铁皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草列为中华九大仙草，而铁皮石斛被冠以九大仙草之首，因而成为历代宫廷贡品，为历年版《中华人民共和国药典》所收载。

市场现状：

全国中药资源普查显示，铁皮石斛鲜品的市场年需求量在万吨左右，且每年递增15%。鲜品收购价每公斤在1000元以上，加工成铁皮枫斗后每公斤销售价达18000元，是石斛属植物中最名贵的物种。但铁皮石斛自然繁殖能力极低，疯狂的采挖导致野生资源日见稀少，被国家列为二级濒危保护植物。目前，人工繁育种植技术趋于成熟，但主要集中在少数企业运作，投资成本高，种植面积少，其产量难以满足市场需求，混淆品充斥市场。种植经济效益分析：

100平方米种植18个月经济效益分析种植数100米2×100株/米2=10000株

成活数10000株×成活率90%=9000株可采株9000株×2（分蘖株）/种株＝18000分蘖株总产量18000株×9克/株＝162000克÷1公斤/1000克＝162公斤总产值800元／公斤×162公斤＝129600元总成本种苗8000元、水电400元、人工2000元、基质12000元、设施8000元总利润总产值129600元-总成本30400元＝99200元组培材料及方法一是铁皮石斛成熟种子，二是1年生铁皮石斛植株茎段。取铁皮石斛成熟蒴果，在超净工作台上用刀片将其剥开，将种子倒在无菌滤纸上并用无菌镊将其包好，放在无菌瓶中用75%的酒精消毒30s，0.1%的HgCl2消毒3~4min后，用无菌水冲洗5~6次，用镊子把滤纸夹出，打开，把种子播在无菌培养基表面。约20天后，发芽而又未被污染的小苗，即为建立的无菌系，用于进一步进行试验。从1年生铁皮石斛植株上选择生长健壮的茎段，摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2cm长带节的小段，用洗洁剂清洗后置流水下冲洗20~30min。在超净工作台上用75%的酒精消毒30s，0.1%HgCl2灭菌5min后，用无菌水冲洗5~6次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去多余水分，茎段两端各切去0.2~0.3cm，插入备好的无菌诱导培养基中，每瓶培养基插1个外植体。不同阶段培养基备注愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.6（1）外植体诱导培养基。培养基：MS+BA0.0~2.0mg/L（单位下同）+NAA0.1~2.0mg/L；培养基：MS+BA0.0~2.0mg/L+IBA0.1~2.0mg/L；培养基：MS+BA0.0~2.0mg/L+IAA0.1~2.0mg/L。（2）增殖培养基。培养基：MS+BA0.2~2.0+NAA0.1~2.5+土豆汁10%~50%。培养基：MS+BA0.2~2.0+NAA0.1~2.5+香蕉汁10%~50%。（3）生根培养基。培养基：1/2MS+NAA0.0~2.5+土豆汁10%~50%+活性碳0~10‰；培养基：1/2MS+NAA0.0~2.5mg/L+香蕉汁20%+活性碳0~10‰（4）其他培养条件。所有培养基中添加蔗糖3%，卡拉胶6.8g/L，pH值5.2~5.6。培养温度23~25℃，光照强度2000lx，光照时间10h/d。灭菌1培养基灭菌1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。2外植体灭菌①原材料清洗选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2节为一段放入500ml的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等。②材料二次消毒灭菌将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌:将茎段腋芽的苞叶拨去。70%的酒精速浸25s，用0.1%的升汞溶液浸泡10min用无菌水冲洗5次，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以去掉表面药物残留。转接2.1转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；2.2转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。注意事项①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。培养石斛组培常用的温度为(26±1)℃光强1600～2000lx日照光8~12h/d（1）组培苗在光照度为2000lx，温度以22℃为宜。

(2)在20一22℃时丛生芽增殖较好，温度超过25℃丛生芽就开始分化成苗。

待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90％以上。炼苗3.1炼苗目的炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境——温差，湿度差以及微生物环境。3.2炼苗方法1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4-5天；2）半开盖保持1-2天后，全开盖再炼苗2-3天；方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移栽）。铁皮石斛瓶苗移栽1基质选择栽培的基质为火山岩1+椰衣2+木炭1的基质配比石斛兰长势最好，椰衣1+水苔1和块状椰衣的基质配比稍微次之。多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的C/N比值都较高，直接使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能差。2移栽技术要求将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切成至少带有一个茎节地茎段，接种于事先准备好的诱导芽培养基中诱导出芽。从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多数是无根小苗，需转入1／2MS加马铃薯进行生根和壮苗培养，才能出管移栽。铁皮石斛不宜深植，种植时根系向四周均匀展开，将基质填充根部、基部必须露出，否则易造成烂根。移栽后隔5天再浇水效果较好。30天内每隔1天喷雾1次，水量不宜过多，期间勿施肥，待小苗恢复正常生长后才开始常规的水肥管理。3移栽后期管理

营养生长期施用氮肥较高的花多多复合肥（N:P:K=30:10:10），花芽分化期开始施偏重磷钾肥（N:P:K=10:30:20），其余时期施