标准解读
《GB/T 35901-2018 猪圆环病毒2型荧光PCR检测方法》是一项国家标准，规定了用于检测猪圆环病毒2型（PCV2）的荧光PCR方法的技术要求。该标准适用于猪只及相关样品中PCV2核酸的定性检测，为兽医诊断、疾病监测及科学研究提供了科学依据和技术支持。
根据该标准，整个检测流程包括样本采集与处理、核酸提取、引物探针设计、反应体系构建以及结果分析等步骤。首先，在样本采集方面，应按照规范操作获取新鲜或冷冻保存的组织、血液或其他体液样本，并确保在运输和储存过程中避免污染。其次，通过合适的商业化试剂盒或实验室自建方案从样本中高效纯化出总DNA，以作为后续扩增模板使用。
对于关键的引物探针设计部分，《GB/T 35901-2018》推荐了几组针对PCV2保守区域的高度特异性序列组合，这些序列经过验证能够准确识别目标病毒而不与其他常见病原交叉反应。此外，还详细描述了如何配制含有热启动Taq酶、dNTPs、MgCl2等成分的标准反应混合物，以及如何设置恰当的循环条件来保证最佳扩增效率。
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- 现行
- 正在执行有效
- 2018-02-06 颁布
- 2018-09-01 实施
文档简介
ICS11220
B41.
中华人民共和国国家标准
GB/T35901—2018
猪圆环病毒2型荧光PCR检测方法
Real-timePCRmethodfordetectionofporcinecircovirustype2
2018-02-06发布2018-09-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
中国国家标准化管理委员会
GB/T35901—2018
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
本标准由中华人民共和国农业部提出
。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口
(SAC/TC181)。
本标准起草单位中华人民共和国上海出入境检验检疫局中国农业科学院上海兽医研究所中华
:、、
人民共和国深圳出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院湖南圣湘生物科技有限公司
、、。
本标准主要起草人张强李健熊炜童光志赵和平花群义李树清杨忠苹李国新王巧全
:、、、、、、、、、、
王艳林颖峥蔡开妹喻正军吴绍强林祥梅
、、、、、。
Ⅰ
GB/T35901—2018
猪圆环病毒2型荧光PCR检测方法
1范围
本标准规定了猪圆环病毒型荧光检测的操作方法
2PCR。
本标准适用于猪圆环病毒型核酸检测
2。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件
。,()。
分析实验室用水规格和试验方法
GB/T6682
猪常温精液生产与保存技术规范
GB/T25172
3缩略语
下列缩略语适用于本文件
。
荧光荧光聚合酶链式反应
PCR:(real-timepolymerasechainreaction)
Ct值每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数
:(cyclethreshold)
脱氧核糖核酸
DNA:(deoxyribonucleicacid)
Taq酶Taq聚合酶Taq
:DNA(DNApolymerase)
缓冲液缓冲液
TE:Tris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)
猪圆环病毒
PCV:(porcinecircovirus)
4仪器设备
41荧光检测仪
.PCR。
42高速台式冷冻离心机可控温至离心速度可达以上
.:4℃、12000r/min。
43普通冰箱
.:2℃~8℃。
44普通冰柜以下
.:-20℃。
45超低温冰箱可控温至以下
.:-70℃。
46微量移液器并
.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1000μL,
配备与移液器匹配的吸头
。
47高压灭菌锅
.。
5耗材
51
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