仪器分析实验

仪器分析实验漆红兰honglanqi@8202仪器分析实验组成：共6个实验，分6个大组光3个实验（紫外-可见、荧光、原子吸收）紫外分光光度法测定蛋白质含量（2组）荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量（2组）原子吸收光谱法测定钙最佳实验条件的选择（1组）电1个实验循环伏安法测定亚铁氰化钾（2组）色谱2个实验（气相色谱、液相色谱）苯、甲苯、乙苯混合物的分离与定量分析（1组）反相色谱法测定样品中尼泊金甲酯的含量（1组）仪器参观1个实验（1组，附加）pH计的使用（2组，附加）注意事项：实验预习报告（检查、记录数据、签字）实验报告（数据记录和处理）实验服、实验室卫生、实验室安全和路途安全实验小组（6组，轮流实验，6周）仪器分析定性分析定量分析方法的评价指标

一、标准曲线二、灵敏度三、精密度四、检出限五、准确度一、标准曲线1.标准曲线

标准曲线又称校准曲线，是被测物质的浓度或量与仪器响应信号的关系曲线，用标准溶液或标准物质绘制。2.标准曲线的绘制标准曲线是依据一系列被测物质的标准溶液浓度（或含量）和其响应信号测量值来绘制的。只要在与校准曲线的相同的实验条件下测得样品溶液的峰电流，即可在校准曲线上求得样品溶液中被测物质的浓度C。3.线性范围校准曲线的直线部分所对应的被测物质的浓度或量的范围叫作该方法测定这种物质的线性范围。一般说来，好的分析方法应有较宽的线性范围。图1-1伏安法校准曲线曲线的横坐标是试液的浓度C纵坐标是峰电流这种线性关系可以用一元线性回归法求出b叫回归系数即回归直线斜率，也就是方法的灵敏度。r叫相关系数，表示线性关系的好坏。r值在+1.0000与-1.0000之间。当越接近1，则y与x之间的线性关系就越好。二、灵敏度（Sensitivity）

被测物质单位浓度或单位质量的变化引起响应信号值变化的程度，称为方法的灵敏度，用S表示。根据国际纯粹与应用化学联合会（简称IUPAC）的规定，灵敏度是指在测定浓度范围中标准曲线的斜率。在分析化学中使用的许多标准曲线都是线性的，一般是通过测量一系列标准溶液来求得，可用下式表示：式中：dc

和dm

分别为被测物质的浓度和质量的变化量，dx为响应信号的变化量。标准曲线的斜率越大，方法的灵敏度就越高。三、精密度(precision)

使用同一方法，对同一试样进行多次测定所得结果的一致程度（重复性和再现性）。重复性同一分析人员在同一条件下平行测定结果的精密度又称重复性。再现性不同实验室所得测定结果的精密度又称再现性。精密度常用测定结果的标准偏差s或相对标准偏差量度。

四、检出限（DetectionLimit）

某一方法在给定的置信水平上可以检出被测物质的最小浓度或最小质量称为这种方法对该物质的检出限，以浓度表示的称为相对检出限，以质量表示的称为绝对检出限。检出限是一个定性概念，只表明此浓度或量的响应信号可以与空白信号相区别。在检出限附近不能进行定量分析。对于光学分析方法，可以与空白信号区别的最小信号XL。以下式确定式中Xb为空白信号的平均值，sb为空白信号的标准偏差，k为根椐一定的置信水平确定的系数，IUPAC(国际纯粹及应用化学联合会)建议k值取3。能产生响应信号为XL-Xb的被测物质的浓度或量就是方法对该物质的检出限，用DL表示。式中S是方法的灵敏度。1位有效数字检出限与灵敏度关系灵敏度高，精密度好，检出限低灵敏度是分析信号随被测物质含量变化的大小，与仪器信号的放大倍数有关检出限与空白信号波动或仪器噪音相关，具有明确的统计学含义。检出限是方法灵敏度和精密度的综合指标五、准确度(Accuracy)样品含量的测定值与样品含量真实值(亦称真值)相符合的程度称为准确度。准确度常用相对误差量度。式中x为样品含量的测定值，μ为样品含量的真值。准确度是分析过程中系统误差和随机误差的综合反映，它决定着分析结果的可靠程度。方法有较好的精密度且消除了系统误差后，才有较好的准确度。“3S+2A”，即Sensitivity（灵敏度），Selectivity（选择性），Speediness（速度）,Accuracy（准确度）,Automation（自动化程度）IUPAC建议将精密度、准确度和检出限三个指标作为分析方法的主要评价指标。“3S+2A”用某伏安分析新分析法测定试样中的铅离子浓度，获得如下数据：铅离子浓度(mg/mL)0.0000.0020.0050.0100.0200.0300.040峰电流平均值（nA）1.4800.0420.0520.0760.1640.2280.312铅离子浓度(mg/mL)0.0600.1000.1400.1800.2200.2600.300峰电流平均值（nA）0.4520.7321.0141.2881.4421.4801.500说明：空白溶液测定10次，标准偏差s为0.024(mg/mL，这个值要自己会计算),标准溶液测定次数为3次。（1）试绘制标准曲线；（2）写出标准曲线的一元线性回归方程，确定其线性范围和该方法的灵敏度；3）试计算该方法的检出限。解：（1）利用实验所得数据在Excel软件表中按浓度为A列和峰电流平均值为B列制表。使用Excel软件绘制标准曲线，见图。（2）使用Excel软件绘制线性标准曲线，见图1-3。由图1-3确定一元线性回归方程为I(nA)=6.915c+0.036(c单位为mg/mL),相关系数平方值为0.9997，线性范围为0.02~0.22mg/mL，方法在线性范围内的灵敏度为6.915nA/mg/mL。

线性标准曲线图（3）计算该方法的检出限为：（mg/mL）定量分析方法标准曲线法标准加入法归一化法（色谱）紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。紫外光：10-400nm可见光：400-780nm，可被人们的眼睛所感觉特点：带光谱分子光谱应用：定性分析-最大吸收波长定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）定性分析原理吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状

根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。

标准曲线法：只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。

定量分析原理仪器组成部件各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。光源检测器信号显示记录装置吸收池单色器紫外分光光度法测定蛋白质含量实验目的学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。定性、定量（标准曲线法）

本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。280nm275nm实验原理实验预习预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验步骤。了解TU-1901紫外-可见分光光度计的主要构造。TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管标准蛋白质溶液：3.00mg.mL-1溶液0.9%NaCl溶液，待测蛋白质溶液（牛血清白蛋白）仪器与试剂1.启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。2.在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量，设置测量条件（测量波长等）。3.将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。4.标准曲线的制作。基本操作实验步骤1.吸收曲线的绘制和最大吸收波长的选择：

用吸量管分别吸取1.0mL3.00mg.mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在190-400nm区间，扫描获得吸收曲线。选择最大吸收波长。2.标准曲线的制作

：

用吸量管分别吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL3.00mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在280nm（选定波长下）处分别测定各标准溶液的吸光度A280，记录所得读数。3.样品测定：取待测蛋白质溶液3mL，按上述方法测定280nm处的吸光度。平行测定三份。绘制吸收曲线。以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。3.根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。数据处理分子发光分析法分子发光分析法包括分子荧光分析法，磷光分析法、化学发光分析法和生物发光分析法。实验原理荧光分析法

常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。在稀溶液中，荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系：当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：这是荧光光谱法定量分析的理论依据。a.与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度。b.选择性好。荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。c.所需试样量少、操作方法简便。荧光分析法的特点激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长),化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。荧光光谱激发光谱发射光谱荧光分析仪器

常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成，如下图所示：荧光分析仪器与分光光度计比较主要差别有两点：a.荧光分析仪器采用垂直测量方式，以消除透射光的影响；b.荧光分析仪器有两个单色器，能够获得单色性较好的激发光并消除其它杂散光干扰。液槽显示器单色器检测器I0IIf光源单色器a.光源：在荧光计中常用卤钨灯作光源；荧光分度计常采用高压汞灯或氙弧灯做光源。b.单色器：荧光计的单色器是滤光片，只能用于定量分析；荧光分光光度计采用两个光栅单色器，可获得激发光谱和荧光光谱。c.检测器：荧光计采用光电管作检测器；荧光分光光度计采用光电倍增管作检测器。仪器部件荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量实验目的学习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理。掌握荧光分光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。定性、定量（标准曲线法）

维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。多维葡萄糖粉中维生素B2含量的测定

维生素B2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为525nm。VB2的荧光在pH=6～7时最强，在pH=11时消失。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。多维葡萄糖中含有维生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中维生素C和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B2的测定。实验预习预习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理。了解荧光激发光谱和发射光谱。了解荧光光度计的操作步骤和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。970CRT荧光光度计（上海分析仪器总厂）5mL吸量管1只，2mL吸量管1只，50mL容量瓶7只10.0μg·mL-1VB2标准溶液（置阴暗处保存），冰乙酸（AR），多维葡萄糖粉试样仪器与试剂1.打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。2.仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：激发波长=440nm（选择），发射波长=540nm（选择）。3.样品测定。4.退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。基本操作1.标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定：在六个干净的50mL容量瓶中，分别吸取0.50、1.00、1.50，2.00、2.50和3.00mLVB2标准溶液，各加入2.00mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。任取一份溶液，绘制激发光谱和发射光谱曲线，选择最大激发波长和最大发射波长。在选定的条件下，从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度。2.未知试样的测定:

称取0.15-0.20g多维葡萄糖粉试样,用少量水溶解后转入50mL容量瓶中，加2.00mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。用测定标准系列时相同的条件，测量其荧光强度。实验步骤1.用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线。2.根据待测液的荧光强度，从标准工作曲线上求得其浓度，计算出试样中VB2含量。数据处理1.试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因。2.本实验为何在酸性溶液中测定维生素B2？注意事项和问题原子吸收光谱法原子吸收光谱法(AtomicAbsorptionSpectrometry，AAS)是根据物质的基态原子蒸气对特征辐射的吸收作用来进行元素定量分析的方法。1.特点(1)检出限低，10-10～10-14g；

(2)准确度高，1%～5%；

(3)选择性高，一般情况下共存元素不干扰；

(4)应用广，可测定70多个元素（各种样品中）；2.缺点：难熔元素、非金属元素测定困难，不能进行多元素同时测定。

原子吸收光谱仪（原子吸收分光光度计）主要由锐线光源、原子化器、分光系统、检测系统和电源同步调制系统五部分组成。

原子吸收光谱法测定钙最佳实验条件的选择实验目的学习原子吸收光谱法最佳实验条件选择的方法。掌握火焰原子吸收分光光度计的使用方法。定量（条件选择）

在原子吸收测定中，实验条件的选择直接影响到测定的灵敏度、准确度、精密度和方法的选择性。本实验通过对一系列实验条件（包括燃气的流量比、灯电流、单色器通带宽度以及燃烧器高度和位置）等的选择和优化，选定测定钙的最佳实验条件。

助燃比不同，火焰的温度和性质不同，因而元素的原子化程度不同。通常固定空气流量，改变燃气流量来改变助燃比。在不同助燃比时测定吸光度，吸光度最大的助燃比为最佳助燃比。实验原理燃气、助燃气的流量比火焰的种类燃助比火焰的性质火焰状态应用范围富燃火焰约1：3还原性层次模糊呈亮黄色易氧化而形成难解离氧化物的元素化学计量火焰约1：4中性层次清楚蓝色透明大多数元素皆适用贫燃火焰约1：6氧化性火焰发暗高度缩小金属和不易氧化的元素乙炔-空气火焰的种类

灯电流的选择要从灵敏度和稳定性两方面来考虑。灯电流过大，易产生自吸作用，多普勒效应增强，谱线变宽，测定灵敏度降低，工作曲线弯曲，灯的寿命减小。灯电流低，谱线变宽小，测定灵敏度高，但是灯电流过低，发光强度减弱，阴极发光不稳定，因而谱线信躁比降低。一般的原则是在保证稳定和适当的光强输出的情况下，尽可能选择较低的灯电流。灯电流

通带宽度的选择以能将吸收线和邻近线分开为原则。通带较窄，灵敏度较高，但躁声较大，信躁比不一定高。对许多元素来说，为了得到最大信躁比、较高的灵敏度以及较宽的校正曲线，要求有0.2nm通带宽度。

火焰的部位不同，其温度和还原气氛不同，因而被测元素基态原子的浓度随火焰高度的不同而不同。在实验中通过改变燃烧器高度并测定吸光度，以吸光度最大时的燃烧器高度为最佳燃烧器高度。单色器通带宽度燃烧器高度实验预习预习原子吸收光谱法最佳实验条件选择的方法。了解火焰原子吸收分光光度计的原理和使用方法。TAS-986型原子吸收分光光度计乙炔钢瓶，空气压缩机钙空心阴极灯100.0µg/mL钙离子储备液仪器和试剂1.溶液的配制：5.00µg/mL钙离子标准溶液。准确移取100.0µg/mL钙离子标准溶液5.00mL于100mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。2.最佳实验条件的选择：(1)燃气流量的选择改变乙炔流量为1.2、1.5、1.8、2.0L/min，在每一乙炔流量下测定5.00µg/mL钙离子标准溶液的吸光度。作吸光度-乙炔流量曲线，曲线上最大吸光度所对应的燃气流量即为最佳燃气流量。实验步骤(2)灯电流的选择在选定的最佳助燃比及燃烧器高度条件下，分别在灯电流为1、1.5、2、2.5mA时喷雾5.00µg/mL钙标准溶液，测量吸光度，并观察不同灯电流的稳定性。读数稳定及大的吸光度所对应的灯电流即为最佳灯电流。(3)狭缝宽度的选择在上述选定的实验条件下，将狭缝宽度分别置于0.1nm、0.2nm、0.4nm处，喷雾5.00µg/mL钙标准溶液，测量吸光度。选择不引起吸光度减小的最大狭缝为最佳狭缝宽度。(4)测量结束后用高纯水冲洗原子化器2min，先关乙炔气再关空气。(5)退出工作站，关闭计算机，关闭Tas986电源开关。1.绘制吸光度-乙炔流量曲线，曲线上最大吸光度所对应的燃气量即为最佳条件。2.绘制吸光度-灯电流曲线，读数稳定且大的吸光度所对应的灯电流即为最佳灯电流。3.绘制吸光度-狭缝宽度曲线，吸光度最大处的狭缝宽度为最佳条件。4.综合上述条件，得出测钙的最佳实验条件。数据处理循环伏安法测定亚铁氰化钾实验目的学习固体电极表面的处理方法。掌握循环伏安仪的使用技术。了解扫描速率和浓度对循环伏安图的影响。定性、定量（电流浓度定量关系的验证及其方法应用）铁氰化钾离子-亚铁氰化钾离子氧化还原电对的标准电极电位实验原理电极电位与电极表面活度的Nernst方程峰电流与电极表面活度的Cotroll方程

在一定扫描速率下，从起始电位（-0.2V）正向扫描到转折电位（+0.8V）期间，溶液中[Fe(CN)6]4-被氧化生成[Fe(CN)6]3-，产生氧化电流；当负向扫描从转折电位（+0.8V）变到原起始电位（-0.2V）期间，在指示电极表面生成的[Fe(CN)6]3-被还原生成[Fe(CN)6]4-，产生还原电流。i—E曲线循环伏安法

为了使液相传质过程只受扩散控制，应在加入电解质和溶液处于静止下进行电解。实验前电极表面要处理干净。在0.10mol·L-1NaCl溶液中[Fe(CN)6]的扩散系数为0.63×10-5cm·s-1；电子转移速率大，为可逆体系（1.0mol·L-1NaCl溶液中，25℃时，标准反应速率常数为5.2×10-2cm·s-1）。实验注意事项图形解析从循环伏安图上读取以下数据计算作图并验证以下公式应用电极过程可逆性计算电极面积、扩散系数等电化学参数表面过程实验预习预习循环伏安法的原理。预习循环伏安仪的使用技术。了解扫描速率和浓度对循环伏安图的影响。学习计算电极面积的方法。CHI电化学分析系统；铂盘电极；铂柱电极，饱和甘汞电极；电解池大多电解池以玻璃制造（偶有石英），可以根据需要加工设计成各种形状仪器仪器与试剂试剂0.50mol·L-1K4[Fe(CN)6];1.0mol·L-1NaCl饱和甘汞电极电解池实验步骤1.指示电极的预处理：铂电极用Al2O3粉末（粒径0.05µm）将电极表面抛光，然后用蒸馏水清洗。3.不同浓度K4[Fe(CN)6]溶液的循环伏安图:分别作0.010mol·L-1、0.020mol·L-1、0.040mol·L-1、0.060mol·L1、0.080mol·L-1的K4[Fe(CN)6]溶液（均含支持电解质NaCl浓度为0.10mol·L-1）循环伏安图，扫速为50mV·s-1。4.不同扫描速率K4[Fe(CN)6]溶液的循环伏安图:在0.040mol·L-1K4[Fe(CN)6]溶液中，以10mV·s-1、20mV·s-1、30mV·s-1、50mV·s-1、80mV·s-1、100mV·s-1，在-0.2至+0.8V电位范围内扫描，分别记录循环伏安图。1.从K4[Fe(CN)6]溶液的循环伏安图上，读取ipa、

ipc、、

的值。2.分别以ipa、

ipc对K4[Fe(CN)6]溶液的浓度作图，说明峰电流与浓度的关系。3.分别以ipa

、ipc对v1/2作图，说明峰电流与扫描速率间的关系。4.计算ipa/

ipc的值、值和值；说明K3[Fe(CN)6]在KCl溶液中电极过程的可逆性。数据处理1.实验前电极表面要处理干净。2.扫描过程保持溶液静止。3.设计一测定扩散系数的电化学方法。注意事项和问题分离与分析技术

色谱法是一种分离技术。试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。

气相色谱：流动相为气体（称为载气）；按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱液相色谱：流动相为液体（称为淋洗液）。按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。气相色谱法的特点（1）分离效率高：复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。（2）灵敏度高：可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量.（3）分析速度快：一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。（4）应用范围广：适用于沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。不足之处：不适用于高沸点、难挥发、热不稳定物质的分析。被分离组分的定性较为困难。气相色谱流程1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化干燥管；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；9-热导检测器；10-放大器；11-温度控制器；12-记录仪；1.载气系统：包括气源、净化干燥管和载气流速控制;2.进样系统：进样器及气化室；3.色谱柱：填充柱（填充固定相）或毛细管柱（内壁涂有固定液）；4.检测器：可连接各种检测器，以热导检测器或氢火焰检测器最为常见；5.记录系统：放大器、记录仪或数据处理仪；6.温度控制系统：柱室、气化室的温度控制。高效液相色谱是20世纪70年代初发展起来的一种新型分离分析技术。他是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱理论，在技术上采用高压输压泵、梯度洗脱技术、新型高效填充剂及各种高灵敏度监测器。高效液相色谱与气相色谱比较，可供选择的流动相种类较多，从有机溶剂到水溶剂，既能用纯溶剂又可用二元或多元混合溶剂，并可任意调配比例，通过改变溶剂极性或强度继而改变色谱柱效能、分离选择性和组分的容量因子，最后实现改善色谱系统分离度的目的。高效液相色谱1.分析速度快。2.分离效率高。3.灵敏度高、易于实现操作自动化。4.适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高效液相色谱法的特点高效液相色谱仪流程示意图进样装置

流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：

紫外光度检测器（UV）：最小检测量10-9g·mL-1，对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。最常用的检测器。定性方法：1.利用纯物质定性的方法

利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。

利用加入法定性：将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。2.利用文献保留值定性常用的几种定量方法

（1）归一化法：若试样中含有n个组分，且各组分均能洗出色谱峰，则其中某个组分的质量可按下式计算

特点及要求：归一化法简便、准确；进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大；仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。

（3）外标法外标法也称为标准曲线法。特点及要求：外标法不使用校正因子，准确性较高;

操作条件变化对结果准确性影响较大;

对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。实验目的掌握气相色谱法分离多组分混合物的方法。练习用归一化法定量测定混合物中各组分的含量。苯、甲苯、乙苯混合物的分离和定量分析定性、定量（归一化法）定量方法：归一化法：若试样中含有n个组分，且各组分均能洗出色谱峰，则其中某个组分的质量可按下式计算。了解气相色谱仪的基本结构及操作步骤。掌握利用归一化法分析混合物中各组分含量的方法。实验预习1.色谱仪:气相色谱仪，热导池检测器，微量注射器（10mL）2.色谱柱：2m×5mm3.固定相:15%邻苯二甲酸二壬酯；102白色担体60~80目，载气：氮气4.苯、甲苯、乙苯。三组分混合标准溶液：苯、甲苯、乙苯重量比为：1：1：2。三组分混合样品。仪器与试剂基本操作1.打开电脑主机，再打开气相色谱的模块，启动工作站并初始化仪器。2.开机调试，按下列参考色谱条件将仪器调至所需工作状态。气化室温度：150柱温：100检测器温度：200

3.运行程序，清洗色谱柱，直至基线平稳，然后进样，进行测定。4.测定结束后，依次用纯水、100%甲醇洗涤20分钟，退出主程序，关闭计算机。定性分析：仪器稳定后，用10mL注射器进2.0mL混合样品和5mL空气，记录色谱图（I）。在完全相同的条件下，分别进苯、甲苯、乙苯纯试剂，每次进样2mL试剂，记录色谱图（II），测定校正因子。混合物的定量进2.0mL三组分混合样品，记录色谱图（IV）。实验步骤数据处理1.准确测量色谱图I~IV各峰的保留时间tR和死时间t0,比较个纯是基于混合物中各峰的保留值，确定各峰是什么物质。2.计算甲苯和乙苯的校正保留时间和对苯的保留值。3.测量各峰的峰面积，以苯为标准，求出其余两组分的相对重量校正因子（重量校正因子的文献值为：苯：0.780，甲苯：0.794，乙苯：0.818）4.采用归一化法求出混合物中各组分的百分含量。相对校正因子未知液中甲苯的含量进样量准确与否是否会影响归一化法的分析结果？2.能否从理论上揭示本实验的出峰顺序?3.进样器要充分洗涤。注意事项和问题实验目的了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作。了解反相色