血液生理试验复习过程

血液生理试验[实验原理]血液抗凝后，经离心，将出现分层。上面无色（或淡黄色）透明的部分为血浆，下面红色部分为红细胞，在红细胞之上有一薄层灰白色部分为白细胞和血小板。下部压紧的血细胞占全血的体积比称为红细胞压积，又叫红细胞比容。若不加抗凝剂任血液自然凝固或去纤维蛋白，就可区别血清、血块及纤维蛋白。[实验对象]哺乳动物（种类不限）[实验材料]草酸盐抗凝剂、或10g/L肝素，75%酒精，温氏分血管，酒精灯，离心机，天平，注射器，长针头，干棉球，带有开叉橡皮管的玻棒，烧杯等。[实验方法与步骤]1．温氏分血管比容测定草酸盐抗凝剂配成水溶液，取适量该溶液（根据取血量确定抗凝剂溶液用量，如草酸钾，每1mL血需加1-2mg。配制10%水溶液，每管加0.1mL则可使5-10mL血液不凝固），放入大试管，烘干后备用。取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管2～3次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不使血细胞破碎，制成抗凝血。用带有长注针头的注射器，取抗凝血2mL将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液至刻度10cm处。离心：将分血管以3000r/min离心30min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心5min，第二次读取红细胞柱的高度，如果读数与前次相同，表明红细胞已被压紧。该读数即为红细胞比容值。例如，读数为4.2cm，即表示100mL血液中红细胞容积占42mL，或者以4.2乖以10即得到红细胞比容的数值。[注意事项]1．选择抗凝剂必须考虑到不使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。2．血液与抗凝剂混合时应避免剧烈振动而引起红细胞破裂。3．操作过程应在2小时内完成，以免溶血和水分蒸发。抗凝血加入到分血管中应避免产生气泡，影响读数的准确性。[思考题]1．血液由哪些成分组成，各有什么生理作用。2．血浆和血清有何区别，如何制备？3．测定红细胞比容的实际意义是什么？

[实验目的]熟悉用比色法测定血红蛋白的方法。[实验原理]血红蛋白测定的方法有多种，最常用而最简单的是比色法。由于血红蛋白的颜色，常随结合的氧量多少而改变，因而不利于比色，但血红蛋白与稀盐酸作用后，能使亚铁血红素变成不易变色的棕色的高铁血红蛋白，用水稀释后可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白含量。通常以每100毫升血液中血红蛋白的克数来表示。实验二血红蛋白的测定[实验对象]哺乳动物（种类不限）[实验材料]沙里血红蛋白计、抗凝血、0.1mol/LHCl、蒸镏水、棉球等。

[方法及步骤]①用滴管加5～6滴0.1mol/L

HCl到刻度测定管内,至管下方刻度“2”或10%处。②用血红蛋白吸管吸取血液至20μL处，用脱脂棉仔细揩去吸管外的血液。③将吸血管中的血液轻轻吹到测定管底部的盐酸中，反复以上清吸吹3次，使吸管壁上的血液全部进入测定管中。在吸吹时尽量避免产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，将血液与盐酸充分混合，静置10min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。④把比色管插入标准比色箱，使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，同时对着自然光用肉眼进行比色，直至溶液的颜色与标准比色板的颜色相同为止。⑤读出管内液体凹面所在的刻度，可以是相对值，也可以是绝对值，可参照血红蛋白计的使用说明书。国产沙里氏血红蛋白计通常100%相当于14.5g，如液体表面在刻度70%处，要计算其绝对克数，可用下列比例求得：x:14.5=70:100,x=10.15。[注意事项]1．要准确用吸血管吸取和转移20μL血液至比色测定管中，若吸入过快，有盐酸或血液被吸入采血管的乳胶头，则应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤过程是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。2．血液和稀盐酸的作用时间不能少于10min，不然血红蛋白不能充分变成高铁血红蛋白，使结果偏低。3．比色应在散射自然光下进行，避免在黄色灯光下进行比色，以免影响结果。4．加蒸馏水时，开始可以多加几滴，随后逐滴加入，并用玻棒不断混匀，以防稀释过度。[实验目的]学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。[实验原理]红细胞在高渗溶液内会因失去水分而皱缩；反之，在低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞膨胀。如溶液渗透压继续下降，红细胞会膨胀而破裂，并释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力称为红细胞渗透脆性。实验三红细胞的脆性试验[实验对象]动物种类不限。[实验材料]抗凝血，1%氯化钠溶液，蒸馏水，10mL小试管，试管架，滴管，1mL移液管。[实验方法及步骤]1.先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl，稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2ml。试管号123456789101%NaCl1.401.301.201.101.000.900.800.700.600.50蒸馏水0.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50NaCl浓度0.700.650.600.550.500.450.400.350.300.252．加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀（用拇指堵住试管口，顺序将试管缓慢倒置二次。3．在室温下静置1～2h。4．观察结果：依据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞溶血程度。①试管内液体下层为浑浊红色，上层为无色透明，表明无红细胞破裂，未发生溶血。②试管内液体下层为浑浊红色，上层出现透明红色，表示部分红细胞破裂，称为不完全溶血。③试管内液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。5．红细胞渗透脆性范围：根据前述原理判断出开始溶血及刚开始完全溶血的试管，前者的NaCl浓度为红细胞的最小抗力，后者为红细胞的最大抗力。