标准解读

《NY/T 569-2002 马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法》是一项农业行业标准，旨在规定用于检测马传染性贫血病毒抗体的琼脂凝胶免疫扩散试验的具体操作流程和技术要求。该标准适用于兽医实验室对疑似感染或携带马传染性贫血病毒的马匹进行血清学诊断。

根据此标准，实验前需准备抗原、阳性对照血清、阴性对照血清以及待检样品等材料，并确保所有试剂均处于有效期内。其中，抗原应为经过国家认可机构鉴定合格的产品；阳性对照血清来自已知含有高滴度抗体的马匹；而阴性对照则来源于未感染该病毒的健康个体。

制备琼脂板时，按照一定比例将琼脂粉溶解于磷酸盐缓冲液中加热至完全融化后冷却至约50℃左右倒入平皿内形成均匀薄层。待琼脂凝固后，在其上打孔并加入相应样本及对照品。随后将平板置于湿润环境中保持恒定温度（通常为37℃）下孵育一段时间直至出现清晰可见的沉淀线为止。

对于结果判读，若在待测样本孔与抗原孔之间形成一条连续且明显的白色沉淀带，则表明该样本中含有针对马传染性贫血病毒的特异性抗体，即判断为阳性反应；反之，若无明显沉淀线或仅见模糊不清者则视为阴性。此外，每次实验都必须同时设立正负对照以验证整个过程的有效性和准确性。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2002-08-27 颁布
  • 2002-12-01 实施
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NY/T 569-2002马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法_第1页
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文档简介

5S.11.220NY141中华人民共和国农业行业标准NY/T569-2002马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法Agargeiimmunodiffusiontestforequineinfectiousanemia2002-08-27发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布

NY/T569-2002马传染性贫血病（equineinfcetiousanemia,简称EIA)是马属动物以反复发作、贫血和持线病毒血症为特征的传染性疾病，被世界动物卫生组织WorldOrganizationforAnimalHealth(英）,OfficeIn-ternationaldesEpizooties(法),IEJ列为B类疫病，我国农业部列为二类动物疫病。本病是由反转录病毒科、慢病毒属的马传贫病毒(ELAV)引起的，经吸血昆虫传播本标准规定的琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)诊断方法，是根据（IE《诊断试验和变苗标准手册》（2000年版)和我国实际情况制定的·技术上一致。该法简便特异，在国际贸易中为指定的诊断方法。本标准的附录八为规范性附录。本标准由农业部童牧兽医局提出本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口，本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人：相文华、沈荣显。

NY/T569-2002马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法1范围本标准规定了马传染性贫血病的琼脂凝胶免疫扩散技术要求。本标准适用于马传染性贫血病的诊断和检疫2琼脂凝胶免疫扩散试验2.1材料准备2.1.1抗原：检测用抗原按说明书使用2.1.2血清：“）检验用标准阳性血清：能与合格抗原在12h内产生明显致密沉淀线的传贫马血清,做8倍以上的稀释仍保持阳性反应者为宜。小量分装，冻结保存。b）被检血清：不含防腐剂和抗凝剂的被检马血清。2.1.3pH7.20.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS），配制方法见附录A规范性附录)。2.2操作方法2.2.1制备琼脂板2.2.1.1取优质琼脂1.0g,直接放入含有万分之一硫柳汞的100ml.的PBS中，用热水浴溶化混勾2.2.1.2将直径90mm的平血放在水平台上，每平血倒入热溶化琼脂液15mL～18mL,厚度约2.5mm左右，注意不要产生气泡,冷凝后加盖,把平血倒置，防止水分蒸发，放在普通冰箱中可保存两周左右。根据受检血清样品多少亦可采用大、中、小三种不同规格的玻璃板。10cmX16cm的玻璃板加注热琼脂液40mL:6cm×7cm的加注11mL:3.2cm×7.6cm的加注6mL.配成的琼脂液，可装瓶中用胶塞盖好,以防水分蒸发，待使用时，现溶化现制板.2.2.2打孔反应孔现用现打。在坐标纸上画好七孔型图案。把坐标纸放在带有琼脂板的平血或玻璃板下面,照图案在固定位置上用金属管打孔，将切下的琼脂片取出，勿使琼脂膜与玻璃面离动。抗原孔及外周孔孔径均为5mm,孔间距3mm(见图1

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