标准解读

《GB/T 34745-2017 猪圆环病毒2型 病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法》是一项国家标准，旨在规范猪圆环病毒2型（PCV2）的实验室检测流程。该标准详细规定了使用SYBR Green Ⅰ作为荧光染料进行实时荧光定量PCR的方法来检测猪圆环病毒2型的具体步骤和技术要求。

首先，在准备阶段，标准明确了所需材料与试剂清单，包括但不限于引物、dNTPs混合物、Taq酶、SYBR Green Ⅰ染料以及用于提取DNA的标准试剂盒等，并强调了实验前所有设备应处于良好工作状态的重要性。

接着，对于样品处理部分，描述了从采集到核酸纯化的整个过程。这其中包括了如何正确地采取生物样本，确保其质量不受污染；以及采用何种方法或工具对收集来的组织液或其他类型标本中的总DNA进行有效分离和纯化。

在反应体系构建环节中，则具体介绍了如何配制适合于SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应的最佳条件下的混合溶液，比如各组分的比例调整及最终体积设定等细节内容。

此外，还详尽说明了运行程序设置，即根据所使用的仪器型号选择合适的温度循环参数，以保证扩增效率最大化同时减少非特异性产物生成的可能性。同时也指出了数据分析时需要注意的关键点，如Ct值计算原则、溶解曲线分析技巧等，帮助实验者准确判断阳性结果并排除假阳性干扰因素。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2017-11-01 颁布
  • 2018-05-01 实施
©正版授权
GB/T 34745-2017猪圆环病毒2型病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法_第1页
GB/T 34745-2017猪圆环病毒2型病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法_第2页
GB/T 34745-2017猪圆环病毒2型病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法_第3页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T34745—2017

猪圆环病毒2型病毒SYBRGreenⅠ实时

荧光定量PCR检测方法

Porcinecircovirustype2—MethodofdetectingvirusbySYBR

GreenⅠreal-timePCR

2017-11-01发布2018-05-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T34745—2017

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位河南农业大学中国动物卫生与流行病学中心

:、。

本标准主要起草人魏战勇郑兰兰邵卫星胡慧陈红英王亚宾王学兵崔保安寇亚楠

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T34745—2017

猪圆环病毒2型病毒SYBRGreenⅠ实时

荧光定量PCR检测方法

1范围

本标准规定了实时荧光定量检测猪圆环病毒型的技术要求

SYBRGreenⅠPCR2。

本标准用于检测猪圆环病毒型核酸适用于临床样品中猪圆环病毒型的快速检测

2,2。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

值循环阈值

Ct:(CycleThreshold)

脱氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

乙二胺四乙酸

EDTA:(EthylenediaminetetraaceticAcid)

磷酸盐缓冲溶液

PBS:(PhosphateBufferSaline)

聚合酶链式反应

PCR:(PolymeraseChainReaction)

猪圆环病毒型

PCV2:2(PorcineCircovirusType2)

仔猪断奶后多系统衰竭综合征

PMWS:(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome)

酶聚合酶

Taq:TaqDNA(TaqDNAPolymerase)

t值解链温度

m:(MeltingTemperature)

4试剂

除非另有规定仅使用分析纯试剂所有试剂均用无酶污染的容器用水处理后高压

,。RNA(DEPC

灭菌分装

)。

41蛋白酶配制见附录保存

.K(A):-20℃。

42裂解缓冲液配制见附录保存

.(A):4℃。

43异硫氰酸胍裂解液配制见附录保存

.(A):4℃。

44平衡酚配制见附录保存

.(A):4℃。

45酚氯仿异戊醇混合液配制见附录保存

.--(25∶24∶1)(A):4℃。

46氯仿异戊醇配制见附录保存

.-(24∶1)(A):4℃。

47氯仿常温保存

.:。

48异丙醇常温保存

.:。

49乙醇用新开启的无水乙醇和灭菌去离子水配制符合

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