微生物的实验室培养2014XU

选修一《传统发酵技术的应用》《微生物的培养和应用》生殖方式：

二分裂细菌的形态球菌弧菌杆菌螺旋菌放线菌单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构酵母菌和霉菌孢子—生殖细胞病毒的结构病毒的增殖：专题

微生物专题微生物概念及分类微生物培养微生物分离和计数微生物应用一、微生物概念及分类1、概念：是指自然界中那些形态微小、结构简单，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚的生物。第1节微生物的实验室培养选修一专题2

课题1.微生物的实验室培养一、基础知识（一）微生物1、概念：是指自然界中那些形态微小、结构简单，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚的生物。2、包括：没有细胞结构的病毒、原核生物界、真菌界（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履虫、变形虫属真核生物）生物细胞生物动物植物真菌原生生物非细胞生物真核生物原核生物细菌放线菌支原体衣原体蓝藻病毒微生物————酵母菌、霉菌、蘑菇等菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。几种菌落及其形态微生物的菌落特征因种而异.专题2课题1.微生物的实验室培养一、基础知识(笔记）(一)微生物：1、微生物包括没有细胞结构的_______、原核生物、___菌（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履虫、变形虫属真核生物）2、菌落:（1）概念：单个或少数细菌等在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的子细胞群体，叫做菌落。（2）应用：鉴定、分离、计数病毒真思考回忆:*组成细胞的主要元素有哪些?

C、H、O、N、P、S*是否还需要其它元素？

C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg等大量元素；Fe、Mn、Cu、Zn、B、CL、等微量元素*细菌等微生物的细胞也应需要这些元素。C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg、Fe、Mn等碳源水氮源无机盐（二）培养基1、概念：人们按照微生物对营养物质的不同需要，配制出供其生长繁殖的营养基质。思考：配制培养基的基本原则（确定培养基配方的依据）_________________________2、营养成分（营养要素）多数培养基都含有水、无机盐、碳源、氮源等四类营养物质，在提供上述几种营养物质的基础上，培养基还应满足微生物对PH、特殊营养物质以及氧气的需要。根据微生物的营养需要配制CC（二）培养基1、配制培养基的基本原则（确定培养基配方的依据）__________________________(2、多数培养基都含有_____________________等四类营养物质，还应满足微生物对______、特殊营养物质以及________的需要。3、最常用的碳源是____________；蛋白胨或牛肉膏可以为细菌提供___________类营养物质)根据微生物的营养需要配制水、无机盐、碳源、氮源葡萄糖氮源和碳源笔记PH氧气2.微生物所需的营养要素碳源氮源(特殊营养物质)水无机盐无机碳源：CO2、碳酸盐—自养型有机碳源：糖类、脂肪等—异养型固氮菌：N2硝化细菌：NH3

其他：铵盐、硝酸盐、尿素、蛋白胨维生素、氨基酸、碱基等笔记3、培养基的种类

液体培养基（工业生产）固体培养基（分离计数）（1）根据物理性质

半固体培养基（观察运动，鉴定菌种）

选择培养基（2）根据用途

鉴别培养基（3）化学成分学案P1(加大量琼脂)(加少量琼脂)合成培养基天然培养基分离菌种鉴别菌种成分已知成分未知划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途鉴别培养基3、培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基选择培养基1）加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌2）不加氮源的无氮培养基分离固氮菌3）不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物4）加入青霉素等抗生素的培养基（依据标记基因）筛选导入了重组DNA的受体细胞单克隆抗体的制备选择培养基（笔记）选择培养基筛选、分离的细胞加入青霉素无氮培养基无碳培养基依标记基因，加入某种抗生素等酵母菌、霉菌等真菌固氮菌自养型细菌导入了重组DNA的受体细胞思考：1、所有的培养基都必须含碳源、氮源、水、无机盐吗？2、培养基中的营养要素，除了水以外的无机物只能是无机盐？3、CO2既是自养型生物的碳源也是能源物质？4、利用动物细胞培养液培养病毒，行吗？否；可以无碳源，也可无氮源否；碳源和氮源也可能是无机物否；光能或化学能病毒无细胞结构，只能寄生在活细胞中生存。所以，要利用活细胞培养病毒。（三）无菌技术防止外来杂菌入侵。方法：消毒(温和)灭菌(强烈)煮沸:巴氏：80℃下煮15min化学药剂:

75%酒精、氯气紫外线消毒：灼烧灭菌：干热灭菌：。高压蒸气灭菌：获得纯净培养物的关键：

无菌技术1、获取纯化培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。2、无菌措施：1)对实验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒；对将培养用的器皿、接种工具和培养基进行灭菌2)实验操作时已灭菌材料等应避免与周围物品接触；实验操作应在酒精灯火焰附近进行；接种工具等应在酒精等火焰上灼烧后使用1、获得纯净培养物的关键是什么？2、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面?(15页）3、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？防止杂菌污染消毒：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌消毒的方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或

80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线或化学药物消毒灭菌的方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）灭菌；（3）消毒。旁栏思考（三）无菌技术1、获得纯净培养物的关键是？

防止外来杂菌的入侵2、消毒与灭菌的区别？消毒是杀死部分对人体有害的微生物；灭菌是杀死所有微生物。3、最常用的灭菌方法是？

高压蒸汽灭菌。笔记1）、科学家们用脉胞霉（一种真菌）为材料，进行科学研究，用基本培养基来培养脉胞霉。基本培养基中所含的营养要素一般包括：

_______________________________2）、酵母菌可用于食品工业的废水处理，废水中的淀粉或废糖可为酵母菌的生长提供________类营养物质。3）、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作为______类营养物质加入到牛奶中的。4）、硝化细菌的碳源、氮源、能源依次为__________________________________。碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源CO2、NH3、NH3氧化释放的化学能练习：二、实验操作1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1、计算2、称量操作步骤3．溶化

4．灭菌：高压蒸汽灭菌

5．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。

阅读:P16(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基目的：______灭菌平板冷凝后，为什么要将平板倒置？防止冷却后形成的水珠滴落到培养基上，造成污染1、在液体培养基中加入_____________而制成固体培养基.2、制备培养基的操作排序①溶化（使各种原料、琼脂等加热溶化）②灭菌③调PH值④计算（各成分用量）⑤称量⑥倒平板（冷却至50℃，将平板倒过来放置）正确的操作顺序：_____________3、平板倒置的目的_____________________________________________________琼脂（凝固剂）④⑤①③②⑥防止冷却后形成的水珠滴落到培养基上，造成污染6．无菌检查：

将灭菌的培养基放入37℃的恒温箱中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。

二、实验操作1、在液体培养基中加入______________而制成固体培养基.3、平板倒置的目的___________________________________________________琼脂（凝固剂）

滴落到培养基上，造成污染笔记2、制备培养基的操作排序：___________________________________________________________（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基防止冷却后形成的水珠计算——称量——溶化——调PH值——灭菌—倒平板（二）纯化大肠杆菌1、接种：将要培养的菌种接入到培养基上的过程叫接种。微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。思考讨论:1、在接种前如何检测培养基是否被污染？2、调查湖水中细菌污染情况，要使实验结果更可靠，对照组如何处理？3、使用过的培养基（物），在遗弃前应如何处理？将未接种的培养基在无菌条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。在另一平板上接种等量的无菌水灭菌；防止培养物污染环境。

平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.微生物的恒温培养思考讨论：1、平板划线法接种的目的是什么？2、平板划线法接种的用途？3、平板划线法能不能调查某种微生物的种群密度（计数）？获得单一菌落。微生物的分离、鉴定、筛选。不能；一是不知道接种菌液的量，其次也没有全部形成单一菌落。思考讨论：1、稀释涂布平板法接种的目的是什么？2、稀释涂布平板法接种的用途？3、平板划线法能不能调查某种微生物的种群密度（计数）？获得单一菌落。微生物的分离、鉴定、筛选、计数。不能；一是不知道接种菌液的量，其次也没有全部形成单一菌落。10-110-410-510-6平板划线法稀释涂布平板法相同点：分散出单细菌形成单菌落来分离菌种不同点：分别通过划线和稀释分散出单细菌，稀释涂布平板法除分离菌种外还可以对微生物计数（二）纯化大肠杆菌1、将准备培养的菌种放到培养基中的过程叫做__________。2、微生物接种的最常用方法是________________和_________________3、能够获得单一菌落的(分离）接种方法有_______________和________________4、能够测定样品中活菌数的接种方法是_______________平板划线法稀