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文档简介

实验目的：

1.通过实验，掌握无菌操作方法，熟悉烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立的整个过程。2.学习再生体系的建立方法，为掌握其他植物的组织培养奠定基础；同时为转基因技术提供一个平台。实验十烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立

再生体系的建立主要应用于以下几个方面：

1、用于验证植物细胞的全能性。

2、是植物基因工程的重要基础，外源基因转入受体细胞，受体细胞通过脱分化形成愈伤组织，愈伤组织通过再分化形成植株，从而获得转基因植株。

3、也是植物快繁的一种方式，通过诱导愈伤组织再分化，能够在短时间内形成大量的不定芽或胚状体，从而获得大量的植株。实验原理

分化了的植物叶片细胞往往具有全能性，因此将烟草叶片从植株上分离后，给予一定的培养条件，可以诱导叶片细胞脱分化，脱分化的细胞不断分裂就形成愈伤组织，愈伤组织再在合适的培养条件下又能够再分化形成完整植株，烟草愈伤组织的再分化是以不定芽的方式，即愈伤组织先形成不定芽，再由不定芽形成完整植株，从而完成了再生体系的建立。实验步骤一）材料的消毒：1）剪取生长健壮的叶片，最好带有叶柄。2）将整个叶片（包括叶柄）全部浸入70％的乙醇中，不断振荡30s。3）将乙醇倒掉，迅速加入0.1％的升汞，再将整个叶片（包括叶柄）全部浸入0.1％的升汞中，不断振荡10min。4）于工作台上用无菌镊子将上述叶片夹入无菌烧杯中，同时将升汞倒入盛有硫化钠的桶里。5）用无菌水冲洗上述叶片3－5遍，取出后用无菌滤纸吸干，备用。二）接种：在无菌的条件下，取烟草无菌苗的叶片（或上述消过毒的叶片），剪成（0.5～1cm）*(0.5～1cm)大小的小块，接种于诱导培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L中诱导愈伤组织，在此培养基上能诱导出愈伤组织并能够诱导出不定芽。三）不定芽生根：将在愈伤组织中生成的不定芽移栽到1/2MS培养基中，其目的是诱导不定芽生根，使其发育成烟草小植株。

接种第一天

接种第二天，因为外植体细胞开始被诱导脱分化，并不断分裂增殖，造成叶片中央与边缘的细胞分裂不均匀，因此，叶片中央凸起。接种第五天，脱分化细胞不断分裂增殖，形成愈伤组织，表现为叶片边缘泛黄增厚，叶片中央进一步凸起。接种第九天，脱分化细胞不断增值，愈伤组织不断增厚，整个叶片都翘起，并且已经开始再分化形成绿色生长点。第九天（诱导生成愈伤组织）

接种第十九天，绿色生长点进一步发育形成了不定芽，不定芽长度最长可达1cm。第十

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