标准解读

《GB/T 35911-2018 伪狂犬病病毒荧光PCR检测方法》是一项国家标准，旨在提供一种用于检测动物样本中伪狂犬病病毒（PRV）核酸的方法。该标准详细规定了使用荧光定量聚合酶链反应技术进行PRV核酸检测的操作流程、试剂要求、仪器设备配置以及结果分析与报告等内容。

根据标准，首先需要准备相应的实验材料和试剂，包括但不限于DNA提取试剂盒、Taq酶混合液、特异性引物及探针等，并确保所有使用的试剂都在有效期内且按照制造商提供的说明正确储存。接着，从疑似感染或携带PRV的动物体内采集样品，如血液、组织液或其他体液等，并通过适当的方法从中提取出总DNA作为后续PCR扩增的目标模板。

在正式开始PCR反应之前，应先设置好对照组以验证整个实验系统的有效性，通常包括阳性对照、阴性对照以及内参对照等。随后，将待测样品与上述已准备好的各种成分按一定比例混合，在特定条件下进行循环加热降温处理，促使目标序列得到指数级放大。此过程中利用荧光标记探针对产物进行实时监测，从而实现对PRV核酸的存在与否及其含量水平的准确判断。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2018-02-06 颁布
  • 2018-09-01 实施
©正版授权
GB/T 35911-2018伪狂犬病病毒荧光PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T35911—2018

伪狂犬病病毒荧光PCR检测方法

Real-timePCRmethodfordetectionofpseudorabiesvirus

2018-02-06发布2018-09-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T35911—2018

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中华人民共和国上海出入境检验检疫局中国农业科学院上海兽医研究所中华

:、、

人民共和国深圳出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院湖南圣湘生物科技有限公司

、、。

本标准主要起草人张强童光志李健熊炜赵和平李树清王艳李国新杨忠苹花群义林颖峥

:、、、、、、、、、、、

王巧全蔡开妹喻正军吴绍强林祥梅

、、、、。

Ⅰ

GB/T35911—2018

伪狂犬病病毒荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了伪狂犬病病毒荧光检测的操作方法

PCR。

本标准适用于伪狂犬病病毒核酸检测

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

猪常温精液生产与保存技术规范

GB/T25172

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

荧光荧光聚合酶链式反应

PCR(real-timepolymerasechainreaction)

Ct值每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数

(cyclethreshold)

脱氧核糖核酸

DNA(deoxyribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶Taq

DNA(DNApolymerase)

缓冲液缓冲液

TETris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)

伪狂犬病病毒

PRV(pseudorabiesvirus)

4仪器

41荧光检测仪

.PCR。

42高速台式冷冻离心机可控温至离心速度可达以上

.:4℃、12000r/min。

43组织研磨器或者研钵

.。

44普通冰箱

.:2℃~8℃。

45普通冰柜以下

.:-20℃。

46超低温冰箱可控温至以下

.:-70℃。

47微量移液器并

.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1000μL,

配备与移液器匹配的吸头

。

48高压灭菌锅

.。

5耗材

51

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