微生物的培养与应用课件

到目前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关微生物的类群原生生物原核生物真菌病毒如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养基础知识梳理一.培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。（2）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。（3）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（一）分类：(微生物生存的环境和营养物质)(1)固体培养基、液体培养基和半固体培养基①固体培养基：（观察菌落和分离提纯微生物）在一般培养温度下呈固体状态的培养基。一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基；另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。②液体培养基或培养液或发酵液：（工业大规模培养）呈液体状态的培养基。液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。③半固体培养基：（观察微生物的运动）

加入少量的凝固剂(如0.2％～0.5％的琼脂)而制成的培养基。这种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。几种菌落及其形态（2）天然培养基和合成培养基①天然培养基：（工业生产降低成本）主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分复杂，来源受限。天然培养基/液的种类很多，包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎浸液）；凝固剂（如血浆）等。②合成培养基：（菌种的分类，鉴定，营养、代谢，遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究）是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的。其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。（三）选择培养基和鉴别培养基：①选择培养基：配制特点：添加或减少某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物的生长。从而使后者从含有杂菌的标本中分离出。（即筛选你所需要培养的微生物，令其生长，其余微生物不生长）例如：(1)基本的培养基通过加青霉素，实现分离纯化酵母菌、霉菌；

（2）加高浓度的食盐分离纯化金黄色葡萄球菌（有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长）

（3）无氮培养基可分离纯化固氮菌（固氮细菌）。

（4）不含有机碳的培养基可分离纯化自养型细菌如硝化细菌。

例1、下列物质可作为培养硝化细菌碳源、氮源和能源的依次是

（

）A含碳无机物、氨、氨

B含碳无机物、氮、硝酸盐C含碳有机物、氨、光

D含碳有机物、硝酸盐、氨例2、要将土壤中的自生固氮菌（如原褐固氮菌）与其它细菌分离出来，应将它们接种到（

）A．加入指示剂的鉴别培养基

B．含有蛋白胨的固体培养基C．没有有机氮的选择培养基

D．营养要素全面的液体培养基练一练AC例3、某同学在做微生物实验时，不小心把原褐固氮菌和酵母菌混在一起，为了得到纯度较高的酵母菌，配制好的培养基中应再加入

（

）A．高浓度的食盐

B．硝酸盐C．伊红美蓝溶液

D．青霉素例4、在培养金黄色葡萄球菌时污染了青霉菌，青霉菌菌落周围区域内金黄色葡萄球菌不能生存。下列相关叙述错误的是

（

）A．青霉菌和金黄色葡萄球菌之间的关系为竞争B．要保留金黄色葡萄球菌，可用含高浓度食盐的培养基进行选择C．若金黄色葡萄球菌仍然生存，可能发生了抗青霉素的基因突变D．补充适合金黄色葡萄球菌的营养能保存该菌DD微生物需要的四大类营养要素物质是：（三）培养基的构成1.碳源2.氮源3.无机盐4.水凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。①无机碳源：CO2；NaHCO3；碳酸盐等②有机碳源：糖类、脂肪酸、蛋白质、花生粉饼、石油等⑴概念⑵来源：⑶不同微生物所利用的碳源不同：1.微生物的碳源异养型微生物的碳源为：含碳有机物（有机碳）自养型微生物的碳源为：含碳无机物（无机碳）①无机氮源：N2、NH4+氨盐、NO3-硝酸盐、NH3。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。2.微生物的氮源⑴概念：⑵来源：⑶固氮微生物所利用的氮源是：3.特殊要求培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(微生物生长不可缺少的微量有机物）如维生素、某些氨基酸、碱基)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。氮气碳源、氮源、生长因子的比较来源常用原料功能碳源CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等糖类构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养生物的主要能源物质氮源N2、NH3、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏和蛋白胨等铵盐、硝酸盐等合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基酶、核酸等的组成成分1.无菌范围：①实验操作空间,操作者的手、衣着消毒.②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行.④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触.超净工作台二.无菌技术：防止外来杂菌的污染耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min2.消毒与灭菌：灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g三.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：1mol／lNaoH调制微碱5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基㈡纯化大肠杆菌：1.纯化的方法：（1）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次画线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体，这就是菌落。（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环_______在_______旁冷却接种环，并打开棉塞将试管口通过火焰.将已______的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划__________条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。.将试管通过火焰，并塞上棉塞火焰冷却三至五灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的_______开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。末端烧红将平板_____放入培养箱中培养。

倒置划3个平板1个不划线（空白对照）问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：