课题2月季花药培养

课题2月季的花药培养知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体加倍植株（2N）特点：1、明显缩短育种年限2、后代植株都为纯合子正常植株（2N）花丝囊状结构，内有很多花粉。（一）被子植物的花粉发育1、雄蕊一、基础知识花药：花粉囊：大多数被子植物的花药是由4个花粉囊（少数植物为2个）。

当花粉囊中有大量的花粉母细胞（小孢子母细胞）。花粉：花粉粒是由花粉母细胞经过减数分裂而形成，因此，花粉粒是单倍体的生殖细胞。小孢子母细胞4个小孢子（四分体时期）2、被子植物的花粉发育过程减数分裂1个小孢子（单核居中期）1个小孢子（单核靠边期）单核期花粉管细胞核生殖细胞核花粉粒（双核期）有丝分裂生殖细胞将再进行一次有丝分裂，形成两个精子。①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）。②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个花粉管细胞核和两个精子。同一个花粉粒中的两个精子和花粉管细胞核的基因型相同？了解：思考：如果小孢子母细胞的染色体是2N，则精子的染色体是多少？移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根（二）产生花粉植株的两种途径两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。(三)、影响花药培养的因素1、材料的选择①不同植物的诱导成功率很不相同；②同一植物的不同生理状况；（花期早期－初花期）③合适的花粉发育期；（单核期）不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难；为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花都不易选做实验材料。2、培养基的组成3、其他因素亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度等。二、实验操作（一）材料的选取（二）材料的消毒（三）接种和培养（一）材料的选取从花药看：初花期

从花粉看：单核期从花蕾看：完全未开放

通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。方法一：醋酸洋红法(最常用)方法二：焙花青-铬矾法（某些植物的花粉细胞核不易着色）花粉细胞内有染色体，易被碱性染料着色染成红色。这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。（二）材料的消毒无菌水冲洗3～5次

花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾消毒即可。（三）接种和培养1、剥取花药在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药。注意：①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织。②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。2、接种立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。3、培养温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

①培养条件：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。长出愈伤组织时则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。②培养：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。4、鉴定和筛选

在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体组数目变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）。三、结果分析与评价

3、接种是否成功1、选材是否恰当

选材是否成功是花药培养成功的关键，应通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。2、无菌技术是否过关如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。

如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。例1：某二倍体植物是杂合体，图为其花药中未成熟花粉在适宜的培养基上培养产生完整植株的过程。据图回答：（1）图中①表示的是该花粉培养过程中的:过程，②表示的是

过程，X代表的是

，③表示的是

过程，④表示的是诱导

过程。脱分化再分化胚状体分化生根（2）图中从愈伤组织形成完整植株的途径有两条，具体通过那一条途径主要取决于培养基成分中

的种类及其浓度配比，最后获得的来源于为成熟花粉的完整植株都称为

植株（甲）。未成熟花粉经培养能形成完整植株，说明为成熟花粉有

。（3）对植株进行

，才能使其结实产生后代（乙），否则植株甲只有通过

的方式才能产生后代（丙）。乙、丙两种植株中，能产生可育花粉的是

植株，该植株群体中每一植株产生可育花粉的基因组成