复旦大学开题报告演示版

大学2003级硕士研究生开题报告研究生导师

TherapeuticEffectsofCapsuleTONGBIonHumanKneeOsteoarthritisandItsInfluenceonthemRNAExpressionOfChondrocytesTypeIICollageninARatModel

痛痹胶囊对大鼠膝软骨细胞Ⅱ型胶原基因转录的影响及治疗膝骨关节炎临床疗效观察

课题名称研究目的与意义文献综述选题依据科研假说与技术构思研究方法和技术路线指导人员计划进度研究基础预期成果目录文献资料2023/2/44研究目的证明痛痹胶囊通过整体调节作用能够上调软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达、调节关节软骨基质胶原的生成与降解的平衡、促进软骨细胞增殖

证明痛痹胶囊的软骨保护剂样作用

通过随机、平行、对照临床观察进一步证明其临床疗效

2023/2/45骨关节炎定义骨关节炎是以进行性关节透明软骨变性、破坏及丧失，关节软骨及软骨下骨边缘骨赘形成为特征的骨关节病变。骨关节炎的最新定义：在力学和生物学因素共同作用下导致软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨三者降解和合成正常耦联失衡的结果，并伴有不同程度的滑膜炎症。KelleyWN，RuddyS，HarrisED，etal.TextbookofRheumatology.15thed.Philadelphia：Saunders，1997，1369~13822023/2/46国内外研究现状、水平和发展趋势

最新流行病学统计发病机制研究进展治疗进展中医药研究进展讨论2023/2/47最新流行病学统计

全世界大约有1.9亿骨性关节炎患者据世界卫生组织一份调查表明，50岁以上的人群中，各种骨关节炎发病率占60％~70％我国患有OA的人数占总人口的3%美国，总人口中的15%患关节炎，其中43%为ＯＡ，达1600万高发病率骨关节炎发病机制研究进展透明软骨软骨细胞软骨基质胶原蛋白聚糖金属蛋白酶（MMP）IL-1TNF-aNO…….破坏软骨细胞基质胶原蛋白聚糖增龄磨损创伤生化代谢异常免疫紊乱遗传变异等

软骨降解酶（MMPs）细胞因子(IL-1,TNF-,……)等分解合成2023/2/411胶原蛋白

目前能从正常成年关节软骨和软骨细胞培养基中提取的胶原有5种：Ⅱ型胶原、Ⅵ胶原、Ⅸ型胶原、Ⅹ型胶原、Ⅺ型胶原

结构图2023/2/412胶原生理各型胶原在软骨内的排列高度有序，表现在Ⅱ型胶原、Ⅸ型胶原、Ⅺ型胶原组成的软骨内纤维网架结构该网架结构构成软骨的骨架，如遭到破坏，软骨就不能维持正常的结构和功能Ⅱ型胶原构成纤维网架结构中的主体生理状况下，软骨基质胶原的合成和降解维持动态平衡。胶原的合成分细胞内和细胞外两个阶段，受软骨细胞调控。2023/2/413OA关节软骨胶原的变化轻度损伤所致骨关节炎软骨中，软骨细胞代谢活跃，合成代谢增强，Ⅱ型胶原合成增加，同时伴有Ⅲ型胶原增加；中度损伤所致骨关节炎软骨中，Ⅱ型胶原在中间层、深层的合成和变性增强，以合成为主；重度损伤所致骨关节炎软骨中，Ⅱ型胶原变性、溶解的速度明显大于合成，使得Ⅱ型胶原纤维的数量明显减少，主要位于单个和簇聚软骨细胞周围2023/2/414OA关节软骨胶原的变化Ⅱ型胶原总量丢失Ⅱ型胶原表达的改变2023/2/415参与OA发病的其他病理机制

软骨降解酶细胞因子自由基免疫紊乱骨内高压2023/2/416治疗进展——非药物治疗(1)病人教育；(2)自我调理；(3)通过电话联系以得到社会支持；(4)减轻体重(如果超重的话)；(5)户外锻炼；(6)物理治疗；(7)增加关节活动范围的锻炼；(8)增强肌力的锻炼；(9)行走的辅助装置；(10)穿刺抽液；(11)选择合适的鞋袜；(12)鞋底外侧加垫(对膝内翻者)；(13)使用支架；(14)职业疗法；(15)保护关节和保存能量；(16)使用日常生活活动的辅助装置。AmericancollegeofRheumatologySubcommitteeonOsteoarthritis.Recommendationsforthemedicialmanagementofosteoarthritisofthehehipandknee.ArthritisRheum，2000，43(9)：1905～1915.

2023/2/417治疗进展——药物治疗控制症状的药物改善病情药物及软骨保护剂晚近，治疗骨关节炎的策略主要集中在：金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）、启动软骨细胞修复和软骨生长的刺激剂、细胞因子抑制剂、NO合成酶抑制剂等。2023/2/418控制症状的药物对乙酰氨基酚——国外推荐首选非甾体抗炎药（NSAIDs）——值得关注的是，一些研究发现某些NSAIDs药如阿司匹林、水杨酸、保泰松、吲哚美辛和萘普生等对关节软骨基质蛋白聚糖合成有抑制作用，加速软骨退化，不利于OA，故不宜选用，至少不应长期使用2023/2/419改善病情药物及软骨保护剂硫酸氨基葡萄糖（维骨力）——许多短程和长程随机双盲对照观察GS治疗膝OA的结果都提示，该产品既能抗炎止痛，又有延缓膝OA发展的作用。被认为是第一个改变OA病情的药物。其他——SOD（自由基）、四环素族抗生素（软骨基质金属蛋白酶抑制物）、葡糖胺聚糖（外源性软骨基质成分）、S－腺苷基蛋氨酸（促进蛋白聚糖合成及软骨细胞分化）、阿仑磷酸盐（固邦，双膦酸盐类，抑制软骨及骨质吸收）、合成基质金属蛋白酶抑制物(U－24522)、转化生长因子B、胰岛素样生长因子－2（促进软骨修复的细胞固子）、VitC、VitK（保护软骨）2023/2/420选题依据中医经典医著记载的治疗骨痹的效方甚多，《备急千金要方》中的“独活寄生汤”具有益肝肾、补气血、祛风湿、止痹痛之功，颇切合骨关节炎的病机。痛痹胶囊是对千古名方独活寄生汤进行化裁，在补益肝肾的基础上重用活血化瘀，兼以祛风除湿、加用化痰、滋阴之品。2023/2/421选题依据前期临床研究表明:20例治疗组与10例维骨力对照组进行比较，痛痹胶囊能明显减少骨关节炎者疼痛、肿胀、压痛程度，疗效较好，治疗组有效率达95%，且无其他不良反应。动物实验证明:痛痹胶囊对致炎大鼠关节炎模型具有明显的抗炎、镇痛作用，并可改善急性血瘀大鼠的血液流变学，具有一定的活血化瘀作用；对老年鼠血液SOD和MDA含量的影响实验表明痛痹胶囊具有较好的抗氧化作用2023/2/422

课题研究内容实验研究临床研究理论研究2023/2/423痛痹胶囊血清对体外培养大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原基因转录的影响实验研究

痛痹胶囊血清药理学研究

软骨细胞培养

软骨细胞损伤模型的制备

痛痹胶囊血清对软骨细胞增殖的影响痛痹胶囊血清对软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

2023/2/424痛痹胶囊血清对软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

引物设计与合成总RNA的提取RNA的浓度测定总RNA逆转录成第一链cDNAPCR扩增1％琼脂糖凝胶电泳2023/2/425临床研究诊断标准中医症候标准病情进展分期病情轻重分级纳入标准随机分组治疗方法观察指标疗效判定标准统计学处理2023/2/426病例数计算

采用样本含量计算软件NCSS2002进行

根据文献的资料及前期的临床工作，4周治疗后WOMAC指数下降16，标准差在20.5为标准疗效评估，每组30例患者的样本，power为80%，α为0.05是已足够能比较出痛痹胶囊组和对照药组间的统计学差异

理论上计算最少每组30例的样本量已可以达到80%的统计权力

2023/2/427盲法设计

试验设计为随机、西药软骨保护剂（维骨力，意大利罗达药厂）对照，因为西药对照药维骨力如做成与中药对照同剂型及外观、用量，则存在生物利用度差异，难以双盲。但在负责

WOMAC评估的医生中仍进行盲法设计。

2023/2/428随机化与随机数字隐藏

将全部入选患者按就诊顺序编号随机数字来自NCSS2004专业软件，采用区组随机化分组方法采用“信封法”将随机化分配序列进行隐藏

2023/2/429相关要点说明

根据OA治疗周期和相关国际临床试验（CLASS和VIGOR试验），拟定本次临床研究疗程为4周。§SilversteinFE,FaichG,GoldsteinJL,etal.Gastrointestinaltoxicitywithcelecoxibvsnonsteroidalanti-inflammatorydrugsforosteoarthritisandrheumatoidarthritis:theCLASSstudy:arandomizedcontrolledtrial.JAMA.2000;284:1247-1255.§BombardierC,LaineL,ReicinA,etal.Comparisonofuppergastrointestinaltoxicityofrofecoxibandnaproxeninpatientswithrheumatoidarthritis.VIGORstudygroup.NEnglJMed.2000;343:1520-1528.目前治疗OA替代医学类药物停药后追踪的报道较少，且缺乏与西药对比的数据，因此本研究有理由在停药后设置2周的追踪时间

2023/2/430观察指标和方法

★安全性观察①一般体检项目血、尿、便常规化验，试验前后各查一次。肝、肾功能检查，试验前后各查一次。②不良反应。★疗效性观测——相关症状、体征，VAS疼痛指数，WOMAT关节炎指数，起效时间。2023/2/431可行性分析

本课题是在大量查阅国际国内最新相关文献资料，并结合相关的前期工作的基础上，采用了多种学科、多种技术相结合的综合性研究方法，从而保证了立题的新颖性、科学性和可靠性。理论上依据充分本课题实验中所需应用的细胞培养、引物设计、RT－PCR、血清药理学等先进技术，通过前期实验，均能熟练掌握。完全具备完成本研究的技术力量。2023/2/432计划进度第一阶段：（2005.5～2005.6）准备阶段，调研及资料检索。按课题设计首先申购实验用各种试剂（盒）。准备临床病例观察表。第二阶段：（2005.6～2006.3）按照课题设计，完成全部实验及病例临床观察工作。第三阶段：（2006.3-2006.5）资料汇总、总结、处理数据、分析与研究成果撰写论文。2023/2/433预期研究成果

理论上系统总结骨关节炎中医文献、病因病机、治法方药，提出骨痹发病“肾虚血瘀”新见解，发展中医理论，为痛痹胶囊防治骨关节炎提供