标准解读

《LY/T 2347-2014 刚竹属DNA扩增片段长度多态性(AFLP)分析方法》是一项针对刚竹属植物的分子标记技术标准，旨在通过AFLP技术对不同种类或个体间的遗传差异进行鉴定。该标准详细规定了从样品采集到数据分析的整个流程，确保实验结果的准确性和可重复性。

首先，在样品采集阶段，标准明确了如何选择和处理用于提取DNA的竹子材料。要求选取健康、无病虫害的新鲜叶片作为样本，并且在采集后尽快进行低温保存以防止DNA降解。

接下来是DNA提取部分，提供了具体的步骤来获得高质量的基因组DNA。这一步骤对于后续的酶切反应至关重要，因为只有纯度高且完整的DNA才能保证酶切效果良好。

然后进入AFLP核心操作环节——限制性内切酶消化与接头连接。通过使用特定的限制性内切酶切割DNA，形成具有粘性末端的小片段；随后将特制的人工合成接头连接到这些片段上，为下一步的选择性扩增做准备。

选择性扩增是指利用带有选择性碱基的引物对已连接接头的DNA片段进行PCR扩增。这一过程能够放大那些携带特定序列信息的目标片段，从而使得即使是非常细微的遗传变异也能被检测出来。

最后，扩增产物需要经过电泳分离，并采用银染法或其他合适的方法显色，以便于观察和记录。根据条带的位置及数量差异，可以构建出各个样品之间的亲缘关系图谱。

此标准还强调了实验过程中需要注意的一些细节问题，比如严格控制反应条件（温度、时间等），以及合理设置对照实验以排除假阳性或假阴性的干扰。通过遵循这套标准化的操作流程，研究人员能够更有效地利用AFLP技术开展刚竹属植物分类学研究、种质资源评价等工作。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2014-08-21 颁布
  • 2014-12-01 实施
©正版授权
LY/T 2347-2014刚竹属DNA扩增片段长度多态性(AFLP)分析方法_第1页
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文档简介

ICS6502020

B65..

中华人民共和国林业行业标准

LY/T2347—2014

刚竹属DNA扩增片段长度多态性AFLP

()

分析方法

MethodofDNAamlificationframentlentholmorhismAFLP

pggpyp()

forPhyllostachysbamboo

2014-08-21发布2014-12-01实施

国家林业局发布

LY/T2347—2014

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准的附录为规范性附录

。

本标准由全国竹藤标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC263)。

本标准起草单位国际竹藤中心北京林业大学中国林业科学研究院亚热带林业研究所

:、、。

本标准主要起草人李雪平高志民牟少华陈敏袁金玲

:、、、、。

Ⅰ

LY/T2347—2014

刚竹属DNA扩增片段长度多态性AFLP

()

分析方法

1范围

本标准规定了刚竹属Phyllostachys竹种的提取酶切连接扩增实验步骤及采用的仪器

()DNA、、、

设备

。

本标准适用于刚竹属竹种多态性的分析

DNA。

2试剂

21所用化学试剂如没有特殊说明均为分析纯

.,。

22提取液细胞裂解液

.DNA:1mol/LTris-HClpH8.2、(1mol/LTris-HClpH7.5,0.25mol/LED-

氯化钠与按混合在使用前加入亚硫酸钠至终浓

TApH8.0,5mol/L,2%CTAB)5%SLS5∶5∶2,

度为

0.02mol/L。

23三氯甲烷异戊醇

.∶=24∶1。

24异丙醇

.。

25乙醇无水乙醇加蒸馏水定容到

.70%:70mL100mL。

26氯化钠称取氯化钠用蒸馏水溶解后定容到

.5mol/L:29.22g,100mL。

27溴化乙锭称取溴化乙锭用蒸馏水溶解后定容到

.0.5mg/mL:5mg,10mL。

28变性缓冲液去离子甲酰胺二甲苯青溴酚

.:50mL,EDTA(0.5mol/L,pH=8.0)1mL,FF0.125g,

蓝

0.125g。

29硼酸定容到

.10×TBE:Tris108.0g,55.0g,0.5mol/LEDTA(pH8.0)40mL,1000mL。

210丙烯酰胺溶液甲叉双丙烯酰胺丙烯酰胺混合加水定容到

.40%:2.0g,38.0g100mL。

211过硫酸胺溶液过硫酸胺加水定容到

.10%:1.0g10mL。

3仪器

31仪具有功能温度精度

.PCR(touchdown,±0.2℃)。

32移液器

.。

33低温离心机以上

.4℃(max14000r/min)。

34水浴锅

.。

35电泳仪可满足测序

.(DNA)。

36紫外分光光度计

.。

37分析天平

.。

38摇床

.。

4试验步骤

41DNA提取

.

按照附录的方法提取和检测竹子基因组电泳检测主带完整

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