标准解读

《GB/T 34776-2017 T4 DNA连接酶 酶活及杂质检测方法》是一项国家标准，主要规定了T4 DNA连接酶活性测定以及杂质检测的具体方法。该标准适用于T4 DNA连接酶的质量控制、科学研究和生产过程中对酶活性与纯度的评价。

在酶活性测定方面，标准中描述了一种基于电泳的方法来评估T4 DNA连接酶将两个DNA片段连接起来的能力。具体来说，通过使用已知序列的线性双链DNA作为底物，在一定条件下让T4 DNA连接酶作用于这些底物上，之后利用琼脂糖凝胶电泳分离未连接的DNA片段与已经成功连接形成的环状DNA分子。根据凝胶上不同形式DNA条带的位置及其相对强度，可以计算出T4 DNA连接酶催化反应效率，从而间接反映出酶活性水平。

对于杂质检测，则主要包括蛋白质杂质和其他非特异性核酸内切酶活性的检测两部分内容。前者可通过高效液相色谱法（HPLC）或SDS-PAGE等技术手段实现；后者则需设计特定实验来验证样品中是否存在可能干扰目标酶功能的其他类型核酸酶。例如，可以通过观察加入待测样品后质粒DNA是否发生降解来判断是否有非特异性核酸内切酶污染存在。

整个标准详细列出了实验所需材料、试剂配制方法、操作步骤、结果分析等内容，并给出了相应的质量控制指标要求。这为确保T4 DNA连接酶产品的质量和一致性提供了科学依据和技术支持。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2017-11-01 颁布
  • 2018-05-01 实施
©正版授权
GB/T 34776-2017T4 DNA连接酶酶活及杂质检测方法_第1页
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文档简介

ICS07080

A40.

中华人民共和国国家标准

GB/T34776—2017

T4DNA连接酶酶活及杂质检测方法

T4DNAligase—Detectionmethodsofactivityandimpuritiesofenzyme

2017-11-01发布2018-05-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T34776—2017

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国工具酶工作组归口

(SAC/SWG11)。

本标准起草单位中国测试技术研究院深圳华因康基因科技有限公司福建华灿制药有限公司

:、、。

本标准主要起草人周李华李怀平盛司潼孙登峰谭辉彪黄发灿金虹马丽侠叶德萍李花

:、、、、、、、、、、

王智沈兴中谭和平

、、。

Ⅰ

GB/T34776—2017

T4DNA连接酶酶活及杂质检测方法

1范围

本标准规定了连接酶的活力杂质的检测方法

T4DNA、。

本标准适用于作为分子生物学研究用的连接酶

T4DNA。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

电泳装置

YY/T0087

医用离心机

YY/T0657

移液器检定规程

JJG646

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

DNA连接酶DNAligase

一种封闭链上的缺口酶借助或水解提供的能量催化相邻的核苷酸分子间羟

DNA,ATPNAD3'-

基和磷酸基形成磷酸二酯键

5'-。

注连接酶催化底物可以是或依据酶的类型不同反应中产生高能中间产物的辅助因子可以是

:DNADNARNA。,

或+

ATPNAD。

32

.

T4DNA连接酶T4DNAligase

一种噬菌体基因的编码产物以作为辅助因子催化双链或的磷酸末

T430,ATP,DNARNA5'-

端和羟基末端形成磷酸二酯键

3'-。

注带有分子质量约为来源于转化有连接酶表达载体的E.Coli菌株主要作用是催化

:His-Tag,70ku,T4DNA。

末端之间的连接修复双链核酸中的单链切刻

DNA,。

33

.

酶活力单位unitactivity

在连接酶反应缓冲液中反应条件下能使的经消

20μL1×T4DNA,16℃,30min50%HindⅢ

化的片段端浓度为连接所需的酶量即为活力单位

λDNA[5'0.12μmol/L(300μg/mL)]1。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

聚合酶链式反应

PCR(polymerasechainreaction)。

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