生化检验常用技术

第五章

常用生物化学检验技术第一节光谱分析技术（讲授）第二节电化学分析第三节电泳技术（讲授）第四节层析技术第五节离心技术第六节自动生化分析技术

内容概要第一节光谱分析技术1.分光光度技术的基本原理2.其他光谱技术掌握熟悉分光光度计的基本结构、操作方法2.分光光度技术的定性和定量方法内容提要一、分光光度技术的原理二、分光光度计的基本结构三、分光光度计的操作方法四、分光光度技术的定量和定性五、其它光谱分析技术一、分光光度技术的基本原理T=I/I0透光度（transmitance,T）透射光强度和入射光强度之比。吸光度（absorbance,A）A=-lgT透光度的负对数。Lambert-Beer定律

比例常数，称为吸光系数溶液层厚度，称为光径

A＝KLC物质对单色光的吸光度（A）与吸光物质溶液的浓度（C）和液层厚度（L）的乘积成正比。吸光度溶液浓度吸光系数（K）吸光物质在单位浓度及单位液层厚度时的吸光度。当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度。

ε是物质的特定性常数。K＝A/LC物理意义摩尔吸光系数（ε）偏离Lambert-Beer定律的因素1.化学因素：溶液的浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡。2.光学因素：非单色光、非平行光等因素，入射光的谱带越宽，其误差越大。二、分光光度计的基本结构可见分光光度计紫外-可见光分光光度计

光源单色器比色杯检测器显示器五大部份结构最常用㈠光源可见光分光光度计常用光源:钨灯或卤钨灯

紫外光光度计常用氢灯作为光源。㈡单色器光源的复合光单色光

种类定义滤光片棱镜光栅常用玻璃或石英

光电管光电倍增管㈢比色杯＝吸收池＝比色皿材料㈣检测器㈤显示器定义光信号电信号<<<<<<

种类三、分光光度计的操作方法721-A型1.打开开关和比色池的盖子，通电20分钟使仪器预热。2.将波长旋至测定的波长。3.将空白液、校准液或待测液放入比色池，将空白液置于光路中。4.打开比色池盖子，调节T为0,关上比色池盖子，调节T为100。5.重复步骤4和56.将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度（A）四、分光光度技术的定性定量方法㈠定性2.摩尔吸光系数ε方法1.最大吸收波长λmax方法㈡定量1.标准曲线法2.比较法1.标准曲线法

将一系列浓度不同的标准液，在同一条件下分别测定吸光度，然后以标准液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，按最小二乘法的原理，将对应各点连成一条通过原点的直线，称为标准曲线。待测溶液测定吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。

此法对仪器的要求不高，适用于单色光不纯的仪器，适用于大批量的定量分析。特点2．比较法

己知浓度的标准品和样品作同样处理，使用相同的空白，同时测定其吸光度，可根据Lambert-Beer定律计算出样品的浓度：A样＝K样L样C样A标＝K标L标C标C样＝A样/A标×C标特点用比较法定量时，选用的标准品溶液的浓度应尽量接近样品溶液浓度，可减少误差。五、其它光谱分析技术光谱分析技术荧光光度法火焰光度法原子发射光谱法紫外、可见分光光度法原子吸收分光光度法比浊法发射光谱技术吸收光谱技术散射光谱技