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文档简介

实验目的:

1.通过实验,掌握无菌操作方法,熟悉烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立的整个过程。2.学习再生体系的建立方法,为掌握其他植物的组织培养奠定基础;同时为转基因技术提供一个平台。实验十烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立

再生体系的建立主要应用于以下几个方面:

1、用于验证植物细胞的全能性。

2、是植物基因工程的重要基础,外源基因转入受体细胞,受体细胞通过脱分化形成愈伤组织,愈伤组织通过再分化形成植株,从而获得转基因植株。

3、也是植物快繁的一种方式,通过诱导愈伤组织再分化,能够在短时间内形成大量的不定芽或胚状体,从而获得大量的植株。实验原理

分化了的植物叶片细胞往往具有全能性,因此将烟草叶片从植株上分离后,给予一定的培养条件,可以诱导叶片细胞脱分化,脱分化的细胞不断分裂就形成愈伤组织,愈伤组织再在合适的培养条件下又能够再分化形成完整植株,烟草愈伤组织的再分化是以不定芽的方式,即愈伤组织先形成不定芽,再由不定芽形成完整植株,从而完成了再生体系的建立。实验步骤一)材料的消毒:1)剪取生长健壮的叶片,最好带有叶柄。2)将整个叶片(包括叶柄)全部浸入70%的乙醇中,不断振荡30s。3)将乙醇倒掉,迅速加入0.1%的升汞,再将整个叶片(包括叶柄)全部浸入0.1%的升汞中,不断振荡10min。4)于工作台上用无菌镊子将上述叶片夹入无菌烧杯中,同时将升汞倒入盛有硫化钠的桶里。5)用无菌水冲洗上述叶片3-5遍,取出后用无菌滤纸吸干,备用。二)接种:在无菌的条件下,取烟草无菌苗的叶片(或上述消过毒的叶片),剪成(0.5~1cm)*(0.5~1cm)大小的小块,接种于诱导培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L中诱导愈伤组织,在此培养基上能诱导出愈伤组织并能够诱导出不定芽。三)不定芽生根:将在愈伤组织中生成的不定芽移栽到1/2MS培养基中,其目的是诱导不定芽生根,使其发育成烟草小植株。

接种第一天

接种第二天,因为外植体细胞开始被诱导脱分化,并不断分裂增殖,造成叶片中央与边缘的细胞分裂不均匀,因此,叶片中央凸起。接种第五天,脱分化细胞不断分裂增殖,形成愈伤组织,表现为叶片边缘泛黄增厚,叶片中央进一步凸起。接种第九天,脱分化细胞不断增值,愈伤组织不断增厚,整个叶片都翘起,并且已经开始再分化形成绿色生长点。第九天(诱导生成愈伤组织)

接种第十九天,绿色生长点进一步发育形成了不定芽,不定芽长度最长可达1cm。第十

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